龙葵碱对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的：建立人结肠癌鸡胚移植模型,研究龙葵碱对其血管生成的影响。方法将鸡胚分为对照组和低剂量组、中剂量组、高剂量组（均n＝10）,将培养的人结肠癌细胞系HT‐29细胞株接种到鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上,通过立体显微镜、Image‐proplus6．0图像分析软件及免疫组织化学苏木精‐伊红（HE）染色法,观察移植瘤在CAM上血管生成的特点,及不同龙葵碱剂量对血管生成的影响。结果HT‐29细胞接种到CAM第3～5天,大量血管向瘤体集中,长入或跨越瘤体表面,肿瘤迅速生长。给药后第5天进行拍照,图像分析,定量计算血管新生面积明显低于对照组,且呈剂量依赖性,各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。免疫组织化学检测表明不同剂量龙葵碱的微血管密度明显低于对照组,与血管新生面积相一致;ki‐67抗原表达指数逐渐下降,实验组低于对照组,且各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。结论龙葵碱能明显抑制人结肠癌HT‐29细胞株诱导的血管生成,从而抑制肿瘤的生长,为抗肿瘤血管生成的治疗方面提供了重要依据。     

单色光对鸡视网膜钟基因和钟蛋白昼夜节律表达的影响

禽类具有优越的视觉机能,不仅具有明暗觉,还具有色觉。本实验室前期研究发现,单色光可影响家禽的生长发育、免疫机能和生产性能。视网膜作为禽类生物钟3大中枢振荡器之一,可以感受光照,自发产生分子昼夜节律震荡,与下丘脑和松果体共同调节机体的生物节律。因此,本试验采用红、绿、蓝和白光饲养AA肉鸡,研究单色光对视网膜钟基因昼夜节律表达的影响。结果发现,1不同光色下,鸡视网膜钟基因除Clock外,Bmal1、Bmal2、Cry1、Cry2、Per2和Per3均呈昼夜变化,其中Bmal1、Cry1、Per2和Per3呈昼夜节律性表达,而Bmal2、Clock和Cry2不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使正调控基因Bmal1、Bmal2和Clock表达水平升高;而红光使负调控基因Cry1、Cry2、Per2和Per3表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使Bmal1中值升高,振幅增大,相位提前;红光则使Bmal1中值降低,振幅减小,相位提前;同时,红光使Cry1和Per3中值升高,相位延迟;蓝光使Cry1、Per2和Per3中值降低,振幅减小。2不同光色下,鸡视网膜钟蛋白BMAL1、CLOCK均呈现昼夜变化,其中BMAL1呈现昼夜节律性表达,CLOCK的表达不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使BMAL1和CLOCK表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使BMAL1中值升高,振幅增大,相位提前,红光则使BMAL1中值降低,振幅减小,相位提前。以上结果表明,单色绿光促进鸡视网膜正调控钟基因Bmal1、Bmal2、Clock的表达,使正调控钟蛋白BMAL1和CLOCK水平升高;红光则促进负调控钟基因Cry1、Cry2、Per2、Per3的表达。     

基因重组心肌肌钙蛋白Ⅰ融合蛋白的抗肿瘤效应

目的研究基因重组心肌肌钙蛋白I与人工短肽的融合蛋白(CIS)对肿瘤生长的作用。方法用MTT法观察CIS体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的作用。利用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察CIS对新生血管生长的影响。用6种小鼠肿瘤异位可移植模型观察CIS在体内对肿瘤生长的作用。结果 CIS对HUVEC细胞增殖具有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系;鸡胚绒毛尿囊膜实验显示,CIS浓度为5、10 mg·L~(-1)时,新生血管生成的数量明显减少;荷瘤鼠体内异位移植模型实验显示:CIS(10 mg·kg~(-1))处理组肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,对S180肿瘤瘤重抑制率85.3%,对Lewis肺癌肿瘤瘤重抑制率87.0%,对H22肝癌肿瘤瘤重抑制率84.2%,对人小细胞肺癌H446肿瘤瘤重抑制率60.42%,对人可移植性肝癌SMMC7721肿瘤瘤重抑制率61.62%,对人胃低分化腺癌BGC823肿瘤瘤重抑制率为41.84%。结论 CIS在体外抑制HUVEC细胞的生长,在鸡胚绒毛尿囊膜实验中,CIS对新生血管生成有明显的抑制作用。在体内,CIS融合蛋白可有效抑制小鼠可移植肿瘤细胞的生长。CIS抗肿瘤效应很可能是通过抑制肿瘤组织中血管内皮细胞的增殖,进而减少肿瘤组织中新生血管生成的数量而达到的。     

过节美食趣谈

狮子头二十四,耍狮子!过节了,来个大大的肉丸子吃,太过瘾了!四喜丸子和狮子头的特点都是大,但是四喜是球形,狮子头发扁,而且有小丸子辅衬,还有讲单不讲双的规矩,皇权13个,王爷11个,头品9个,以此类推。狮子头是淮扬菜系中的一道传统菜肴,传说狮子头做法始于隋朝,原本叫葵花斩肉或葵花肉丸,因形似狮子而得名。     

鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗治疗荷SHG-44人脑胶质瘤大鼠的实验研究

目的探索鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗（pVVP3）对SHG-44人脑胶质瘤生长的抑制作用。方法构建荷SHG-44人脑胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测pWP3在Wistar大鼠体内的抗肿瘤作用。结果pWP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制，其抑瘤率达90．58％。病理组织学及超微结构观察在pWP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明pVVP3对SHG-44人脑胶质瘤生长有抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡。     

