转铁蛋白增强脂质体介导基因对肝癌细胞的转染和表达

目的：检测转铁蛋白能否增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达。方法：应用本实验室构建的含小鼠白细胞介素（mIL)-12的真核表达质粒pcDNA3/mIL-12和绿色荧光蛋白（GFP）真核表达质粒pcDNA3/EGFP,观察转铁蛋白增强阳离子脂质体LipofectAMINE介导上述两种质粒DNA对小鼠和不同人肝癌细胞株的转染及表达效率。结果：LipofectAMINE加转铁蛋白介导pcDNA3/EGFP对小鼠肝癌细胞株Hep1-6的转染效率由2％－5％提高至20％,对4种不同人肝癌细胞株的转染效率由15％提高到65％－75％;但对小鼠肝癌细胞株MM45T.Li的转染效率并不增加。转铁蛋白可使LipofectAMINE介导pcDNA3/mIL-12在Hep1-6中的表达量增强18倍。结论：转铁蛋白能够与LipofectAMINE和质粒DNA形成复合物,显著增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达,但对不同种肝癌细胞株的增强效率不同。     

Is the origin of the hemianopic line bisection error purely visual? Evidence from eye movements in simulated hemianopia

It is still unclear whether the contralateral line bisection error in unilateral homonymous hemianopia is caused by the visual field defect, strategic oculomotor adaptation or by additional extrastriate brain injury. We therefore simulated hemianopia in healthy participants using a gaze-contingent display paradigm and investigated its effects on manual and ocular line bisection performance and eye-movements. Although simulated hemianopia impaired line bisection and induced the adaptive oculomotor eye-movement pattern of hemianopic patients, it did not induce the contralateral bisection error, suggesting that neither the visual field defect nor oculomotor adaptation to it are the primary causes of the hemianopic bisection error.     

166例ANA阳性者血清线性免疫ANA谱的结果分析

目的了解皖北及沿淮地区血清ANA阳性者中常见自身抗体的阳性率,探讨线性免疫分析法(LIA)对常见结缔组织病的诊断价值。方法用LIA法检测166例患者ANA筛查ELISA检测值大于正常值上限的血清。结果 166例中154例有阳性结果,阳性率为92.8%,139例有2个或以上条带阳性,占阳性结果的90.3%。66例anti-dsDNA抗体阳性;70例抗核小体抗体阳性;37例抗组蛋白抗体阳性;58例anti-SmD1抗体阳性;76例anti-U1snRNP抗体阳性;103例anti-SSA/Ro60抗体阳性;77例anti-SSA/Ro52抗体阳性;46例anti-SSB/La抗体阳性;40例抗P0抗体阳性;10例抗着丝点抗体阳性,抗Scl-70抗体和抗Jo-1抗体抗体各7例阳性。结合临床资料:101例符合SLE;28例符合pSS;14例符合MCTD;7例符合SSc;3例符合UCTD;7例符合PM/DM;6例符合RA。结论皖北及沿淮地区ANA阳性者以SLE最为常见,其次为pSS和MCTD患者;LIA法检测ANA阳性者血清有助于明确结缔组织病的诊断。     

有序样品最优分段的线性拟合法

目的提出一种有序样品最优分段的新方法.方法建立各段上的线性模型,采用各段的剩余均方为类直径而不用剩余平方和,本文用最优二分割线性拟合法分析了两个实例,并与Fisher算法做了比较.结果分段线性函数是比阶梯函数更广的函数类.结论线性拟合法是一个有效的有序样品聚类方法.     

