全文获取类型
收费全文 | 245篇 |
免费 | 20篇 |
国内免费 | 9篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 4篇 |
儿科学 | 2篇 |
基础医学 | 58篇 |
口腔科学 | 2篇 |
临床医学 | 28篇 |
内科学 | 50篇 |
皮肤病学 | 9篇 |
神经病学 | 3篇 |
特种医学 | 3篇 |
外科学 | 21篇 |
综合类 | 45篇 |
预防医学 | 25篇 |
眼科学 | 3篇 |
药学 | 17篇 |
肿瘤学 | 4篇 |
出版年
2022年 | 1篇 |
2020年 | 1篇 |
2019年 | 1篇 |
2018年 | 3篇 |
2017年 | 3篇 |
2016年 | 2篇 |
2015年 | 5篇 |
2014年 | 11篇 |
2013年 | 10篇 |
2012年 | 16篇 |
2011年 | 18篇 |
2010年 | 24篇 |
2009年 | 18篇 |
2008年 | 23篇 |
2007年 | 23篇 |
2006年 | 20篇 |
2005年 | 10篇 |
2004年 | 9篇 |
2003年 | 9篇 |
2002年 | 12篇 |
2001年 | 5篇 |
2000年 | 6篇 |
1999年 | 7篇 |
1998年 | 7篇 |
1997年 | 2篇 |
1994年 | 3篇 |
1992年 | 3篇 |
1991年 | 4篇 |
1990年 | 3篇 |
1987年 | 1篇 |
1986年 | 4篇 |
1985年 | 2篇 |
1984年 | 3篇 |
1983年 | 2篇 |
1980年 | 2篇 |
1977年 | 1篇 |
排序方式: 共有274条查询结果,搜索用时 15 毫秒
91.
目的 克隆表达大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因(SOCS-1).方法 将大鼠SOCS-1全长编码基因的PCR产物,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-ratSOCS-1.转化大肠埃希菌BL-21/DE3,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,应用镍离子金属螯合剂亲和层析柱从表达产物中纯化重组蛋白,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对表达产物和重组蛋白进行鉴定.应用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,抗体滴度达到1:10000以上后进行末次免疫,2周后心脏取血、测定滴度,分离制备免疫血清.用红细胞裂解法制备大鼠外周血白细胞裂解全蛋白.将阴性血清(未用重组蛋白免疫的新西兰大白兔的血清)、免疫血清及兔抗组氨酸标签抗体转入各蛋白条带,用Western免疫印迹检测重组蛋白的免疫学活性.结果 PCR、双酶切及DNA测序分析均表明重组质粒pET-28a(+)-ratSOCS-1构建成功.SDS-PAGE结果可见转化了重组质粒的大肠埃希菌全菌和经超声裂解后的菌体沉淀的样品均在相对分子质量约26 000处有一明显的蛋白条带,经亲和层析获得的纯化重组蛋白有特异的单一条带与上述条带一致,而在超声裂解后的菌体上清中相同位置却未见有蛋白表达条带.Western免疫印迹表明重组蛋白、大鼠外周血白细胞裂解蛋白中相对分子质量约24000的蛋白条带、兔抗组氨酸标签抗体均可被免疫血清识别,分别出现清晰的相对分子质量26000、24 000、26000的反应条带,表明其具有免疫活性.结论 SOCS-1基因可以在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得表达,其纯化重组蛋白具有良好的抗原性和免疫活性. 相似文献
92.
目的 探讨全营养液 (TNA)促进脂质体介导质粒DNA转染结直肠癌细胞的作用。方法 采用细胞培养方法 ,利用绿色荧光蛋白基因做报告基因 ,配制不同转染液 :脂质体加pEGFP N1、TNA加脂质体加pEGFP N1、TNA加pEGFP N1、单纯脂质体、单纯TNA ,分别处理人结肠癌细胞LoVo、人直肠癌细胞HR 8348,检测癌细胞中绿色荧光蛋白的表达。 结果 未加pEGFP N1质粒DNA的单纯脂质体和单纯TNA处理的细胞不表达绿色荧光蛋白。TNA加脂质体加pEGFP N1对LoVo、HR 8348细胞的转染效率分别为 33%、38% ;脂质体加pEGFP N1组的转染效率为 2 2 %、2 4% ;TNA加pEGFP N1组的转染效率均为 1%。TNA加脂质体加pEGFP N1组转染效率高于其他转染组 (P <0 0 1)。质粒DNA对TNA溶液的稳定性无显著影响。 结论 TNA可促进脂质体介导质粒DNA转染结直肠癌细胞 ,将营养支持与基因治疗相结合 ,有望提高对肿瘤患者支持治疗效果。 相似文献
93.
