Monolayer cultures of normal human bone cells contain multiple subpopulations of alkaline phosphatase positive cells

Summary Cytochemical staining of normal human bone cells in monolayer cultures for alkaline phosphatase (ALP) indicated that the cultures contained mixed-cell populations. Time course evaluations of the cytochemical staining revealed, in addition to the ALP-negative cell population, at least two subpopulations of ALP-positive human bone cells with different levels of ALP. A cytochemical method has been developed which separates the ALP-positive cells into high and intermediate ALP subpopulations. In this method, human bone cells were stained for ALP using an azo-dye method and incubating at 4°C for 10 and 30 minutes, respectively. We defined the cell population that stained positively for ALP at 10 minutes as strong ALP-positive cells, and both strong and intermediate cells were stained at 30 minutes. The intermediate cells were determined from the difference between the values at the two time points. The intra- and interassay variations of the assay, with the same investigator in blinded investigations, were both less than 10% and the interobserver variation was approximately 25%. Analysis of the distribution of ALP levels in cells with a laser densitometer confirmed the presence of at least three cell subpopulations. 1,25(OH)₂D₃ treatment increased the proportions of both ALP-positive cell populations, whereas TGF-beta treatment increased only the intermediate ALP-positive cell population. On the contrary, fluoride increased the proportion of the strong ALP cells, and IGF-1 had no effect on the proportions of either ALP-positive subpopulation. When the ALP-specific activity was compared with the percentage of each ALP-positive subpopulations for the cells treated with effectors, the ALP-specific activity correlated with the total ALP-positive and with the strong ALP-positive populations but not with the intermediate ALP-positive subpopulation. In summary, this study represents the first evidence that normal human bone cells in monolayer cultures contained at least two subpopulations of ALP-positive cells, and that bone cell effectors could have differential effects on each cell population.     

系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型的关系

目的：探讨增殖性肾小球肾炎大鼠动物模型中系膜细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）表达与细胞表型的关系。方法：应用单克隆抗体1－22－3（MoAb1-22-3)及Habu蛇毒素分别诱导大鼠增殖性肾小球肾炎动物模型。用免疫组化技术并结合计算机图像分析，检测两个不同诱因引起模型的各个阶段的系膜细胞内α－平滑肌肌动蛋白，SMeb的表达程度，系膜细胞增殖和细胞外基质（ECM）分泌的情况。结果：在MoAb1-22-3模型，随着系膜细胞增殖程度的加理，ECM积聚增多，α－SMA的表达程度也增加，三者平行变化并具有高度相关性，而Habu模型则系膜细胞增殖和ECM增加的同时α－SMA，SMemb表达不增加。结论：α－SMA不是系膜细胞被激活并处于增殖／分泌表型唯一标志。     

肿瘤抑制因子PTEN蛋白在自发性高血压大鼠主动脉平滑肌中的表达

目的：研究PTEN蛋白在雄性自发性高血压大鼠及SD大鼠主动脉中的表达。方法：取18周龄和26周龄雄性自发性高血压大鼠及同龄雄性SD大鼠主动脉石蜡包埋切片，免疫组织化学观察PTEN在主动脉平滑肌细胞中的表达。结果：SD大鼠主动脉平滑肌细胞中存在PTEN阳怀免疫反应产物。自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞也存在PTEN阳性免疫反应产物，但免疫反应产物的染色强度明显低于SD大鼠。结论：SD大鼠主动脉平滑肌细胞PTEN高表达，自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞PTEN表达呈下降趋势。提示PTEN可能在自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞重塑过程中发挥作用。     

二甲基亚砜诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的研究

目的 :研究二甲基亚砜 (DMSO)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法 :用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肝癌细胞BEL 74 0 2 ,应用普通光镜、荧光显微镜、MTT分析方法和流式细胞技术 (FCM )检测肝癌细胞凋亡的形态学变化、细胞存活率、凋亡百分率和细胞周期分布的变化。结果 :DMSO诱导BEL 74 0 2细胞核DNA凝缩和核片段化 ,最后形成凋亡小体 ;随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长 ,细胞存活率明显下降 ,其IC50 为 1.9% ;2 %的DMSO处理细胞 12h ,凋亡率达 17.2 1% ,同时S期细胞明显增加 ,G2 M期细胞明显下降。结论 :DMSO可诱导人肝癌细胞凋亡 ,并使细胞受阻于S期而进入凋亡程序。     

长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察

目的：研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化。 方法： 采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞，并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞，采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力。然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养，定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白、尿素氮的水平。采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性（EROD）方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能。 结果： 新鲜分离的大鼠肝细胞总数（2-3）×108cells/whole liver，Percoll分离液纯化后活力和纯度在90%以上。HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态。AST、ALT水平在培养3 d后下降显著，6-9 d后趋于相对稳定的低水平。白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18 d内维持在较高水平。可在3-6 d检测到CYPⅠA1酶活性。 结论： Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度，HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力，适合肝细胞的体外长期培养和功能研究。     

平阳霉素对HeLa细胞的大分子生物合成及超微结构的影响

作者用同位数前体参入法及透射与扫描电镜研究了平阳霉素(博莱霉素A_5)对HeLa细胞大分子生物合成及超微结构的影响。结果显示:平阳霉素能抑制HeLa细胞DNA,RNA和蛋白质的生物合成,对DNA的抑制作用强,ID_(50DNA)为42.77μg/ml。表现为:染色质减少,核内电子密度低,核仁分离及“核仁帽”形成,细胞表面微绒毛消失或变形,最终导致质膜破裂等。作者认为,细胞膜是否为此类药物作用的靶位值得进一步研究。     

