成人胰腺干细胞分离及转分化为胰岛的研究

目的 通过对成人胰腺干细胞分离和转分化为胰岛过程的研究以便更进一步了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法 成人胰腺组织以胶原酶消化，密度梯度离心法获得纯化的胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛。导管上皮细胞在体外共培养27d，观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX—1，CK—19蛋白等的表达。结果 上述方法可获得大量胰腺导管上皮细胞。体外培养第1天即可见PDX—1，CK—19阳性细胞，胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后，平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论 用改进的方法可获得大量成人胰腺导管上皮细胞，并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛，可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新途径。     

胶原海绵与兔软骨细胞体外三维培养的实验研究

目的 观察用人胎盘Ⅰ型胶原海绵作为兔软骨细胞体外三维培养支架时，软骨细胞形态学特征和功能及该支架的吸附性和组织相容性。方法 将新生兔原代和传代软骨细胞接种于人胎盘Ⅰ型胶原海绵进行体外培养，用光镜和扫描电镜观察细胞形态和结构及支架的吸附性和组织相容性，用免疫组化观察细胞Ⅱ型胶原合成。结果 以胶原海绵作为支架的传代软骨细胞能维持其形态学特征及细胞功能，该支架有较好的吸附性和组织相容性。结论 人胎盘Ⅰ型胶原海绵可作为软骨细胞体外三维培养较好的支架材料。     

从肝脏的组织再生理解肝细胞癌的产生

肝细胞性肝癌以其高发病率和高恶性行为而著称，占我国癌症死亡的第二位。尽管流行病学资料已强烈提示乙肝病毒的感染及其它致癌因子的作用与肝细胞癌的发生具有相关性，但这种相关关系是如何建立起来的，近几十年来分子生物学的研究至今没有提出令人信服的解释，但却使我们对肝细胞癌发生机制的认识过于复杂化了。本文从肝的组织发生和组织再生入手，结合乙肝病毒感染后肝组织的病理发展过程及当今干细胞研究的最新结论，从发育生物学观点探讨了肝细胞癌发生的机制。这一模式使得肝细胞癌若干令人费解的生物学现象，譬如低分化状态、AFP的表达、端粒酶激活、病毒的低复制或不复制及病毒蛋白的低表达或不表达状态、染色体结构的紊乱及（或）突变、肝癌的多中心性起源等，变得易于理解。尤其重要的是，这一模式使得我们有理由研究如何通过改变肝癌组织的微环境来诱导癌细胞向正常细胞分化，而达到治愈肝细胞癌的目的。     

细胞骨架肌动蛋白表达质粒转染内皮细胞不同方法的比较

目的　筛选适合于人脐静脉内皮细胞的转染方法 ,为进一步转染其他目的基因打下基础。　方法　以质粒pEGFP Actin为外源性基因 ,分别用脂质体介导的转染法、DEAE 葡聚糖转染法和电穿孔转染法转染人脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4 )。比较转染后的细胞死亡率和细胞转染率。　结果　 (1) 3种不同方法转染后 12h ,细胞死亡率均为 4 % ,至 6 0h时DEAE 葡聚糖转染的细胞死亡率上升至 5 0 %。 (2 ) 3种方法均能使ECV 30 4获得 95 %的转染率 ,脂质体介导的转染法荧光强度强于电穿孔转染法。　结论　脂质体转染法和电穿孔转染法用于ECV 30 4 ,有较好的稳定性和重复性 ,可作为研究外源性蛋白作用于内皮细胞分子机制的技术手段     

成人胰腺干细胞转分化为胰岛的研究

目的：通过对成人胰腺干细胞转分化为胰岛过程的研究以便更深入了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法：成人胰腺组织经胶原酶消化后,用密度梯度离心法将胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛分离、纯化,导管上皮细胞即具有转分化潜能的干细胞,在体外先后以CMRL1066和无血清DMEM／F12培养液共培养27d,在培养的不同时间点取样本于光镜和电镜下观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX－1,CK－19蛋白等单抗的免疫组化染色,并测定培养液中的淀粉酶和胰岛素含量。结果：上述方法可获得大量以往在胰岛分离时丢弃的胰腺导管上皮细胞。经体外一定条件的培养后,第1天即可见PDX－1,CK－19阳性细胞,胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后,平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论：成人胰腺的导管上皮具有干细胞潜能并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛,用此方法获得大量的胰岛可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新的途径。     

