大鼠慢性同种移植肾病肾组织中Smad7的表达及意义

目的研究大鼠慢性同种移植肾病肾组织中Smad7的表达及意义。方法制作原位肾移植大鼠模型,分别于4周、8周、12周、16周及24周处死大鼠,检测24h尿蛋白定量、肾功能;移植肾组织标本切片行光镜检测;免疫组织化学与免疫印迹、逆转录-多聚酶链反应方法检测肾组织中Smad7蛋白、Smad7mRNA的表达;免疫印迹方法检测肾组织p-smad2／3蛋白的表达水平,逆转录-多聚酶链反应方法检测肾组织转化生长因子-81mRNA的表达。结果移植组大鼠尿蛋白定量、血清肌酐水平于移植后16周时显著增高,24周时更为显著。Smad7蛋白在移植组逐渐降低,24周时降至最低,为对照组的15％。Smad7mRNA在移植后4周即升高,随着移植时间逐渐延长,24周时为对照组的2．73倍（P〈0．01）;p-smad2／3在移植后随疾病进展逐渐升高,24周时达高峰。免疫组织化学结果显示Smad7主要表达在小管间质。相关分析显示,肾移植大鼠Smad7蛋白表达水平与24h尿蛋白定量、血清肌酐水平、肾间质纤维化程度呈负相关（P〈0．05,P〈O．01）。结论Smad7蛋白表达下调在慢性同种移植肾病发病机制中起重要作用。     

胰岛素对烫伤血清诱导骨骼肌成肌细胞凋亡的调控作用

目的 探讨胰岛素对烫伤大鼠血清诱导大鼠骨骼肌成肌细胞株L6凋亡的调控作用及机制.方法 体外培养L6细胞,按照随机数字表法分为对照组、烫伤血清组、胰岛素组和烫伤血清+胰岛素组.在上述4组细胞培养液中分别添加体积分数20％正常大鼠血清、体积分数20％烫伤大鼠血清、体积分数20％正常大鼠血清+100 nmol/L胰岛素、体积分数20％烫伤大鼠血清+100 nmol/L胰岛素,孵育48 h.行Hoechst 33258染色,于倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并计数凋亡细胞;行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双标记染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞磷酸化(p一)蛋白激酶B(Akt)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bax、Bcl-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( caspase-3)的蛋白表达量.对实验数据行组间或配对t检验.结果 (1)倒置荧光显微镜下可见,烫伤血清组凋亡细胞为每视野(59.6±3 9)个,显著多于对照组、胰岛素组、烫伤血清+胰岛素组[每视野(4 9±2.6)、(5 5±2 1)、(19.7±2 3)个,t值分别为28.53、29.86、21.53,P值均小于0.01].(2)流式细胞仪检测结果显示,烫伤血清组细胞凋亡率为(18.5±1.8)％,明显高于对照组、胰岛素组及烫伤血清+胰岛素组[(1.1±0 6)％、(1 5±0 3)％、(7.8±0.6)％,t值分别为22.41、22 83、13 92,P值均小于0 01].(3)蛋白质印迹检测显示,烫伤血清组Bax蛋白表达量(1.12±0.63)及活化caspase-3蛋白表达量(2.15±0.51)明显高于对照组(0.16±0 03、0.21±0.03,t值分别为3 80、10 69,P值均小于0 01),p-Akt蛋白表达量(0.20±0.03)明显低于对照组(0 42±0 07,t=-8.46,P＜0.01);Bcl-2及p-PI3K蛋白表达量(0.19±0 03、0.17±0.03)与对照组(0.26±0 09、0 28±0.07)接近(t值分别为-2.73、-1.14,P值均大于0 05).与烫伤血清组比较,烫伤血清+胰岛素组Bax蛋白表达量(0.40±0.14)和活化caspase-3蛋白表达量(0.83±0.18)明显降低(t=-3.23,P ＜0.05;t =6.66,P ＜0.01),Bcl-2、p-Akt及p-PI3K蛋白表达量均升高(0.39±0.10、0 78±0 03、0.47±0.12,t值分别为4.07、18.71、5 05,P＜0.05或P＜0.01).结论 烫伤大鼠血清可显著促进骨骼肌成肌细胞凋亡,胰岛素能通过PI3K/Akt信号途径抑制细胞凋亡.     