我国鸡球虫抗药性现状和抗药机制研究进展

球虫病严重威胁养鸡业健康发展.随着抗球虫药物的使用,鸡球虫的抗药性越来越普遍,增加了该病的防控难度.本文对十年来鸡球虫抗药性调查文献进行了梳理,发现我国各地区鸡球虫对大部分常用药物均具有中度以上的抗药性,华东和华南地区最严重,西北和东北地区的抗药性最弱.在各类药物中,对聚醚离子载体类药物和地克珠利的检测最多,对前者接近一半地区达到完全抗药,而对地克珠利基本为中度抗药,对其他化学合成药物过半数达完全抗药.当然由于地区差异,同一地区仍存在敏感性不同的虫株.各种药物的抗药性产生机制不一样,可能涉及虫体的结构蛋白改变如SAG家族蛋白、细胞膜离子通道、糖或脂肪酸代谢酶如苹果酸脱氢酶或能量代谢酶如细胞色素氧化酶.随着鸡球虫抗药性逐步得到解析,系统监测、科学用药和免疫预防等综合举措将极大消减球虫病对养鸡业的影响,提升经济与社会效益.     

HIV-1外膜蛋白与 IFNα在重组鸡痘病毒中的共表达及特性分析

艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的一类疾病,该病已成为危害人类最严重的疾病之一,研制AIDS疫苗已成为当务之急。外膜蛋白gp12 0是由HIV 1囊膜蛋白gp16 0经蛋白酶裂解而成[1] 。它不仅与病毒进入细胞有关,同时它含有大量刺激机体产生体液免疫和细胞免疫的抗原决定簇[2 4] 。因此,它成为人们研制艾滋病疫苗的重要靶蛋白。以病毒为载体构建基因工程活载体疫苗是当前研制疫苗的一个重要途径,它不仅可以诱导体液免疫的产生,同时可引起特异性CTL ,尤其对于病毒病的预防更为有效。本研究利用鸡痘病毒中国疫苗株为载体,构建了HIV…     

鸡源性高迁移率族蛋白B1多克隆抗体的制备及应用

目的制备针对鸡的高迁移率族蛋白B1(chHMGB1)特异性抗原亲和层析多克隆抗体,并进行初步应用。方法反转录PCR扩增chHMGB1的全长编码基因,通过序列比对分析筛选一段特异性的多肽序列,偶联载体后作为抗原免疫新西兰兔,采集血清,通过蛋白A柱及多肽偶联的Seprose4B柱得到亲和层析纯化的多克隆抗体;并利用Western blot法、间接免疫荧光染色、免疫组化方法进行鉴定。结果成功制备了抗chHMGB1特异性的多克隆抗体。各项实验结果表明该抗体能特异性的识别重组蛋白以及天然的chHMGB1蛋白。结论成功制备了鸡源性高迁移率族蛋白B1亲和层析多克隆抗体。     

基于荧光共振能量转移技术的快速检测CA16型手足口病病原体新方法的建立及其评价

目的：基于荧光共振能量转移（FRET）技术建立一种柯萨奇病毒A组16型（CA16）手足口病病原体快速检测的新方法,并对检测效果进行评价,使其达到疾病爆发流行期间大样本量检测的要求。方法：采用SDS-PAGE凝胶电脉技术和蛋白浓度定量试剂盒测定CA16鸡卵黄抗体（CA16-IgY）纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测抗体效价及特异性,采用紫外可见光谱（UV-Vis）、红外光谱（FTIR）和透射电子显微镜（TEM）等方法对所制备的金纳米粒子（AuNPs）及其生物探针（IgY-AuNPs）的尺寸、形貌和性能进行表征;基于FRET技术构建CA16检测体系,通过优化检测体系中IgY-AuNPs浓度、氯化钠（NaCl）用量和荧光恢复时间等指标,对检测方法的灵敏度、特异度和临床样本检测进行评价。结果：CA16-IgY纯度较高,抗体平均蛋白水平为12.15 mg·L^-1,抗体效价高达1：128 000,特异性良好;AuNPs及IgY-AuNPs的UV-Vis、FTIR和TEM观察结果,IgY已成功标记至AuNPs表面,提示已通过静电自组装成功制备了可以特异性识别CA16的IgY-AuNPs。基于FRET技术构建CA16检测体系,体系经优化后,确定IgY-AuNPs的最佳浓度为0.52×10^-3g·L^-1,NaCl的最佳用量为40 μL,荧光恢复最佳时间为90 min,建立的检测方法的标准曲线为I_525nm=15.452IgC-9.746,R²=0.993 2,检测限为1×10⁴ PFU·mL^-1,与临床检测金标准实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法比较,一致率可达93.75%。结论：成功建立了CA16型手足口病病原体的快速检测新方法,可用于实验室和临床检测。     

无锡地区鸡弓形虫感染的血清流行病学调查

目的了解无锡地区散养鸡的弓形虫感染状况。方法应用ELISA方法调查无锡地区309例散养鸡的弓形虫抗原、抗体阳性率,并与150例集约化养殖鸡的弓形虫感染率进行比较,其中一项阳性即视为弓形虫感染阳性。结果 309例散养鸡中,抗原阳性29例,阳性率为9.39%;抗体阳性53例,阳性率为17.15%;双阳性13例,双阳性率为4.21%;散养鸡总体阳性率为22.33%。集约化养殖鸡总体弓形虫感染率为2.67%。散养鸡感染率显著高于集约化养殖鸡感染率(χ2=29.19,P<0.01)。结论无锡地区散养鸡群弓形虫感染率较高,应引起重视。