内毒素经氢氧化钙处理后免疫原性改变的研究

目的观察Ca(OH)2作用前后内毒素(lipopolysaccharide, LPS)免疫原性的改变;并利用ThP-1单核细胞系建立体外培养模型,为进一步的研究提供实验基础.方法利用ThP-1单核细胞系建立体外培养模型,以肿瘤坏死因子α(TNF-α)的产量作为衡量刺激物免疫原性的指标,观察Ca(OH)2作用前后LPS免疫原性的变化.结果在观察的LPS浓度范围内(10 μg/L～10 mg/L),与Ca(OH)2作用1周后,LPS免疫原性较对照组明显减弱(P<0.001);随pH值升高,TNF-α的产量呈下降趋势,pH≥12.30时,与对照组相比差异无显著性(P>0.05).结论 LPS与Ca(OH)2作用一周后,免疫原性明显减弱.Ca(OH)2的高pH值在LPS的免疫原性改变过程中起重要作用.     

Does supplemental photodynamic therapy optimize the disinfection of bacteria and endotoxins in one-visit and two-visit root canal therapy? A randomized clinical trial

AimTo evaluate the effectiveness of supplemental photodynamic therapy (PDT) in optimizing the removal of bacteria and endotoxins from primarily infected root canals after one-visit and two-visit treatments.MethodologyTwenty-four primarily infected root canals with apical periodontitis were selected and randomly divided into one-visit (n = 12) and two-visit treatment groups (n = 12). Chemo-mechanical preparation (CMP) was performed by using the single-file reciprocating technique + 2.5% NaOCL and a final rinse with 17% EDTA. The photosensitizer agent (methylene blue 0.1 mg/mL) was applied to root canals for 60 s before application of laser with a potency of 60 mW and energy density of 129 J/cm² for 120 s after CMP in the one-visit treatment and after 14-day inter-appointment medication with Ca(OH)₂ + Saline solution (SSL) in the two-visit treatment. Samples were collected before and after root canal procedures. Endotoxins were quantified by chromogenic limulus amebocyte lysate assay. Culture techniques were used to determine bacterial colony-forming unit counts.ResultsBacteria and endotoxins were detected in 100% of the initial samples, with median values of 1.97 × 10⁵ CFU/mL and 24.983 EU/mL, respectively. The CMP using single-file reciprocating technique was effective in the reduction of bacteria and endotoxins (All, p < 0.05). The supplemental PDT was effective in reducing bacterial load in the one-visit (p < 0.05) but not in the two-visit treatment after use of Ca(OH)₂ medication for 14 days (p > 0.05). In the two-visit group, after 14 days of inter-appointment medication with Ca(OH)₂, a significant reduction in the median levels of endotoxins was found in comparison to CMP alone (from 1.041 to 0.094 EU/mL) (p < 0.05). Despite the type of treatment, the supplemental PDT was not effective against endotoxins (p > 0.05).ConclusionsThe photodynamic therapy optimized the disinfection of bacteria from root canals in one-visit but not for two visit treatment modality with the accomplishment of calcium hydroxide medication. Despite the type of treatment, the supplemental PDT was not effective against endotoxins.     

急性重症胰腺炎患者肠黏膜屏障功能的改变

目的:探讨急性重症胰腺炎(SAP)的肠道黏膜屏障功能改变的机制,以期提高对SAP的治疗策略。方法:36例SAP患者入院当天采血检测二胺氧化酶(DAO)、内毒素(endotoxin,ET)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)的浓度。并用带特殊电化学检测器的高压液相色谱法(HPLC)检测尿中乳果糖与甘露醇排泄率比值。以30名健康志愿者作为正常对照组。结果:同正常对照组相比较,SAP患者尿中乳果糖与甘露醇排泄率比值明显升高(P<0.01);血中ET、NO、TNFα、DAO的水平显著增加(P<0.01)。结论:急性重症胰腺炎患者的肠黏膜屏障受损,肠黏膜通透性增高。ET、NO、TNFα单独或协同参与肠黏膜屏障的损害。DAO升高提示肠道黏膜的完整性受到破坏。     

