人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定

背景：脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞,在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更多优势,是当今的研究热点之一。 目的：在体外建立一种分离纯化人皮下脂肪来源脂肪干细胞的方法,进行体外培养扩增及诱导其向成骨、成脂细胞分化。 方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合,对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。倒置显微镜下观察人脂肪干细胞的细胞形态和生长特性。选取第2代及第5代细胞,用CCK-8法检测细胞活性,绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记。选取第5代细胞,分别进行成脂及成骨诱导分化,以确定其多向分化潜能。 结果与结论：①采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法,可成功从人脂肪组织中获得纯度较高的人脂肪干细胞。②人脂肪干细胞经历了生长滞缓期、对数增殖期和生长平台期,符合正常细胞的生长规律,且其生长具有对数生长期,其倍增时间较短。③人脂肪干细胞表达干细胞表面抗原标记,具有低免疫原性,且具有成脂成骨多向分化潜能。④DAPI是一种简单、有效的标记人脂肪干细胞的方法,DAPI不损伤细胞活性,对细胞标记率高。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

胃癌干细胞的分离、鉴定及其特性

背景：近年来随着肿瘤干细胞的深入研究,越来越多的证据表明肿瘤干细胞是恶性肿瘤转移复发的原因,因此分离鉴定出肿瘤干细胞对阐明肿瘤发病机制和研发抗肿瘤药物具有重要意义。 目的：分离培养胃癌干细胞,并检测胃癌干细胞的生物学特性。 方法：收集16例胃癌患者术中切除肿瘤组织,采用组织块贴壁培养法和酶消化培养法从肿瘤组织中分离胃癌干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线,并观察成骨成脂诱导分化能力。 结果与结论：两种方法均能够分离出胃癌干细胞,在显微镜下可以发现细胞形态为长梭形或多角样,细胞增殖生长达到融合时,呈漩涡状、放射状排列。从细胞生长曲线可以看出,1-3 d为潜伏期,4-9 d为对数增殖期,10 d后进入生长平台期。流式细胞仪检测结果显示：第3代胃癌干细胞高表达细胞表面标志物CD90、CD29、CD44,而低表达CD34、CD45、HLA-DR。第3代胃癌干细胞经成骨诱导后可见钙化结节,成脂诱导后细胞胞浆开始出现微小明亮的脂肪滴。结果表明胃肿瘤组织内存在肿瘤干细胞,且与正常细胞有相似的形态、生物特性以及多向分化能力,可能参与胃癌的发生、发展。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人脂肪干细胞的提取和鉴定

背景：脂肪干细胞是存在于脂肪中的全能干细胞,具备自我更新能力与多向分化潜能,遗传背景相当稳定,体内植入后免疫排斥少,是一种比较理想的种子细胞。目的：提取人大网膜脂肪干细胞,并进行成脂和成骨分化能力鉴定。方法：收集手术患者大网膜的脂肪组织,经Ⅰ型胶原酶消化、过滤、离心后进行原代培养,观察细胞生长状态;用细胞计数法绘制人脂肪干细胞增殖曲线,计算处于对数生长期的倍增时间;用相应的定向诱导液诱导人脂肪干细胞向脂肪细胞及骨细胞方向分化,并用油红O染色、茜素红染色进行鉴定。结果与结论：从手术患者大网膜脂肪组织中成功分离人脂肪干细胞,贴壁生长的人脂肪干细胞为长梭形,形态类似成纤维细胞。第3代人脂肪干细胞生长曲线呈S形,对数生长期人脂肪干细胞的倍增时间为45.90 h。人脂肪干细胞经成脂、成骨定向诱导分化2,3周后,油红O染色显示细胞内有大小不等的橘红色脂肪滴,茜素红染色可见着橘红色的典型钙化结节,提示所培养的脂肪干细胞具有向脂肪细胞、骨细胞系分化的能力。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

新生大鼠脊髓运动神经元的纯化培养与鉴定

背景：神经元是有丝分裂后的细胞,体外培养很难存活。脊髓运动神经元的分离、纯化和培养同时也是细胞培养的技术难点。 目的：建立新生大鼠脊髓运动神经元培养体系,并予以分类鉴定和测定其纯度。 方法：取新生大鼠脊髓腹侧组织分离成细胞悬液,经密度梯度离心及差速贴壁后纯化培养,采用免疫细胞化学双标染色法对培养盖片上的细胞予以鉴定、分类,结合Hoechst荧光染核,计数各细胞成分的含量。 结果与结论：细胞贴壁生长良好,神经元占85.8%,其中运动神经元达71.6%,星形胶质细胞占7.8%,NF200和胶质纤维酸性蛋白染色皆为阴性的细胞占6.4%。结果说明,取新生大鼠腹侧脊髓组织结合密度梯度离心及差速贴壁接种法可以培养出高纯度的脊髓运动神经元。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应

背景：传统的细胞培养方法大多采用胎牛血清作为营养支持,其存在传播疾病的风险和免疫排斥反应。寻找胎牛血清替代物并建立规范、安全、高效的成人骨髓基质干细胞体外培养体系刚刚起步,有待进一步研究。 目的：探讨AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养人骨髓基质干细胞的效果。 方法：从成人骨髓穿刺液中分离人骨髓基质干细胞,分别用含体积分数10%AB血清、自体血清和胎牛血清的基础培养基培养人骨髓基质干细胞,取第3代细胞进行相关指标检测。 结果与结论：相差显微镜下见AB血清组细胞最先达到汇合;流式细胞仪检测细胞表面抗原,各组均符合骨髓干细胞表型,纯化程度良好;Alamar Blue法显示AB血清组平均荧光强度最高,促增殖效率最高;Annexin V-FITC法显示各组细胞凋亡率均在5%以下,生长状态良好;碱性磷酸酶染色、钙结节和油红O染色结果显示,各组细胞均保持了成骨、成脂分化能力。AB血清对人骨髓基质干细胞的增殖作用较胎牛血清、自体血清明显增强。AB血清有望替代胎牛血清建立符合骨组织工程临床应用要求的体外成人骨髓基质干细胞培养体系。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人腔前卵泡体外培养研究

