基因步移在分离蚊虫细胞色素P450启动子中的应用及意义

目的：快速扩增出白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6N3基因（CYP6N3）上游启动子区序列。方法：根据本室已获得的白纹伊蚊CYP6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的5′－末端核苷酸序列,设计2个反向特异引物（GSP1和GSP2）,利用4种限制性内切酶Dra I、EcoRV、PvuⅡ和Stu I分别消化白纹伊蚊溴氰酯抗性株高分子量基因组DNA,消化产物与适配子连接产生4种消化的DNA库（DL1、DL2、DL3及DL40,并分别以此为模板,进行基因步移。用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第1步PCR扩增,然后再以第1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第2次PCR扩增。结果：第1步PCR结果显示：在上述4种消化文库中分别扩增出约806、2190、2206和3076bp的特异条带;第2步PCR结果与第1次PCR相类似,但各泳道主带扩增效率明显升高。结论：本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6N3上游启动子区核苷酸序列及其4种限制性内切酶图谱。此外还对基因步移法是在昆虫细胞色素P450多样性及其参与杀虫剂抗性分子机理研究中的意义进行了讨论。     

脂质体介导下重组pcDNA3-hBMP3转染兔关节软骨细胞的条件

目的　探讨基因转移效率与 pc DNA3- h BMP3质粒及阳离子脂质体的浓度、转染时机以及细胞的种殖密度等因素的关系 ,以寻求最佳的基因转染条件 .方法　细胞密度按 2× 10 4· cm- 2 接种后 ,对细胞接种后即时、孵化 2 ,5和 7d进行转染效率研究 ;G418浓度每 m L DMEM分别含有 2 0 0 ,30 0 ,40 0 ,5 0 0和 6 0 0μg,探讨 G418对软骨细胞的杀伤作用 ;选择不同细胞接种密度、不同脂质体浓度和 pc DNA3- BMP3浓度 ,在细胞对数生长期且细胞融合至 70 %～ 80 %时开始做转染 ,各组软骨细胞爬片的原位杂交结果通过计算机图像分析 ,以其灰度值判定基因转染的效率 .结果　最佳期的转染时机为软骨细胞接种后在孵箱内放置 2 d转染 ,即在软骨细胞对数生长期内做转染 .G418对软骨细胞的最佳筛选浓度为 40 0 mg· L- 1 .最佳的细胞种植密度、pc DNA3- BMP3浓度和脂质体的量应分别为 2× 10 4· cm- 2 ,5 μL 和 10 μL.结论　通过本研究探索出脂质体介导下 pc DNA 3- BMP3转染兔关节软骨细胞的最佳条件 .     

1—（9H—卟唑—4—氧）—3—取代氨基—2—丙醇类化合物的合成及生物活性（Ⅰ）

目的：寻找有-β－受体阻滞活性,且高效低毒的化合物。方法：以β－受体阻滞剂咔唑洛尔为先导化合物,根据药物设计中的结构拼合原理,对其内醇胺侧链进行结构修饰,设计并合成了10个1－（9H－卟唑－4－氧）－3－取代氨基－2－丙醇类化合物V1－V10。结果和结论：所合成的目的物均未见文献报道,结构经红外光谱、核磁共振氢谱、质谱、元素分析或高分辨质谱确证。初步药理筛选结果显示,10个化合物均能够不同程度地拮抗异丙肾上腺素引起的心支过速,其中化合物V1、V3、V4的活性与先导化合物相似。     

预真空灭菌器B-D试验失败的原因与处理方法

Ｂ-Ｄ试验全称叫布维 狄克试验 (Ｂｏｗｅｎ Ｄｉｃｋｔｅｓｔ) ,是专用于预真空压力蒸汽灭菌器空气排除效果的检测方法[1 ] 。它是灭菌前或检修完毕后必须进行的灭菌器空锅灭菌测试工作。Ｂ Ｄ试验失败表现在指示图上的异常颜色变化有以下 4种情况 :①四周为标准的褐色或黑色 ,中间部分有 4～ 1 0ｃｍ2 明显未变色。②中间部位变色比外部淡 ,呈由外到内逐渐变淡的现象。③变色不均匀 ,也无规律。④褐色或黑色的条纹上呈现条状或块状白色斑块 ,边缘较模糊。现就Ｂ Ｄ试验失败的原因及处理方法分析如下。1　材料和方法　　山东新华医疗器械厂…     