脑源性多器官功能障碍综合征模型血清内毒素及其受体基因表达

目的探讨急性前脑缺血致多器官功能障碍综合征(MODS)模型血清内毒素含量及其受体在各脏器基因表达的规律,分析脑原性多器官功能障碍综合征(CMODS)的发生机制。方法随机将54只Wistar大鼠分为正常对照组(6只)、假手术组(8只)和前脑缺血组(40只),后者又被随机分为12h、24h、36h、48h、和72h时相点的5个亚组,每亚组各8只;建立大鼠急性前脑缺血模型;分别采用偶氮显色法鲎试验定量法测定血清内毒素和原位杂交技术测定肺、肝、肠和肾组织CD14mRNA水平;使用CMIA真彩色医学图像分析系统,检测CD14mRNA的相对含量。结果大鼠急性前脑缺血后12h血清内毒素升高(0184±0055)Eu/L,24h达高峰(0639±0064)Eu/L,72h基本恢复至正常水平(0117±0024)Eu/L;肺、肝、肠和肾组织CD14mRNA的表达也在缺血后12h升高,24~36h达高峰,48h后下降,并以肺脏变化最显著(P<0001);正常对照组和假手术组CD14mRNA在各脏器均有不同程度的表达,其中两组肺脏的表达有显著性差异(P<001)。内毒素与其受体在各脏器的表达均存在显著相关性(均为P<001),其中与肠、肺组织CDmRNA表达相关最显著(P<0001)。结论急性前脑缺血致MODS大鼠存在内毒素血症;急性脑血管病→应激反应→肠道黏膜屏障损害→内毒素易位→内毒素血症→内脏器官功能障碍→MODS是CMODS发生的     

肠源性内毒素血症所致肝微循环障碍在肝损伤中的作用

目的　探讨肠源性内毒素血症诱导的肝微循环障碍在肝损伤中的作用。方法　用硫代乙酰胺(TAA)构建肠源性内毒素血症大鼠模型。25只雄性Wistar大鼠分为4组生理盐水组,肝素对照组,TAA组,TAA+肝素组。采用生化检测方法　、组织化学方法　和电镜技术,检测实验各组血浆内毒素、丙氨酸转氨酶(ALT)和丙二醛(MDA)水平的变化及肝组织形态学改变。结果　TAA组血浆内毒素为(0.1899±0.0540)EU/ml、ALT为(1006.80±9182)U/L、MDA为(636±1.96)nmol/ml;对照组分别为(0.0911±0.0068)EU/ml、(31.15±10.58)U/L、(366±0.86)nmol/ml,两组相比TAA组明显升高(P<0.05);TAA+肝素组与TAA组相比,内毒素(0.1597±0.0357)略有下降(P＞005),ALT(586.69±221.97)和MDA(3.64±0.95)显著降低(P＜005)。肝组织形态学改变,苏木精-伊红染色显示TAA组肝坏死面积达50%,纤维素染色TAA组肝窦及微血管内可见大量蓝色丝状团块样的微血栓;电镜结果　显示TAA组窦腔内红细胞聚集、白细胞粘附贴壁,肝窦内皮细胞窗孔数目减少,而TAA+肝素组上述改变明显减轻。结论　肠源性内毒素血症可诱导肝微循环障碍导致缺血、缺氧性肝损伤,肝素可明显改善肠源性内毒素血症所致的肝微循环障碍,从而使缺血、缺氧所致的肝损伤明显减轻。     

内毒素对大鼠淋巴细胞表达TLR4及NF-κB与分泌IL-6的影响

目的研究内毒素干预离体大鼠淋巴细胞后TLR4 mRNA、NF-κB mRNA的表达及IL-6分泌的变化,探讨淋巴细胞在全身炎症反应综合征(SIRS)发生及进展中的作用机制。方法制备健康雄性Wistar大鼠脾脏淋巴细胞,培养至对数期,随机分为对照组和实验组。对照组不做处理。实验组加入不等量内毒素,调整浓度为低浓度组(10 ng/ml)、高浓度组(100 ng/ml),培养3、6、12 h。RT-PCR技术检测TLR4及NF-κB的mRNA表达水平,ELISA技术测定IL-6的分泌量。结果干预3 h后,低浓度组:TLR4及NF-κB的mRNA表达与对照组比较无显著差异(P>0.05),IL-6的分泌与对照相比差异有统计学意义(P<0.05)。高浓度组:TLR4 mRNA的表达及IL-6的分泌与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),NF-κB的mRNA表达与对照组比较无显著差异(P>0.05)。干预6、12 h后,低、高浓度组:TLR4及NF-κB的mRNA表达与IL-6的分泌分别与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,TLR4及NF-κB的mRNA表达水平及IL-6的分泌量随时间延长增加。结论内毒素能刺激大鼠淋巴细胞高表达TLR4、NF-κB及分泌包括IL-6在内的各种细胞因子与炎症介质,促进SIRS的发生及发展。     