目的探讨FSH对人腔前卵泡(preantralfollicle)体外生长的影响.方法培养液中加入不同浓度的FSH,观察卵泡存活天数和卵泡发育增大.结果卵泡体外存活天数对照组为2.80±1.69天,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(FSH浓度为0.5IU/ml、1IU/ml、2IU/ml)分别为5.36±0.63、5.47±2.50、8.13±4.19天,与对照组相比,分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001.卵泡增大比率对照组为20.00%,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别为35.71%、60.00%、81.25%,与对照组相比分别为P＞0.05、P＜0.05、P＜0.01.结论FSH能使卵泡体外存活天数延长,卵泡发育增大,并大致呈正相关关系.     

菊花总黄酮对转染RSV的A549细胞RANTES及MCP-1表达的影响

【目的】探讨菊花总黄酮对呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)转染 A549细胞诱导激活正常 T 细胞表达和分泌因子(regulated upon activation ,normal Tcell expressed and secreted ,RANTES)及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)释放作用影响。【方法】实验分为正常对照组,病毒对照组,菊花总黄酮组和巴韦林组。在人喉癌上皮细胞(Hep-2细胞)和气道上皮细胞(A549)分别加入菊花总黄酮和巴韦林的含药维持液,测定上述两种药物的最大无毒浓度;RSV 转染 Hep-2细胞,观察药物对 RSV 的病毒抑制作用;RSV 转染 A549细胞,ELISA 法测细胞趋化因子 RANTES 及 MCP-1含量。【结果】菊花总黄酮组50%有效率优于巴韦林组,差异有统计学意义(P <0.05);菊花总黄酮组 RANTES、MCP-1明显降低,但高于正常细胞组,优于巴韦林组,差异有统计学意义(P <0.05)。【结论】菊花总黄酮能够抑制 RSV 活性,明显降低 A549细胞释放 RANTES、MCP-1,缓解患儿的呼吸道症状。     

siRNA沉默VDAC1对MCF-7细胞增殖、周期的影响及其作用机制

[目的]观察siRNA沉默VDAC1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.[方法]针对人VDAC1基因设计并合成siRNA,并将VDAC1-siRNA转染MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞中VDAC1的表达水平,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞术检测MCF-7细胞的周期分布,同时Western印迹法检测周期蛋白D1的表达.[结果]MCF-7细胞转染VDAC1-siRNA后能够有效抑制VDAC1的表达,显著抑制其增殖水平,促使MCF-7细胞发生G1期阻滞,同时下调Cyclin D1蛋白表达.[结论]VDAC1沉默能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促使细胞发生G1期阻滞.VDAC1可作为乳腺癌治疗的新靶点.     

GANT61对肺癌细胞H1703和A549的活力和侵袭力的影响

【目的】观察新型Hh通路抑制剂GANT61对肺癌细胞H1703和A549的生长抑制情况。【方法】培养H1703和A549细胞,加入8．00μmol／L GANT6172h后采用MTT法检测细胞生长情况;Western blot法观察GANT61对Gli-1和Gli-2蛋白表达的影响;观察GANT61对细胞侵袭能力的影响。【结果】H1703和A549细胞培养24h、48h和72h光吸收值均明显低于H1703和A549细胞空白组（P〈0．05）;H1703和A549细胞加入GANT6124h后Gli-1和Gli-2蛋白相对表达量分别为（0．12±0．01）,（0．09±0．01）和（0．41±0．05）,（0．15±0．01）较空白组均明显减少,且差异有显著性（P〈0．05）;H1703和A549加入GANT6124h平均穿膜细胞数分别为（44．35±8．84）个和（67．12±4．71）个,明显低于H1703和A549空白组（130．12±7．83）个和（160．21±4．55）个（P〈0．05）。【结论]GANT61能明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,可能成为肺癌靶向治疗的新药物。     

人工蛹虫草子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的：观察人工蛹虫草子实体及其不同提取物对正常小鼠脾淋巴细胞增殖的影响，分析其影响免疫功能的有效提取部位。方法：以不同浓度提取物与脾细胞共孵育72h，采用MTT法测定淋巴细胞的增殖，观察提取物对淋巴细胞增殖的影响。另以10mg·kg^-1，30mg·kg^-1剂量人工蛹虫草子实体的水提取物及微粉化原药水溶液小鼠ig给药11d，制备脾淋巴细胞悬液，培养72h后测定细胞增殖。结果：在体外。水提取物有显著增强脾淋巴细胞增殖效应，且与ConA和LPS有协同促增殖效应，水提醇沉提取物可促进正常淋巴细胞增殖，而对ConA、LPS活化后的增殖无明显影响；甲醇提取物对淋巴细胞增殖有抑制作用。体内给予水提物和子实体微粉水溶液两个剂量也均显示促进淋巴细胞的自然增殖作用（P〈0．05），但对ConA或LPS活化后的淋巴细胞无协同作用。结论：人工蛹虫草子实体含有免疫促进和免疫抑制的成分。其水溶性和中等浓度的醇溶性成分有免疫促进作用。甲醇提取物抑制淋巴细胞增殖。