3T3—L1脂肪细胞中高糖诱导胰岛素抵抗的分子机制

We investigated the cellular effect of high glucose using 3T3-L1 adipocytes on glucose transport activity, the expression of insulin signaling proteins and IRS1 tyrosine phosphorylation. Results showed that adipocytes treated with different high glucose (10, 15 and 25 mmol.L-1) for 24 hours showed to impair the basal and insulin-induced increase in glucose uptake in a dose-dependent manner and decreased significantly IRS1 tyrosine phosphorylation. High concentration of glucose produced opposite effects on IRS1 and IRS2: down-regulated IRS1 protein expression level and tightly up-regulated IRS2 contents. p85 and PKB were unaffected. Chronic exposure to high glucose can inhibit glucose uptake and induce insulin resistance. The mechanism may be involved in affecting the expression of insulin signaling peptides and tyrosine phosphorylation.     

体外观察维甲酸对NIH／3T3细胞的抑制作用

目的 评价维甲酸（RA）对NIH／3T3细胞生长的影响。方法 体外观察5种浓度RA对NIH／3T3细胞生长的作用。结果 5种浓度的RA均能抑制NIH／3T3细胞的生长,且随着浓度的升高,RA抑制细胞增殖的作用增强。结论 RA能抑制NIH／3T3细胞的增殖。     

维生素D_3治疗反复呼吸道感染的临床观察

<正> 反复呼吸道感染是严重危害小儿健康成长的常见病,诸多资料报道与机体免疫功能密切相关,笔者1998年1月～12月随机抽样反复呼吸道感染儿(简称复感儿)使用维生素D_3(简称VD_3)治疗随访观察,报告如下。     

维生素K3在儿科临床的应用

维生素Ｋ３以往广泛应用于止血、解除胆道和胃肠痉挛所致疼痛,近十年来,应用维生素Ｋ３解除支气管痉挛及治疗小儿肠炎报道日益增多,现介绍如下。 １　治疗小儿肠炎 １．１作用机理：小儿肠炎是由不同原因引起并以腹泻为主要表现的肠道功能紊乱综合征。及时有效地控制肠道炎症,抑制胃肠道平滑肌蠕动,减少水及电解质丢失是本病治疗的关键。维生素Ｋ３治疗小儿肠炎的机理：①能抑制肠道致病菌的生长,有消炎作用;②能直接解除平滑肌痉挛,减少肠道蠕动,增加水分的重吸收,有止泻、解痉及止痛作用;③对抗乙酰胆硷,组织胺和肾上腺素对肠…     

食管癌中3p24和11p15.5染色体位点潜在抑癌基因的研究

目的：探讨３ｐ２４染色体位点的杂和缺失和１１ｐ１５．６位点的点突变同食管癌之间的相关性,寻找这２个位点中潜在的抑癌基因,并希望通过此研究能为最后确定该基因的功能奠定基础。方法：用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测３ｐ２４染色体的３个位点（ＥＡβＭＤ,ＥＡ,βＨ,ＥＡβＲ）上等位基因的杂合缺失情况,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测１１ｐ１５,位点的点突变。结果：经ＲＦＬＰ法显示：在３ｐ２４的ＥＡβＭＤ位点,杂合缺失率为７     

多巴胺D2受体基因启动子A-241G多态性在精神分裂症家系中的连锁不平衡传递

目的:探讨多巴胺D2受体基因(dopamine D2 receptor,DRD2)启动子A-241G多态性与精神分裂症的关系.方法:采集101个家系,每家有2名或2名以上符合ICD-10精神分裂症诊断标准患病同胞且父母存活.对DRD2启动子的A-241G多态性进行检测.结果:(1)DRD2启动子的A-241G等位基因频度和基因型频度在父母组、非患病同胞组和患病同胞组之间差异无显著性,在3组不同性别之间以及在精神分裂症不同亚型之间基因型频度和等位基因频度的分布差异亦无显著性;(2) 传递不平衡检验发现在患病同胞(χ2 =0.94,P>0.05,OR=0.83,95%可信区间0.57～1.21)中未表现传递不平衡性,而在非患病同胞(χ2 =6.76,P<0.01,OR=3.17,95%可信区间0.41～24.71)中存在传递不平衡性,其中-241A等位基因在非患病同胞中传递较多;(3) 基因型与妄想总分、幻觉总分、思维形式障碍、情感障碍、精神性失语及症状持续时间等临床特征相关.结论:DRD2启动子的A-241G多态性对精神分裂症的发病和临床表现具有一定影响.