胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸抑制疟原虫红前期发育

目的 观察胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸（cytidine-phosphate-guanosine oligodeoxynucleotide,CpG ODN）对疟原虫红前期发育的影响。 方法 通过构建约氏疟原虫BY265株18S rRNA外标准品质粒,与小鼠三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）内标准品共同组成TaqMan RT-PCR分析模型。用不同剂量（0.05×10⁵ 、0.1×10⁵、0.5×10⁵、1×10⁵和2×10⁵个）约氏疟原虫唾液腺子孢子感染BALB/c小鼠,42 h后处死小鼠取其肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR反应,以小鼠肝脏虫荷指标检验模型的有效性。将12只BALB/c小鼠随机均分为CpG组、CpG对照组和PBS对照组,CpG组和CpG对照组小鼠分别尾静脉注射脱氧寡核苷酸1826（ODN1826）及其对照（ODN1826 control）各30 μg,PBS对照组注射0.01 mol/L PBS溶液 200 μl。24 h后各组每鼠感染100个子孢子,于感染后42 h处死小鼠取肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR,定量分析感染疟原虫24 h前CpG ODN预处理小鼠肝脏虫荷的变化。 结果 构建的约氏疟原虫外标准品质粒所插入的BY265株18S rRNA基因与17XNL株18S rRNA基因相似性为98%,它与小鼠GAPDH内标准品共同组成的TaqMan RT-PCR分析模型能够正确反映小鼠肝脏虫荷与唾液腺子孢子感染量的正比关系。感染疟原虫24 h前给予CpG ODN处理,CpG组小鼠肝脏虫荷为CPG对照组的1/5（0.28/1.33）,两者差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 本实验建立的TaqMan RT-PCR分析模型适用于红前期疟原虫（肝脏）虫荷指标的研究。CpG ODN能显著抑制红前期疟原虫的发育。     

CpG-ODN联合HBsAg对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表型和功能的影响

目的　研究含非甲基化CpG基序的免疫刺激寡核苷酸 (CpG- ODN)与重组HBsAg对慢性乙型肝炎患者 (CHB)外周血树突状细胞 (dendriticcell ,DC)表型和功能的影响。方法　以重组人GM CSF、IL 4自CHB患者和健康者外周血单个核细胞诱导扩增DC ;以CpG ODN和HBsAg单独或联合刺激DC ,并与TNF α比较 ,评价其对DC表达表面分子HLA DR、CD86、CD1a ,分泌IL 12p70以及刺激同种T细胞增殖能力的影响 ;同时检测血浆TGF- β、IFN- γ含量。 结果　与PBS组比 ,CpG- ODN单用或联合HBsAg均能明显提高CHB患者DC表面分子HLA DR的表达 ,使IL- 12分泌增加 ,刺激同种T细胞增殖的能力亦增强 ,CpG ODN联合HBsAg尚能明显提高CD1a的表达 ;CpG- ODN的上述刺激作用类似于TNF α ;CHB患者血浆TGF- β、IFN -γ含量明显高于正常对照。 结论　CpG -ODN与TNF α一样能够促进CHB患者外周血DC分化和成熟 ;CpG- ODN与HBsAg联合刺激能协同增强DC的特异性抗原递呈作用 ;CHB患者的细胞因子环境可能是DC功能沉默的重要原因。     

骨髓增生异常综合征患者p15^INK4B基因甲基化状态的研究

目的：检测骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）患者抑癌基因p15^INK4B启动子区异常甲基化情况及其mRNA表达水平,探讨p15^INK4B基因异常甲基化在MDS发生、发展中的作用。方法：应用甲基化特异性PCR检测32例MDS患者骨髓p15^INK4B基因启动子区甲基化状态,逆转录PCR（RT-PCR）检测p15mRNA表达情况。结果：32例MDS患者骨髓有14例检测到p15^INK4B基因启动子甲基化（甲基化阳性率为43.8%）,且多为高危型患者。MDS患者骨髓p15mRNA表达水平明显降低。MDS患者p15^INK4B基因启动子甲基化与p15mRNA表达缺失具有明显的相关性。结论：MDS中p15^INK4B基因启动子高甲基化与基因表达失活密切相关,并在MDS的发生、发展中有重要作用。     

高温高湿环境下守岛官兵训练时脑血流和脑电生理的变化研究

目的 探讨高温高湿环境下守岛官兵训练前后脑血流和脑电生理的变化,为临床防治热致疾病提供依据.方法 从守岛官兵中随机抽取在常温常湿环境下温度(27.40±1.37)℃,湿度(50.25±6.76)%]新兵100名为常温新兵组,高温高湿环境下(温度≥35℃,湿度≥80%)新兵100名为高温新兵组;高温高湿环境下服役2～3 年的官兵100名为高温老兵组.受试者负重15 kg,分次在3000 m/15 min,5000 m/30 min和10 000 m/45 min内完成跑步训练.10 000 m训练后,根据受试者脑血流高低又分为脑血流增高组(24名)、脑血流降低组(46名)和脑血流正常组(230名).训练前后行经颅多普勒血流诊断仪和脑电图仪检测.结果 (1)3000 m训练后3组受试官兵脑平均血流速度(Vm)较训练前均显著增高(P＜0.01),但5000 m和10 000 m训练后,常温新兵组降低6%和16%,高温老兵组降低5%和15%,高温新兵组降低14%和31%,比常温新兵组和高温老兵组低(P＜0.01);(2)10 000 m训练前后3组脑电图均在正常范围,3组比较差异无统计学意义(P＞0.05);(3)10 000 m训练后脑血流增高组和降低组脑电图比正常血流组活跃(P＜0.01).结论 高温高湿环境下10 000 m训练对官兵的脑血流有较大的影响,但对脑电生理无影响,老兵在此环境下则表现出较好的热耐受力和适应性.     