反向线性点杂交方法检测embB基因突变在筛查结核分枝杆菌耐多药株的研究

目的:利用反向线性点杂交(Reverse Line Blot assay,RLB)技术建立检测embB基因突变筛查结核分枝杆菌耐多药株(指至少对异烟肼和利福平两种以上药物产生耐药的结核分枝杆菌,multi-drug resistant tuberculosis,MDR-TB)的方法。方法:采用比例法药敏试验检测301株结核分枝杆菌临床分离株的耐药表型,分别用测序及反向线性点杂交方法检测embB基因突变位点,并用比例法药敏试验作为表型检测对照方法,测序作为基因型检测对照方法,对RLB方法筛查耐多药株进行评价。结果:经表型药敏检测耐多药株占57.9%,非耐多药株占25.2%,全敏感株占16.9%。经测序检测94株发生embB Met306突变,其中89.4%(84/94)的突变发生在耐多药株1,0.6%为非耐多药株。Met306突变率在乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)耐药组46.9%与乙胺丁醇敏感组47.8%间差异无统计学意义(χ2=0.01,P>0.05),而突变率在耐多药组为48.3%与非耐多药组13.2%间差异有统计学意义(χ2=48.53,P<0.01)。用反向线性点杂交检测embB基因突变位点与测序法相比敏感度为96.8%,特异度为99.0%,二者一致率达98.3%。用反向线性点杂交检测耐多药株与表型检测方法相比敏感度为48.3%,特异度为88.2%,二者一致率为60.4%。结论:反向线性点杂交方法检测em-bB基因突变可在常规检测中替代测序法快速筛查结核分枝杆菌耐多药株。     

Oct-4在不同侵袭转移能力的人胆管癌细胞系中的表达

目的:探讨干细胞因子Oct-4在不同侵袭转移能力的人胆管癌QBC939亚克隆细胞系中的表达。 方法:运用体外侵袭实验筛选出1个高侵袭转移潜力和1个低侵袭转移潜力的细胞亚系，并对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定。运用RT－PCR，Western-blot的方法检测干细胞因子Oct-4在两个亚克隆细胞系的差异表达。结果:分离得到高和低转移能力的人胆管癌QBC939亚克隆细胞系QBC-H和QBC-L,体外侵袭指数分别为263±5.9和154±6.6（P<0.05）。干细胞因子Oct-4 mRNA和蛋白在QBC-H的表达均高于QBC-L，两者差异有显著性（P<0.05）。结论:干细胞因子Oct-4的表达强度与胆管癌QBC939的侵袭转移能力密切相关；它可能是调控胆管癌侵袭转移能力的重要基因。     

病毒性脑炎 217例症状性癫痫发生风险的预测研究

目的分析病毒性脑炎并发症状性癫痫的风险因素,据此构建列线图预测模型。方法回顾性分析 2018年 2月至 2022年 5月汕头市中心医院收治的 217例病毒性脑炎病人临床资料,抽取 70%为建模集(152例),30%为验证集(65例)。根据病人是否合并症状性癫痫,将建模集进一步分为发生组和未发生组,比较两组病人一般资料,选择差异有统计学意义的指标用逐步向前回归法进行非条件多因素 logistic分析病毒性脑炎病人症状性癫痫发生的影响因素,并采用 R3.4.3软件包绘制基于多因素分析结果的列线图模型。采用 Bootstrap法分别对建模集和验证集进行验证,并绘制受试者操作特征曲线(ROC曲线)和决策曲线(DCA)以评估列线图模型的预测效能和临床净获益率。结果 217例病毒性脑炎病人中,共 46例病人合并症状性癫痫(21.20%),其中建模集中有 32例合并症状性癫痫,验证集中有 14例合并症状性癫痫;发生组昏迷、大脑皮质损坏、脑电图重度异常、颅脑核磁共振成像(MRI)有责任病灶、累及颞叶或额叶、脑脊液单纯疱疹病毒(HSV)(+)占比及脑脊液压力均高于未发生组(P<0.05); logistic多元回归分析,昏迷、大脑皮质损坏、脑电图重度异常、颅脑 MRI有责任病灶、累及颞叶或额叶、脑脊液压力、脑脊液 HSV(+)均是病毒性脑炎合并症状性癫痫的影响因素(P<0.05);经 Bootsrap法进行验证,建模集其一致性指数( C-index)为 0.833,验证集的 Cindex则为 0.830,校正曲线和标准曲线拟合度较好。建模集 ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为 0.84［98%CI:(0.78,0.89)］、79.17%、84.04%,验证集则为 0.81［98%CI:(0.76,0.86)］,83.04%,73.64%,提示模型区分度良好。 DCA曲线显示病人根据列线图模型进行风险评估可获得满意的净收益。结论昏迷、大脑皮质损坏、脑电图重度异常、颅脑 MRI有责任病灶、累及颞叶或额叶、脑脊液压力、脑脊液 HSV(+)均是病毒性脑炎合并症状性癫痫的影响因素,综合上述因素针对病毒性脑炎病人构建的列线图预测模型可以较好地个体化预测症状性癫痫的发生,对临床防治症状性癫痫提供指导。     