By using the renaturation kinetics technique we tried to get informations about the maintenance of the 2 m plasmid in yeast cells. For this purpose we determined the 2 m plasmid copy number: in various yeast strains, in a special set of mutants, in cells treated with ethidium bromide and cycloheximide and in different yeast strains obtained by transformation with 2 m chimeric plasmids.According to the strain used the proportion of 2m DNA varied from 1.1% to 3.9%, which corresponds to 24 to 88 2 m molecules per haploid genome. The particular multiresistant mutant, where the frequent loss of oligomycine resistance is correlated with the loss of extractible covalently closed circular DNA, contained 39 2 m copies per haploid genome. In the partial revertant oligomycine sensitive all the 2 m DNA sequences were lost. (Less than 0.1 copy per haploid genome.)Ethidium bromide did not affect the 2 m copy number while cycloheximide induces an increase of 36%.When a strain containing 88 2 m DNA copies per haploid genome is transformed with 2 m chimeric plasmids there is no significative change in the total number of plasmid: 36 copies of endogenous and 44 of chimeric plasmid per haploid genome. When 2 m chimeric plasmids were introduced in our 2 m-less strain despite the stability of the transformants, there is only 8 copies per haploid genome. 相似文献
95.
目的 构建表达中国B亚型HIV-1流行株env基因的DNA及重组腺病毒载体疫苗,将其用于预防或治疗HIV感染.方法 构建质粒DNA疫苗pVR-gp160及重组腺病毒载体疫苗rAdV-gp160.将这两种疫苗以不同的方式免疫BALB/c小鼠,分别采用ELISPOT方法 和ELISA方法 检测免疫小鼠中HIV-1 Gp120特异性细胞免疫反应及抗体反应.结果 DNA疫苗单独免疫及DNA疫苗初免/腺病毒疫苗加强免疫的联合免疫方案皆可诱导较高水平的Gp120特异性细胞免疫反应;而在体液免疫方面,各实验组产生的Gp120特异性抗体水平都较低.结论 所构建的DNA疫苗及rAdV疫苗能有效表达Gp160蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应. 相似文献
96.
《International journal of antimicrobial agents》2014,43(6):553-557
This study aimed to detect and characterise clinical Escherichia coli isolates suspected of carrying chromosomally encoded CTX-M enzymes. Escherichia coli (n = 356) obtained in Germany, The Netherlands and the UK (2005–2009) and resistant to third-generation cephalosporins were analysed for the presence of ESBL-/AmpC-encoding genes within the European SAFEFOODERA-ESBL project. β-Lactamases and their association with IS26 and ISEcp1 were investigated by PCR. Isolates were typed by phylogenetic grouping, MLST and PFGE. Plasmids were visualised by S1 nuclease PFGE, and the location of blaCTX-M genes was determined by Southern hybridisation of XbaI-, S1- and I-CeuI-digested DNA. ESBL enzymes could not be located on plasmids in 17/356 isolates (4.8%). These 17 isolates, from different countries and years, were ascribed to phylogenetic groups D (9), B2 (6) and B1 (2), and to seven sequence types, with ST38 being the most frequent (7 phylogroup D isolates). Eleven isolates produced CTX-M-15. blaCTX-M-15 genes were associated with ISEcp1. The remaining isolates expressed the CTX-M group 9 β-lactamases CTX-M-14 (4), CTX-M-9 (1) and CTX-M-51 (1). blaCTX-M probes hybridised with I-CeuI- and/or XbaI-digested DNA, but not with S1-digested DNA, corroborating their chromosomal location. To summarise, only 4.8% of a large collection of ESBL-producing E. coli isolates harboured chromosomal blaCTX-M genes. These isolates were of human origin and belonged predominantly to ST38 and ST131, which possibly indicates the role of these sequence types in this phenomenon. However, heterogeneity among isolates was found, suggesting that their spread is not only due to the dispersion of successful E. coli clones. 相似文献
97.
