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31.
目的评价羧甲基壳聚糖对重组人白细胞介素(rhIL)-1β刺激下软骨细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养兔软骨细胞,加入不同浓度羧甲基壳聚糖预处理1h后,加入rhIL-1β共培养24h,通过Annexin V-FITC和PI双标及Hoechst 33342荧光染色检测软骨细胞凋亡;以罗丹明-123荧光染色检测线粒体膜电位和荧光素酶反应检测线粒体合成ATP能力来评价线粒体功能。结果羧甲基壳聚糖能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性;羧甲基壳聚糖可恢复IL-1β对软骨细胞线粒体功能的损害。结论羧甲基壳聚糖通过保护线粒体功能抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。 相似文献
32.
Senkyunolide A inhibits the progression of osteoarthritis by inhibiting the NLRP3 signalling pathway
ContextOsteoarthritis (OA) is a degenerative disease. Senkyunolide A (SenA) is an important phthalide from Ligusticum chuanxiong Hort (Umbelliferae) with anti-spasmodic and neuroprotective effects.ObjectiveWe explored the effect of SenA on IL-1β-stimulated chondrocytes and OA miceMaterials and methodsChondrocytes were stimulated by IL-1β (10 ng/mL) to establish an OA model in vitro. Cells were treated with SenA (20, 40, 80 and 160 μg/mL) for 48 h. The in vivo OA model was established by cutting off the medial meniscus tibial ligament (MMTL) at right knee incision of male C57BL/6 mice. One week after surgery, mice were injected with SenA (intraperitoneally one week) and divided into four groups (n = 6 per group): Sham, OA, OA + SenA 20 mg/kg and OA + SenA 40 mg/kg. The OA progression was examined by haematoxylin and eosin (H&E) staining.ResultsSenA treatment increased cell viability (33%), proliferation (71%), inhibited apoptosis (21%), decreased levels of catabolic marker proteins (MMP13, 23%; ADAMTS4, 31%; ADAMTS5, 19%), increased levels of anabolic marker proteins (IGF-1, 57%; aggrecan, 75%; Col2a1, 48%), reduced levels of inflammation cytokines (TNF-α, 31%; IL-6, 19%; IL-18, 20%) and decreased levels of NLRP3 (21%), ASC (20%) and caspase-1 (29%) of chondrocytes. However, NLRP3 agonist nigericin increased levels of MMP13 (55%), ADAMTS4 (70%), ADAMTS5 (53%), decreased levels of IGF-1 (36%), aggrecan (26%), Col2a1 (25%), inhibited proliferation (61%) and promoted apoptosis (76%).Discussion and conclusionsSenA alleviates OA progression by inhibiting NLRP3 signalling pathways. These findings provide an experimental basis for the clinical application of drugs in the treatment of OA. 相似文献
33.
目的观察人脱细胞软骨细胞外基质(hACAM)对异种兔软骨种子细胞增殖和表型的影响。方法将差速梯度离心法制作的人脱细胞软骨细胞外基质,配制成0.5%的浆料,分别铺于6孔细胞培养板和96孔细胞培养板,形成1 mm厚的薄膜,以此培养板为实验组。空白对照组培养板仅使用单纯培养液培养。在培养板上培养兔关节软骨细胞。通过hochest33258染色验证人软骨细胞外基质脱细胞完全与否;分别在第5、15天两个时间点,通过倒置显微镜、甲苯胺蓝染色观察两种培养方法的兔软骨细胞的生长形态、细胞表型和增殖情况,用CCK-8细胞增殖实验比较两种培养方法在第1、3、7、10天的增殖情况。结果通过hochest33258染色发现差速梯度离心的人软骨细胞外基质脱细胞完全。通过倒置显微镜观察第5和15天的实验组细胞增殖情况优于空白对照组,甲苯胺蓝染色的结果也证明这个观点;CCK-8细胞增殖试验显示第7天hACAM组在细胞增殖方面明显地优于单纯培养液的对照组(P=0.0298),hACAM组的软骨细胞与空白组的软骨细胞在第10天的增殖情况相比没有统计学差异。结论 hACAM免疫原性低,无细胞毒性,能够很好地促进异种软骨细胞的增殖。 相似文献
34.
目的探讨人参总皂苷(TSPG)对骨关节炎大鼠关节疼痛和软骨修复的作用。方法将50只SD雌性大鼠随机分为5组,人参总皂苷低浓度组(TSPG-L 125μg/ml)、人参总皂苷中浓度组(TSPG-M 250μg/ml)、人参总皂苷高浓度组(TSPG-H 500μg/ml)、模型组和空白对照组。采用双侧膝关节注射碘乙酸法建立骨关节炎大鼠模型,人参总皂苷给药采用关节腔注射法。检测各组大鼠压痛阂值和热痛阈值。干预完成后,取每组双侧膝关节进行组织病理观察。结果OA造模成功,造模4周后,压热痛结果显示:高中低浓度人参总皂苷组的压热痛阈值相较于模型组,均有显著提升(P<0.01);病理结果显示:人参总皂苷组软骨细胞和软骨基质接近正常水平,有肥大软骨细胞少量,与模型组相比OARSI评分显著下降(P<0.01);软骨细胞CCK实验结果显示:与模型组相比,人参总皂苷组软骨细胞活力显著提高(P<0.01)。结论人参总皂苷对改善关节疼痛、修复受损软骨疗效显著,其机制可能与抑制炎症因子,减少软骨细胞凋亡和基质损伤,促进软骨细胞修复有关。 相似文献
35.