槲皮素诱导TRAMP-C2细胞凋亡的实验研究

目的：探讨槲皮素对转基因前列腺腺癌小鼠c2细胞系（TRAMP-C2）凋亡影响及其作用机制。方法：采用不同浓度的槲皮素处理体外培养的TRAMP-C2细胞,应用MTT法检测槲皮素对TRAMP-C2细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测TRAMP-C2细胞的凋亡率,并应用基因芯片技术筛选槲皮素作用前后TRAMP-C2细胞差异性表达基因。结果：槲皮素能抑制TRAMP-C2细胞生长,诱导TRAMP-C2细胞凋亡,呈剂量及时间依赖性;基因芯片分析发现,应用5&#215;10^-5mol／L浓度槲皮素处理48h后的TRAMP—C2细胞有69个基因表达下调,94个基因表达上调,其中血小板反应素表达明显上调,为对照组的36倍。结论：槲皮素能诱导TRAMP-C2细胞凋亡,具有直接抗肿瘤作用,其作用机制可能与上调TRAMP-C2细胞血小板反应素l的表达有关。     

一氧化氮、诱生型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子C在鼻咽癌中的作用

目的检测鼻咽癌组织中诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C）表达的意义以及它们之间的关系,并检测一氧化氮（nitric oxide,NO）对鼻咽癌细胞株生长的影响及对VEGF-C表达的调节作用。方法用免疫组化法检测57例鼻咽癌标本以及20例非鼻咽癌鼻咽上皮组织标本中VEGF-C以及iNOS的表达,另以NO供体S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺（S-nitroso-N-acetylpenicillamine,SNAP）对鼻咽癌细胞系TWO3进行处理,通过MTT法检测NO对TWO3生长的影响,并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测NO对TWO3的VEGF-C表达调控作用。结果VEGF-C和iNOS在鼻咽癌组中表达阳性率显著高于对照组（P〈0.05）,鼻咽癌组织中VEGF-C表达在不同T、N以及临床分期组差异有统计学意义（P〈0.05）,但是不同年龄性别组表达差异无统计学意义（P〉0.05）。鼻咽癌组织中iNOS的表达在不同T、N级,临床分期,年龄以及性别组中表达差异无统计学意义（P〉0.05）;鼻咽癌组织中iNOS与VEGF-C表达显著相关（P〈0.05）;高浓度NO能抑制TWO3生长,且NO能调节TWO3的VEGF-C的转录表达。结论VEGF-C及iNOS可能对鼻咽癌的发展起促进作用,且在鼻咽癌中NO可能调节VEGF以及VEGF-C表达调节。     

三氧化二砷与阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中survivin表达的影响

目的探讨三氧化二砷与阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的可能机制。方法用不同浓度的As2O3或／和ADM干预人肝癌细胞株HepG2不同时间，以免疫细胞化学和RT—PCR方法检测HepG2细胞中survivin表达的改变。结果(1)未加药物干预之前，HepG2细胞中可见survivin强烈表达；(2)不同浓度的As2O3或ADM均可降低HepG2细胞survivin表达程度，并且随药物浓度的增加或作用时相的延长，降低程度更明显；浓度与时相之间存在交互作用；(3)ADM降低HepG2细胞survivin表达的作用比As2O3更明显，两者联用后，作用进一步增强。结论(1)单用As2O3或ADM均可降低HepG2细胞中survivin表达，并呈浓度和时间依赖性；(2)相同浓度下，ADM对HepG2细胞中survivin表达的减弱作用较As2O3更强，但两者的联用较单用者能更显著降低survivin表达；(3)As2O3和ADM可能通过下调survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡，从而发挥其抗癌作用；两者联用有叠加抗癌作用，从而可降低各自的临床使用剂量。