音猬因子调控BMSCs表达和分泌VEGF及bFGF的实验研究

目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至第3代,分别用含0、10、100、200 ng/mL rShh-N的L-DMEM培养BMSCs,作为A、B、C、D组。培养12、24、48、72 h后行ELISA法检测各组上清液中VEGF和bFGF的浓度,实时荧光定量PCR法检测各组VEGF和bFGF mRNA的表达水平。结果在基因表达水平上,D组各时间点的VEGF和bFGF mRNA表达量均明显高于A组(P<0.05),且在12、48 h表达量高于24、72 h(P<0.01);C组在各时间点均促进bFGF mRNA表达(P<0.05),在24～72 h促进VEGF mRNA表达(P<0.05),且在72 h时表达量均最高(P<0.01);B组在12 h抑制VEGF mRNA表达(P<0.05),48 h和72 h表现出促进作用(P<0.05),在12～48 h明显促进bFGF mRNA表达(P<0.05),且在48 h时的表达量最高(P<0.01)。在蛋白水平上,D组各时间点VEGF和bFGF分泌量均高于A组(P<0.01);C组在24～72 h VEGF和bFGF分泌量明显多于A组(P<0.05);B组在12 h和48 h抑制VEGF的分泌(P<0.05),24 h增加其分泌作用(P<0.05),而在24 h和48 h促进bFGF的分泌(P<0.05)。各组在48 h和72 h时的VEGF和bFGF分泌量明显多于12 h和24 h(P<0.05)。结论 rShh-N可促进BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF,为进一步探讨rShh-N和MSCs联合应用于治疗缺血性相关疾病以及促进骨修复重建的可行性提供了实验依据。     

Sonic Hedgehog信号通路在眼科的应用进展

Sonic Hedgehog（Shh）信号通路与动物胚胎发育及细胞增殖分化密切相关。我们主要综述Shh信号通路在眼球的发育、眼球多种组织细胞的再生和修复、眼科多种疾病发生、发展及治疗的研究及应用。     

Hedgehog signalling in vascular development

The Hedgehog family of proteins are powerful morphogens mediating embryonic development as well as adult morphogenesis and carcinogenesis. For example, excess hedgehog activity has been implicated in basal cell carcinoma, medulloblastoma and rhabdomyosarcoma. More recently, hedgehog signalling has been implicated in angiogenesis. While hedgehog signalling in adult angiogenesis may constitute a simple recapitulation of that in embryonic development, it should be appreciated that Hedgehog signalling occurs in embryonic angiogenesis in different developmental contexts. This article reviews the role of Hedgehog signalling in both embryonic and postnatal vascular development. The temporal importance of a window of hedgehog dependent angiogenesis during development is emphasised and illustrated using a whole mouse embryo culture system.     

Sonic hedgehog and Glis famliy expression in the human neonatal of congenital esophageal atresia and tracheoesophageal fistula

目的 研究Sonic hedgehog基因及Gli家族在人类先天性食管闭锁并气管食管瘘(esophageal atresia and tracheoesophageal fistula,EA-TEF)的表达特点,探讨EA-TEF病因及发病机制的可能影响因素.方法 食管吻合术中留取22例EA-TEF患儿近端食管盲端及远端气管食管瘘管组织,7例行HE染色,10例行real-time RT-PCR处理,5例行免疫荧光染色处理.观察食管盲端及气管食管瘘管形态上的变化及各指标的差异.结果 ①形态学:瘘管组织内皮下可见粘液腺体,肌层稀疏且肌肉组织结构紊乱;②Shh表达:食管盲端组织中可见表达,瘘管组织中未有表达;③Glis表达:Gli-1、Gli-3mRNA表达无差异,Gli-2mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05),瘘管中表达低于食管盲袋.结论 气管食管瘘组织具有气管源性特征.EA-TEF的发生可能与Shh信号通路表达下调有关.Gli-2的功能缺失在EA-TEF的发生中可能发挥重要作用.     

大鼠失舌神经对舌味蕾Shh表达的影响

目的：探讨SD大鼠失舌神经对舌味蕾Shh表达的影响。方法：216只SD大鼠随机分为3组即正常组、单侧失神经组和双侧失神经组,每组各72只。腹腔注射麻醉后,正常组于下颌磨牙舌侧切开显露舌神经后直接缝合口底黏膜,单侧失神经组暴露并剪除右侧舌神经约0.5cm,双侧失神经组暴露并剪除双侧舌神经各0.5cm。分别于术后6h、12h、1d、2d、3d、5d、10d、15d、20d、1个月、2个月、3个月时处死动物,切取舌前2/3组织,以免疫组织化学法及原位杂交法检测味蕾Shh（sonic hedgehog）基因及蛋白的表达。结果：大鼠失舌神经支配后,舌味蕾Shh的表达逐渐降低,一侧失神经不影响健侧Shh的表达;在一定时间内,单侧失神经组可观察到术侧舌味蕾Shh表达的恢复,而双侧失神经组未见恢复。结论：SD大鼠失舌神经后,舌味蕾Shh表达明显减弱。     

Cadmium-induced postaxial forelimb ectrodactyly: association with altered sonic hedgehog signaling

Administration of CdSO₄ to C57BL/6 mice at day 9.5 of gestation induces a high incidence of postaxial forelimb ectrodactyly in the offspring. We propose that Cd²⁺ exposure impairs the process of anterior/posterior formation in the limb bud, a process that is directed by Sonic hedgehog (Shh) signaling. We show that exposure of the mouse embryo to Cd²⁺ disrupts Shh signaling as measured by polarizing activity of mouse limb bud ZPA grafted to a host chick wing, and activity of a Gli:luciferase reporter exposed to limb bud lysates. Yet the expression of Shh and its translation are not affected by Cd²⁺ exposure. We propose that teratogen exposure affects the processing of Shh in the cells in which it is made.     

Sonic Hedgehog信号通路在胎肺发育和肺部疾病中的研究进展

Sonic Hedgehog(SHH)信号通路不仅在胚胎期发育起重要作用,而且在生后保持组织或器官的完整和功能发育中起重要作用.近年来在肺部疾病中发现SHH信号通路异常激活,提示SHH信号通路可能在肺部疾病中起一定作用.     

恒河猴骨髓源性神经样细胞分化分子机制的基础研究

目的 探讨神经发育音猬因子(SHH)诱导恒河猴骨髓间质细胞(BMSCs)向神经样细胞分化的丝裂原活化蛋白激酶信号分子变化. 方法 密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞,应用Westem-blot方法检测SHH诱导细胞内信号蛋白变化,免疫组化方法观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂对细胞诱导过程的影响. 结果 SHH诱导恒河猴BMSCs分化为神经样细胞分化过程,细胞内激酶p38在加入诱导液5 min后即被激活,随着时间的延长持续升高,1h达到最高峰,诱导前、后p38的总量未见变化;而磷酸化的ERKl/2被抑制,5 min时即开始减少,在2h内逐渐降低,诱导前、后ERKl/2的总量未见变化. 结论 MAPK激酶系统参与SHH诱导恒河猴MSCs分化为神经样细胞分化过程,p38被激活,而ERK被抑制.