内毒素刺激Kupffer细胞对肝星状细胞前胶原基因表达的影响

背景：肠源性内毒素血症对肝纤维化具有启动作用,肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化发生、发展的中心环节。目的：探讨内毒素刺激Kupffer细胞对HSC前胶原基因表达的影响及其可能机制。方法：改良链酶蛋白酶、胶原酶原位灌流和密度梯度离心分离大鼠肝脏Kupffer细胞和HSC。以RNA斑点杂交检测脂多糖（LPS）、Kupffer细胞、LPS与Kupffer细胞共培养和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对HSC前胶原mRNA表达的影响,放射免疫法检测LPS对Kupffer细胞和HSC产生TNF-α的影响,RNA印迹法检测LPS和TNF-α对Kupffer细胞和HSC转化生长因子-β（TGF-β）mRNA表达的影响结果：经低浓度（0.5、1、5μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清可增加HSCⅠ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA表达,经高浓度（10、15、20μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清、单独LPS、未经处理的Kupffer细胞培养上清、单独TN-α均无此作用。Kupffer细胞培养上清中的TNF-α含量随LPS浓度梯度的增加而递增,HSC培养上清中的TNF-α含量则无明显变化。TNF-α不能增加HSC TGF-βmRNA表达,但能增加Kupffer细胞TGF-βmRNA表达;经LPS或TNF-α处理的Kupffer细胞培养上清能增加HSC TGF-βmRNA表达。结论：低浓度内毒素能上调HSC前胶原基因表达,该作用有赖于内毒素激活Kupffer细胞所产生的活性介质的参与。     

非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏内毒素受体表达上调

目的观察大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)伴肝纤维化模型形成过程中,肝脏内毒素受体表达的动态变化,以探讨NASH的发病机制。方法 45只雄性SD大鼠以高脂饮食喂养,分批于实验 8,12、16、24周处死。免疫组织化学法观察CD14表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察4型toll 样受体(TLR4)mRNA表达,RT-PCR法和酶联免疫吸附法分别测定肝脏和血清肿瘤坏死因子a(TNF a) 表达。同期正常饮食饲养大鼠作对照。结果实验8周大鼠单纯性脂肪肝阶段肝脏CD14和TLR4的表达就较正常对照上调(25．9±11．9对12．4 5．7、1．75±0．81对O．98±0．33,P<0．01和P<0．05),12周随着脂肪性肝炎的出现进行性增高(61．8±21．9和1．88±0．72,P值均<0．05),于16周达高峰(71．5±21．3 对5．64±0．87,P值均<0．01),24周略有回落(67．7±16．6和4．98±0．72,P值均<0.01)。肝脏和血清 TNF a表达也从8周开始上调,此后一直维持高水平表达。结论大鼠NASH形成过程中,肝脏内毒素受体CD14和TLR4表达逐渐上调。这可能是NASH大鼠内毒素肝损伤敏感性增强的原因之一,在NASH的发病中起了重要作用。     

内毒素诱导原代肝细胞表达FasL及其细胞毒效应

目的 探讨内毒素直接与间接致肝细胞凋亡在内毒素血症肝脏损伤中的病理机制。方法 采用低浓度胶原酶原位循环灌流法分离,培养肝细胞,经不同浓度内毒素（１、５、１０μｇ／ｍｌ）作用２４、４８ｈ后免疫组织化学法检测肝细胞膜性ＦａｓＬ（ｍＦａｓＬ）表达及ＴＵＮＥＬ试验检测内毒素直接与间接致肝细胞凋亡情况。结果 内毒素作用２４ｈ后肝细胞ｍＦａｓＬ表达阳性程度为＋＋－＋＋＋,对照组为阴性,内毒素直接作用２４ｈ后肝     

内毒素诱导致敏小鼠建立支气管哮喘动物模型的实验研究

目的 评价用内毒素(LPS)诱导卵清白蛋白(OVA)激发、OVA致敏的小鼠,建立支气管哮喘(简称哮喘)模型的方法.方法 采用随机数字表法将120只BALB/c小鼠分为PBS对照组(A组,PBS致敏PBS激发)、OVA组(B组,OVA敛敏OVA激发)、LPS/LPS小剂量组(C1组,50 μg内毒素致敏50 μg内毒素激发)、LPS/LPS大剂量组(C2组,100μg内毒素敛敏100 μg内毒素激发)、OVA/LPS小剂量组(D1组,OVA致敏、OVA雾化吸入激发结合50 μg内毒素滴鼻诱导)、OVA/LPS大剂量组(D2组,OVA致敏、OVA雾化吸入激发结合100 μg内毒素滴鼻诱导).观察小鼠哮喘急性发作症状,检测BALF细胞分类计数,测定乙酰胆碱激发条件下气道反应性(以肺阻力R_L表示);HE染色观察肺组织病理变化.结果 (1)D1组与D2组小鼠喘息症状加重其中D2组更严重.(2)D1组与D2组BALF中细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均明显高于A组(均P<0.05).D1组的白细胞总数、淋巴细胞、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均明最高于B组(均P<0.01),D2组的白细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均明显高于B组(均P<0.05).(3)以5 g/L乙酰胆碱激发时,D1组RL[(9.32 4±1.51)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)(1 cm H_2O=0.098 kPa)]和D2组R_L[(44.21±2.88)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)]明显高于A组RL[(2.41±0.35)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)]和B组R_L[(5.96±1.83)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1)],均P<0.01.(4)D1组与D2组呈现较为严重的支气管哮喘病变,其中D2组病变程度明显加重.结论 用内毒素诱导OVA致敏小鼠建立支气管哮喘模型的方法可产牛更严重支气管炎症改变以及明显的气道高反应性.