蛋白激酶C信息通道与阻塞性黄疸患者免疫功能评估的关系

目的研究蛋白激酶C(PKC)信息通道在阻塞性黄疸(阻黄 )患者机体发病机理中的作用. 方法从51例阻黄患者和16例正常对照者的外周静脉血中分离和纯化淋巴细胞胞浆及胞膜部分PKC,然后采用同位素(γ-32P-ATP催化活性测定法检测它们的活性. 结果(1)阻黄患者外周血淋巴细胞PKC的总活性较正常健康人明显增强(r=0.64, P＜0.01),且胞膜部分PKC活性占总活性的百分值较正常组也明显升高(r=0.63 ,P＜0.05) .(2)阻黄患者淋巴细胞PKC的活性与血清黄疸的程度(T-BIL)显著正相关(r=0.67,P＜0.01),与血清可溶性白介素-2受体(sIL-2R)浓度显著正相关(r=0.58,P＜0.01). 结论 PK C信息通道的激活与黄疸程度有关,且可能参与了阻黄T淋巴细胞的活化,在阻黄机体的免疫调节及病情评估中可能有重要意义.     

严重烧伤患者应用重组人生长激素对糖和蛋白质代谢的影响

目的 分析重组人生长激素（rhGH)对严重烧伤患血糖及蛋白质代谢的影响。方法 对24例应用rhGH治疗的严重烧伤患的血清总蛋白、白蛋白及血糖升高发生率进行比较分析。并对同期未用rhGH患血糖及蛋白质的变化进行对比分析。结果 严重烧伤患应用rhGH后血清总蛋白、白蛋白较用药前明显升高,并高于同期对照组。伤后2周内血糖升高,特别是伤后1周内明显升高,伤后0－3d、4－8d、8－14d的血糖升高发生率分别为52．38％、50．24％、20．00％。伤后1周内、2周内及2周后开始应用rhGH其血糖升高发生率分别为100％、50％、0。结论 严重烧伤患应用rhGH能促进机体蛋白质合成,但伤后早期应用rhGH对血糖影响较大,伤后2周应用rhGH是较适合的时机。     

胆道肿瘤组织中p62和p21表达的临床意义

目的 探讨原癌基因C－myc,H-ras蛋白产物P62和P21在胆管癌、胆囊癌和胆道胆囊良性病变中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法（ABC法）,检测30例胆管癌,28例胆囊癌和30例胆道良性病变中P62和P21的表达水平。结果 30例胆管癌中,P62和P21过度表达阳性主分别为66.7%和63.3%,而胆管良性病变阳性率分别为10％和0,二者差异有显著性意义（P＜0.05),28例胆囊癌中,P62和P21过度表达阳性率,分别为42.8%和57.1%,而胆囊良性病变仅为10％和5％。二者差异比较有显著意义（P＜0.05)。同时也显示,胆管和胆囊恶性病变中P62和P21过度表达程度与病理组织学相一致,与原发癌灶的大小、淋巴的转移有显著相关性。结论 胆管癌、胆囊癌中P62和P21水平呈现过度表达,与病理类型、恶性程度、癌灶大小及淋巴转移有关,对其诊断、鉴别诊断及预后的判断有一定的参考价值。     

In-situ hybridization studies of protein kinase C α and β I isoforms in human diabetic nephropathy

Background. Hyperglycemia is the most important contributor to the development of diabetic nephropathy (DN). The activation of protein kinase C (PKC) caused by hyperglycemia is implicated in the pathogenesis of DN. PKC, which comprises a family of enzymes, plays a role in many signal transduction pathways and is involved in the regulation of cell growth and differentiation. However, the precise role of PKC in the progression of human DN is not fully understood. Methods. To evaluate the pathological role of PKC in DN, we examined the mRNA expression levels of PKC α and PKC β I isoforms in normal renal tissues and in renal tissues affected by DN. Tissues from open renal biopsies were obtained from 20 type 2 diabetic patients with DN. The expression levels of PKC α and PKC β I mRNA in kidneys with DN and in normal human kidney (NHK) were evaluated by in-situ hybridization, using digoxigenin-labeled oligonucleotide probes. Results. Cells positive for PKC α and β I mRNA were mainly observed in glomeruli, and some mRNA was also detected in the tubulointerstitium. The percentages of glomerular cells positive for PKC α and β I mRNA were higher in kidneys with DN than in NHK. In the glomeruli of kidneys with DN, the percentage of cells positive for PKC β I mRNA, but not the percentage of cells positive for PKC α mRNA, tended to be decreased with the degree of mesangial expansion. Conclusions. Our results suggest that the expression of mRNA for PKC α and/or β I may be associated with the progression of DN. Received: March 26, 2001 / Accepted: September 17, 2001     