目的 利用毕赤酵母真核系统表达Ⅰ~Ⅳ型登革病毒E蛋白Ⅲ区(DENV-1~4EDⅢ),获得可分泌表达的重组蛋白ED Ⅲ.方法 PCR分别扩增Ⅰ~Ⅳ型DENV EDⅢ区基因,构建至pPIC9K毕赤酵母表达质粒.酶切线性化后电转化毕赤酵母菌GS115,涂板后经G418梯度浓度筛选,获得多株抗G418 4.0 mg/ml的高拷贝菌株,扩大培养后,利用甲醇诱导分泌表达重组蛋白,表达上清用Ni-NTA亲和树脂纯化后以免疫印迹鉴定.结果 成功构建pPIC9K-DENV-1~4 EDⅢ重组质粒,高拷贝菌株经甲醇诱导后分泌表达Ⅰ~Ⅳ型DENV EDⅢ重组蛋白,纯化后获得的可溶性重组蛋白经变性凝胶电泳,相对分子质量约为12×103,与实际相符.免疫印迹鉴定结果表明该重组蛋白能与抗His单抗和抗Ⅰ~Ⅳ型DENV小鼠血清特异结合.结论 成功通过毕赤酵母高效分泌表达Ⅰ~Ⅳ型DENV EDⅢ蛋白,这些重组蛋白可进一步用于疫苗、诊断试剂和E蛋白生物学功能的研究. 相似文献
98.
siNgR重组质粒载体构建及效应检测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建具有特异阻断大鼠NgR基因功能的siRNA表达系统,为视神经损伤基因治疗提供新的方法 .方法 实验研究.根据Genbank提供的NgR基因mRNA序列,应用设计软件设计特异性的短链寡核苷酸,化学合成2对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,退火、克隆到经BglⅡ、Hind Ⅲ酶切处理的pSUPER-EGFP质粒,获得重组siNgR质粒,用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切和序列测定对重组体进行鉴定,最后将构建的表达载体转染Wistar大鼠体内视网膜神经节细胞,免疫印迹法观察对NgR蛋白表达的影响.结果 重组siNgR表达载体的酶切鉴定结果 和测序结果 表明重组载体构建成功.视网膜冰冻切片后,经荧光显微镜观察,视网膜神经节细胞层和视神经纤维可见绿色荧光蛋白表达.免疫印迹法分析表明,siNgR-1和siNgR-2可抑制RGCs NgR蛋白的表达,而siNgR-c和pSUPER-EGFP对照对NgR蛋白的表达无明显影响.结论 成功构建了siRNA表达载体,此载体具有阻断NgR基因的表达的功能,为进一步研究视神经损伤基因治疗打下基础.(中华眼科杂志,2008,44:244-247) 相似文献
99.
Sixteen plasmid profile types have been identified in drug-sensitive isolates ofSalmonella berta isolated from humans and human food in England and Wales in the ten-year period 1981–1990. Since 1988 six profile types of
epidemiological importance have caused infections in widelyseparated geographical areas and of these, four types have been
identified inS. berta isolated from chicken carcasses imported from Denmark. The findings suggest that imported Danish poultry has substantially
contributed to a recent upsurge ofS. berta in humans in England and Wales. 相似文献
100.
目的探讨人白细胞介素(hIL)-24基因重组质粒对人宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其作用机制。方法建立荷宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤模型,15只裸鼠随机分为3组:白细胞介素(IL)-24重组质粒组,空质粒组,磷酸盐缓冲液(PBS)组,根据肿瘤体积的生长情况绘制肿瘤生长曲线;处死裸鼠后切取瘤体并称质量,计算肿瘤抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期。结果体内实验表明,IL-24重组质粒能够抑制肿瘤的生长,IL-24重组质粒组移植瘤的体积明显小于空质粒组和PBS组(P<0.05),空质粒组和PBS组移植瘤体积则差异无统计学意义(P>0.05)。IL-24重组质粒组抑瘤效果显著,其抑瘤率为56.5%,差异有统计学意义(P<0.05),空质粒组抑瘤率为1.3%,差异无统计学意义(P>0.05)。经流式细胞术检测,与空质粒组和PBS组比较,IL-24重组质粒组G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少,G2/M期细胞减少(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期,空质粒组和PBS组则差异无统计学意义(P>0.05)。结论于荷瘤裸鼠的瘤内注射IL-24重组质粒可抑制肿瘤生长,提示IL-24具有明显的体内抗肿瘤作用。 相似文献