CpG岛甲基化表型肺癌的分型标记及临床病理特征

目的 比较新的CpG岛甲基化表型(CIMP)筛选标记基因和经典CIMP筛选标记基因在CIMP肺癌筛选中的作用,并分析CIMP肺癌的临床病理特征.方法 取第二军医大学长海医院呼吸科50例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织,提取DNA,进行甲基化转换后,利用甲基化特异性PCR (MSP)对新的CIMP筛选标记基因(SHISA3、CTSL1、C1ORF103和TMEM200B)和经典的CIMP筛选标记基因(CACNA1G、IGF2、NEUROG1、RUNX3)的启动子CpG岛区域进行扩增,采用琼脂糖凝胶电泳分析其甲基化状态.运用SPSS统计软件对结果进行统计分析.结果 肺癌组织发生明显的甲基化,所研究的8个基因甲基化水平均明显高于癌旁组织(P=0.014).其中RUNX3甲基化与淋巴结转移及功能状态(PS)评分有关(P值分别为0.017、0.018).年龄＞60岁的肺癌患者甲基化率高于≤60岁者(P=0.031).吸烟对CTSL1基因甲基化的影响也很大(P=0.018).结论 CpG岛甲基化表型肺癌具有独特的临床病理特征;新的和经典的甲基化基因组合在CIMP肺癌筛选上都具有较高的灵敏度和特异性.     

EMs患者在位子宫内膜hMLH1蛋白表达变化及其基因启动子CpG岛甲基化观察

目的观察子宫内膜异位症（EM s）患者在位子宫内膜组织中hMLH1蛋白的表达变化及hMLH1基因启动子CpG岛甲基化情况。方法采用免疫组化法分别检测52例（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为9、16、12、15例）EM s患者及30例健康志原者（对照组）在位子宫内膜中的hMLH1,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法检测两组在位子宫内膜hMLH1启动子CpG岛甲基化情况。分离hMLH1启动子CpG岛甲基化异常者在位内膜中的腺细胞和间质细胞,采用MSP志愿分别检测两种细胞hMLH1启动子CpG岛甲基化情况。结果 EM s组中hMLH1蛋白表达减弱共6例,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为0、0、1、5例,其余样本hMLH1蛋白表达均呈阳性;对照组30例无hMLH1蛋白表达减弱者,hMLH1蛋白表达均表现为阳性。EM s组中hMLH1启动子CpG岛部分甲基化3例,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为0、0、0、3例,余均表现为非甲基化;对照组30例均表现为hMLH1启动子CpG岛非甲基化。EM s组Ⅳ期患者与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者及对照组相比,P均〈0.05。3例hMLH1启动子CpG岛表现为部分甲基化者子宫内膜组织中hMLH1蛋白表达均减弱,其腺细胞中hMLH1启动子区表现为半甲基化,间质细胞hMLH1启动子区未见明显甲基化条带。结论 EM s患者在位子宫内膜组织中存在hMLH1表达减弱及hMLH1启动子CpG岛部分甲基化,主要集中在腺细胞,hMLH1异常与严重EM s的发病有关。     

健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛1的鉴定及特性分析

目的 检测健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛（SGI1）的分布情况及特性,分析其与细菌耐药性的关系.方法 采用PCR方法对5株第一类整合子阳性的沙门菌检测SGI1,分别检测其左侧、右侧部分和其中间的部分基因,以及环状形式和切除状态,通过接合转移及自然转化检测其可移动性.结果 一株鼠伤寒沙门菌携带SGI1,位于thdF和int2之间,且其多重耐药区含aadA2,floR,tetG,blaPSE-1基因,存在环状形式及切除状态,且可通过自然转化方式转移至其他菌株.结论 SGI1可通过自然转化方式转移到其他菌株,介导多重耐药的传播.     

1995-2005年海岛地区性病疫情分析

目的 分析浙江省玉环县1995-2005年11年性传播疾病(STD)的流行趋势及特点,为制定有效的防治策略提供依据.方法 对玉环县11年8种法定报告STD监测资料进行统计分析.结果 11年8种监测STD中,除性病性淋病肉芽肿外,其余7种均有报告,累计报告STD 8479例,年平均发病率197.47/10万,年平均增长率为12.68%.结论 玉环县STD发病呈增长趋势,其中梅毒和非淋球菌性尿道炎(NGU)的增长较为显著,加强STD防治知识的普及,提倡安全性行为,是控制STD蔓延的有效措施.     

CpG ODN增强乙肝疫苗在老年小鼠中的免疫应答

目的：探讨CpG ODN对老年小鼠的体液和细胞免疫应答的增强作用。方法：选用老年C57BL／6小鼠，将乙肝疫苗和10μg、20μg CpG ODN同时或单独肌注到小鼠体内，两周后以同样剂量加强免疫一次，再过3周后摘除眼球取血，用EILSA方法检测抗HBs16；抗体和IL-12；无菌取脾脏作HE染色，观察脾脏淋巴细胞变化。结果：10μg和20μg CpG ODN与疫苗同时注射组产生的抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的3倍和4倍；产生的IL-12水平较对照组有明显升高，且20μg比10μCpG组产生的IL-12水平更高。光镜下各组的脾脏淋巴细胞的变化如下：正常老年鼠组脾脏淋巴细胞较正常青年鼠组明显稀少；老年鼠 10μgCpG组脾脏淋巴细胞较正常老年鼠组有了明显增加，且细胞核也明显增大；20μgCpG组增加的更加明显。结论：CpG ODN能增强乙肝疫苗在老年小鼠中的体液和细胞免疫应答。