Factors affecting renal hydrogen ion excretion capacity in healthy children

In 560 healthy German children and adolescents aged 2.8–22.0 years from the DONALD (Dortmund Nutritional and Anthropometric Longitudinally Designed) study, the relationship between urine pH and renal net acid excretion (mmol/day/1.73 m²) was analysed. A quadratic model showed the best fit (r ²=0.608). Using logistic regression analysis three parameters (urinary phosphorus excretion, total protein intake and urinary ratio of potassium and sodium) had a significant effect on renal hydrogen ion excretion capacity characterised by the probability of high or low net acid excretion with respect to the urine pH value. Urinary osmolality, in contrast to what has been seen in a previous experimental study with low birth weight infants, along with sex and age had no significant independent effects on renal net acid excretion with respect to the urine pH value over the range of osmolalities observed. In healthy children and adolescents a low fluid intake with high urinary osmolality does not at least substantially decrease the renal capacity of hydrogen ion excretion. Received: 7 April 2000 / Revised: 15 December 2000 / Accepted: 15 December 2000     

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

目的:探讨胰腺癌与癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的改变及其蛋白表达的特点,以及其与胰腺癌发生发展的关系。方法:分别采用免疫组化SP法及甲基化特异PCR(MSP)检测46例人胰腺癌和癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平,并结合临床资料进行分析。结果:胰腺癌中p16蛋白表达率为41.3%(19/46),而癌旁组织表达率为95.7%(44/46),两者有差异显著性(P<0.01)。p16蛋白阳性的19例胰腺癌标本中均未检出基因甲基化;p16蛋白缺失的27例标本中有18例检出基因甲基化,甲基化率为39.1%。p16基因甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.05)。p16基因表达及其启动子区甲基化的发生率与胰腺癌的大小,患者性别﹑年龄的差异无显著意义(P>0.05),但与组织分化程度﹑淋巴结转移﹑PTNM分期有显著意义(P<0.05)。结论:p16基因启动子的异常甲基化可影响p16蛋白的表达,它们与胰腺癌的发生发展有关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。     

初步探索NICU患者血红蛋白和红细胞比容测定值与多蛋白水平的关系

目的:初步探索以神经外科重症监护病房（NICU）患者常见临床化验指标血红蛋白（HB）、红细胞比容（HCT）判断患者多种营养相关蛋白水平的可能性。方法:前瞻性纳入2017年8月-11月天津医科大学总医院NICU收治的急性脑损伤患者43例。采集入组第1天及第7天的血液标本并测评第7天APACHE II评分和SOFA评分,同步检测患者HB、HCT、白蛋白（ALB）,前白蛋白（PA）和转铁蛋白（TR）水平,分析HB与HCT与ALB、PA、TR之间测定值及变化值的相关关系,以及HB、HCT分别与APACHE II评分和SOFA评分之间的相关关系。也记录同步检测的动脉血血气分析中HB和HCT值,分析它们与静脉血检测值相关关系。同时,对HB与HCT测定值之间相关关系也进行分析。结果:患者入组1 d和7 d的HB和HCT的测定值与同时间点ALB、PA和TR的测定值均呈正相关（r=0.521,P=0.000;r=0.306,P=0.004;r=0.420,P=0.000）,且它们的变化值同样也呈正相关（r=0.581, P=0.000;r=0.496,P=0.001;r=0.527,P=0.000）,同时HB、HCT与患者APACHE II评分和SOFA评分呈负相关（r =-0.735,P=0.000;r=-0.607,P=0.005）。HCT与HB实测值之间呈正相关（r=0.942,P=0.000）,动静脉血所测得的HB/HCT值之间呈正相关（r=0.960,P=0.000;r=0.964,P=0.000）。结论:NICU临床常规检测的HB和HCT测定值可代表多蛋白水平,具有临床实用价值。     

仙茅苷对学习无助抑郁模型小鼠海马细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究仙茅苷对学习无助抑郁模型小鼠海马细胞凋亡的作用及其机制。方法 给予仙茅苷预处理,建立小鼠学习无助模型,用行为学实验评估其抑郁样行为,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL）检测海马区细胞凋亡数,免疫荧光法检测海马区胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）荧光强度,免疫印迹法检测海马齿状回（dentate gyrus,DG）区相关蛋白的表达水平。结果 仙茅苷能明显缩短学习无助模型小鼠强迫游泳和悬尾试验中的不动时间（P<0.05）,减少其海马DG区的神经细胞凋亡的数量（P<0.05）,减弱其星形胶质细胞活化（P<0.05）,促进蛋白激酶A磷酸化水平和突触后密度蛋白95的表达（P<0.05）。结论 仙茅苷在学习无助诱导的抑郁样行为中具有保护作用,可能是通过促进蛋白激酶A通路,减少海马DG区的颗粒细胞凋亡和抑制星形胶质细胞活化来介导的。