目的 探讨循环应力对体外构建组织工程软骨的影响。方法 分离兔关节软骨细胞,体外扩增培养后种植于PGA无纺网支架上。实验组在循环应力下培养(0-200kPa,0.1Hz),对照组静态培养。实验组和对照组均培养4周。4周后取出组织工程软骨行大体标本观察。组织化学和免疫组织化学染色观察组织工程软骨结构以及Ⅱ型胶原分泌情况。结果 体外培养4周时,实验组的组织工程软骨形态和色泽更加接近正常透明软骨,厚度和组织弹性优于对照组,实验组的软骨细胞数量和细胞外基质合成明显增加,分泌Ⅱ型胶原能力更强。结论 循环应力刺激软骨细胞合成分泌Ⅱ型胶原增加,有利于在体外构建组织工程软骨。 相似文献
36.
骨关节炎中软骨细胞的CD80/CD86的表达及白细胞介素18对其影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的探讨软骨细胞及γ-干扰素(γ-IFN)在骨关节炎发病中的作用。方法收集10例膝关节骨关节炎患者软骨标本为病例组,同时收集8例股骨颈骨折患者软骨标本为正常对照组。经过软骨细胞培养及γ-IFN的刺激,采用流式细胞技术检测CD80/CD86的表达情况。结果病例组软骨细胞表达CD80的阳性细胞百分率(2.47%±0.59%)比正常对照组软骨细胞(0.94%±0.25%)高(P<0.01)。病例组软骨细胞表达CD86的阳性细胞百分率(1.71%±0.71%)比正常对照组软骨细胞(0.93%±0.47%)高(P<0.01)。正常对照组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80阳性百分率(7.39%±3.18%)比刺激前明显增高(P<0.01),CD86阳性百分率刺激后(4.96%±3.11%)明显升高(P<0.01)。OA组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80和CD86阳性百分率(7.54%±4.47%、6.52%±4.24%)比刺激前明显增高(P<0.01)。两组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80和CD86的表达差异均没有显著性。结论正常软骨细胞有抗原提呈的潜能,γ-IFN可以诱导正常软骨细胞表达CD80/CD86增加,γ-IFN在骨关节炎发病中可能发挥致炎因子的作用。 相似文献
37.
目的:观察中药白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法:取1月龄的SD大鼠膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,甲苯胺蓝染色鉴定后,取体外培养第3代软骨细胞随机分为6组,分别加入不同浓度空白血清(5%、10%、15%),不同浓度白附片含药血清(5%、10%、15%),继续培养24、48、72h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖的变化。结果:白附片含药血清组吸光度值(OD值)显著高于空白血清组,两组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:白附片含药血清能有效促进大鼠膝关节软骨细胞的增殖。 相似文献
38.
目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因对兔骨髓基质细胞(MSCs)向软骨细胞分化mRNA表达的影响.方法 从兔骨髓细胞中分离提取BMP-2 mRNA,构建重组BMP-2真核表达质粒,并转染兔MSCs,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组MSCs内Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达水平.结果 转染后2、4 d实验组MSCs内的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达量28.7±4.0、236.7±48.5及26.9±4.3、208.2±36.7,均明显高于转染后2、4 d的空白对照组(16.1±2.8、99.2±24.8及14.6±2.7、111.1±18.9)和空载体对照组(14.6±2.6、85.4±24.7及16.1±2.8、98.0±22.5)(P<0.05).结论 重组真核表达载体BMP-2质粒能够诱导MSCs向软骨细胞分化.Abstract: Objective To observe the effect of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) on gene expression during the differentiation of marrow stromal cells (MSCs) into chondrocytes. Methods The BMP-2 mRNA was extracted from the rabbit bone marrow cells. The recombinant BMP-2 eukaryotic expression plasmids were constructed and transfected into MSCs. The mRNA expression of type Ⅱ collagen and proteoglycan was detected by using quantitative polymerase chain reaction (PGR) technique. Results At 2nd, and 4th day after transfection of plasmid pEGFP-C3-BMP-2 into MSCs, the mRNA expression levels of type Ⅱ collagen and proteoglycan in MSCs of experimental group were significantly higher than controls (P < 0. 05 ). Conclusion Recombinant eukaryotic expression plastmid pEGFP-C3-BMP-2 can induce MSCs differentiation towards chondrocytes. 相似文献
39.
目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。 相似文献
40.
目的 探讨晚期骨关节炎患者膝关节滑膜间质干细胞(synovium-derived mesenchymalstem cells,SMSCs)体外分离、培养的可行性及其在体外向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞定向分化的特性.方法 取膝关节滑膜组织,胶原酶消化获得有核细胞.挑选单细胞克隆,筛选获得SMSCs.流式细胞技术检测细胞表面特异性抗原标志.培养至第三代,分别向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞诱导分化.油红O染色鉴定向脂肪细胞分化;碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定向成骨细胞分化;甲苯胺蓝染色鉴定向软骨细胞分化.RT-PCR检测脂肪细胞、成骨细胞标志基因.Ⅱ型胶原免疫组化染色检测软骨细胞Ⅱ型胶原的表达.结果 原代SMSCs体外培养呈葵花样细胞集落,传代后可见圆形巨噬样细胞和纺锤形成纤维样细胞,融合后呈成纤维细胞样生长.CD44、CD90呈阳性,CD34、CD71和CD45呈阴性.向脂肪细胞诱导21d,油红O染色阳性;RT-PCR检测有脂蛋白酶、乙二腈及PPARγ2表达;向成骨细胞诱导7、28 d,ALP,茜素红染色阳性,有ALP、Osteopontin及Osteocalcin表达;向软骨细胞诱导21d,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性.结论 晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织可以分离、培养获得SMSCs. SMSCs具有向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞发生定向分化的潜能. 相似文献