干细胞移植治疗重症肌无力的机制及应用现状

干细胞移植能重建免疫平衡、诱导免疫耐受,已作为自身免疫病的重要治疗手段在临床上广泛应用。重症肌无力作为典型的自身免疫病,其移植治疗目前以自体造血干细胞移植为主,亦有异基因造血干细胞移植的案例,均取得了较好的疗效。间充质干细胞移植作为新的手段,大量的基础研究已显示了其潜在价值,正逐步向临床应用过渡。     

肝脏干细胞的临床应用

干细胞的研究成为当今关注的热点,其中肝脏干细胞的研究更是令人瞩目.在现代细胞生物学、分子生物学及遗传学研究的推动下,对肝脏干细胞的基础研究,及其在临床上的应用有了较大的进展,本文对近年来的主要进展进行了综述.     

骨髓基质干细胞分化来源肝细胞移植的细胞准备及组织学观察

目的 探讨大鼠骨髓基质干细胞向肝细胞分化后体外标记方法及移植肝细胞的肝内组织学表现。方法 分离大鼠骨髓基质细胞，在体外诱导分化为成熟肝细胞。将5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入后的肝细胞移植入已行部分肝切除大鼠体内，分别应用免疫组织化学和免疫荧光方法观察受体肝脏内移植细胞的形态和功能。结果分化成熟肝细胞在BrdU掺入培养后细胞核染色可见特异性棕褐色标记；肝细胞移植后肝组织切片BrdU染色可定位移植细胞；白蛋白抗体染色显示移植细胞具有功能活性。结论 骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞移植后形态功能稳定，是进行肝细胞移植的理想细胞来源。     

乳腺癌干细胞逃逸化疗机制的研究

目的探讨乳腺癌干细胞与乳腺癌化疗失败的相关性。方法测定9例人乳腺癌组织标本和MCF-7中不同细胞亚群的MDR1表达和化疗药物在体外对不同细胞亚群的杀伤效果,以及化疗药物干预后乳腺癌干细胞含量和MDR1表达的变化情况。结果人乳腺癌原代细胞中的MDR1表达主要见于乳腺癌干细胞;化疗后MCF-7中乳腺癌干细胞比例由32.62%升至58.79%～89.21%(P<0.01),同时乳腺癌干细胞MDR1的表达也上升了5.45～25.30倍(P<0.01)。结论乳腺癌干细胞在乳腺癌化疗中占有重要的地位,它不但比其他乳腺癌细胞更容易在化疗中发生治疗逃逸,并且能够通过变异获得耐药性,而化疗后乳腺癌干细胞的自我更新加速将促进乳腺癌的复发。     

c-kit在人肝硬化及肝细胞肝癌组织中的表达及意义

目的探讨肝脏祖细胞标志物c-kit在人肝硬化及肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法对30例肝硬化、40例肝细胞肝癌标本及3例正常组织标本进行常规组织学观察以及c-kit、CD45免疫组化染色,对肿瘤细胞的分化程度及肝硬化组织门静脉炎症程度进行分型和评分,分析c-kit表达与肝硬化及肝细胞肝癌的临床病理特征的联系。结果正常肝脏中c-kit染色阴性。20／30例肝硬化中发现c-kit（＋）细胞,位于门脉周围区域和纤维间隔内,个别阳性细胞整合到成熟胆管,肝硬化结节中没有发现c-kit（＋）细胞。19／40例HCC组织中存在c-kit （＋）肿瘤细胞,在肿瘤细胞之间或肿瘤结节周围分散分布。HBsAg及Anti-HBc在c-kit（＋）与c-kit （-）HCC之间表达有显著性差异（χ^2=5．063,P〈0．05;χ^2=6．667,P〈0．05）。c-kit表达与肿瘤的分化程度紧密相关（χ^2=10．384,P〈0．05）,分化程度越低,c-kit表达越高。结论骨髓来源的肝脏祖细胞参与了部分肝硬化病变过程中的肝再生及HCC的形成和发展,c-kit表达情况对于判断HCC预后有一定意义。