转TrkC基因神经干细胞移植对脊髓损伤的治疗作用

目的 研究转酪氨酸激酶C（tyrosine kinase C，TrkC）基因神经干细胞（neural stem cells，NSCs）移植治疗脊髓损伤的作用。方法 60只SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、脊髓半切组（B组）、NSCs移植组（C组）、NSCs移植＋神经营养素（NT）-3局部使用（D）组、转TrkC基WNSCs移植组（E组）和转TrkC基因NSCs移植＋NT-3局部使用组（F组），每组10只。脊髓损伤后第9天进行细胞移植。各组大鼠在细胞移植后2个月，行体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查以及脊髓运动功能（BBB）评分。结果 细胞移植后2个月SEP和MEP发生潜伏期和峰峰波幅以及右后肢BBB评分的恢复均以下组最佳，与其他各组比较，差异有统计学意义（P＜ 0．05，0．01）。结论在局部给予的NT-3作用下，转TrkC基因NSCs能较好地促进损伤脊髓功能的恢复。     

不同组织来源临床肿瘤主要细胞周期素表达类型的研究

目的观察人类主要细胞周期素（Cyclin D1、E、A、B1）在临床肿瘤细胞中表达特征并进行分类，探讨其对临床肿瘤分类的可行性及潜在意义。方法用流式细胞术（FCM）双参数法半定量检测161例恶性肿瘤手术切除标本细胞中Cyclin D1、E、A、B1表达，根据不同Cyclin在细胞周期中的作用及其异常表达特征，将肿瘤细胞主要Cyclin表达分为不同类型。结果细胞周期外Cyclin（D1）及周期内Cyclins（E、A、B1）在临床肿瘤细胞中表达无组织差异性（P〉0．05）。其异常表达大致可归为5种类型：Ⅰ型Cyclin（D1、E、A、B1）均高表达；Ⅱ型Cyclin D1低表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式高表达；Ⅲ型Cyclin D1不表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式高表达；Ⅳ型Cyclin D1不表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式低表达；V型Cyclin（D1、E、A、B1）均不表达；再根据各型中不同周期内Cyclin的优势表达分为相应不同的亚型。a亚型：Cyclin（E、B1）表达为主；b亚型：CyclinE表达为主；c亚型：Cyclin B1表达为主；d亚型：Cyclin（E、A、B1）表达为主。肿瘤细胞主要Cyclin表达类型及相应亚型分布无组织来源的差异性（P〉0．05）。结论主要Cyclins表达类型可以作为不同组织来源肿瘤分类的依据，可能是体现不同肿瘤细胞周期破坏共同特征较为客观分类方法。     

白细胞介素-15对骨髓增生异常综合征骨髓造血干/祖细胞增殖的影响

目的：观察白细胞介素(IL-15)对体外培养的骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34^ 细胞增殖作用。方法：应用单克隆抗体免疫磁珠分离系统提取MDS患者CD34^ 细胞，以加IL-15组为实验组，不加IL-15组为对照组，进行液体和甲基纤维素半固体集落培养，计算培养后细胞数和CFU—E、BFU—E、CFU—GM、CFU—GEMM等集落数，并用MTT比色法检测IL-15对MDS患者CD34^ 细胞增殖的抑制作用，流式细胞术检测上述培养细胞周期的变异情况。结果：11例MDS对象平均CD34^ 细胞比例、回收率、纯度和富集倍数均达要求，MTT比色法检测IL-15对CD34^ 细胞的增殖作用呈最佳浓度效应，最佳浓度为20μg／L，细胞增殖抑制最低峰值时间为8d。用0μg／L IL-15(对照组)和20μg／L IL-15(实验组)作用MDS CD34^ 细胞，计数显示培养细胞最大增殖倍数和集落形成比率实验组均较对照组明显增加，IL-15作用后各细胞周期G1、S、G2期比例有明显改变，与对照组比较，差异有统计学意义。结论：IL-15对MDS CD34^ 细胞有促增殖效应，与其它造血生长因子具有协同作用，对MDS治疗可能有一定的应用前景。     

苯乙酸对人结直肠癌细胞HCT-8的G1细胞周期阻滞及增殖抑制作用

摘要：目的 探讨诱导分化剂苯乙酸（PA）对人结直肠癌细胞系HCT 8细胞周期及增殖的影响。 方法 应用MTT比色法，以1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mmol/L的PA作用于体外培养的HCT 8细胞，分别于24，48，72h后对细胞增殖进行检测；流式细胞术分析细胞周期。结果 随着PA浓度的增加（1～5 mmol/L）或药物作用时间的延长（24～72h），肿瘤细胞生长抑制率明显增加。PA1~5mmol/L作用24h细胞生长抑制率为5.1%-24.3%，48h为16.7%-72.3%，72h为30.2%-93.4%。PA作用细胞72h后，G0/G1期比例显著下降，S期比例相对升高，组间差异显著（P＜0.05）。结论 PA在诱导分化结直肠癌HCT 8细胞过程中，可诱导G1细胞周期阻滞，抑制细胞增殖。