脱氢表雄酮对卵巢储备功能下降患者颗粒细胞WNT/CTNNB1通路及IVF结果的影响

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)预治疗对卵巢储备功能下降(DOR)患者颗粒细胞WNT/CTNNB1通路相关信号分子及体外授精-胚胎移植(IVF-ET)结果的影响。方法选择进入IVF周期DOR的不孕患者9例为研究对象,比较分析DHEA预治疗前后IVF结果及卵巢颗粒细胞AKT、CTNNB1蛋白、WNT2 mRNA、CYP19A1 mRNA相对表达量。结果与既往IVF周期比较,DHEA预治疗后基础窦卵泡数目(AFC)显著增加,基础卵泡刺激素(FSH)、FSH/LH的水平明显降低,黄体生成素(LH)水平升高,两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);DHEA预治疗后人绒毛膜促性腺激素(h CG)日雌二醇(E2)水平、获卵数、MⅡ卵子数、优质胚胎数显著提高(P0.05);DHEA预治疗后AKT相对表达量降低、CTNNB1蛋白和CYP19A1mRNA相对表达量升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 IVF治疗过程中,对DOR女性进行DHEA预治疗,可通过作用于WNT/CTNNB1通路相关信号分子改善卵巢微环境,进而提高卵巢的储备功能及反应性,改善IVF结果。     

孕激素受体膜元件1在颗粒细胞中的功能及女性生殖中的作用

孕激素受体膜组件1(PGRMC1)是近年来新发现的特殊受体,属于膜相关的孕激素受体(MAPR)蛋白家族。PGRMC1介导孕酮(P4)的抗有丝分裂和抗凋亡作用,并参与了颗粒细胞合成甾体激素的过程。在临床上,PGRMC1的异常表达与卵巢早衰(POF)及多囊卵巢综合征(PCOS)相关。本文就PGRMC1对颗粒细胞功能的影响、与卵泡发育的关系以及在人类生殖中的作用展开综述。     

促排卵周期卵泡发育与胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体mRNA关系的研究

目的：探讨促排卵周期卵泡发育和体内胰岛样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ)及IGF－Ⅰ受体（IGF－ⅠR）mRNA的关系。方法：用ELISA法检测促排卵周期血清及卵泡液IGF－Ⅰ水平，并分析血清或卵泡液IGF－Ⅰ浓度与卵泡发育数关系。用RT－PCR法检测颗粒细胞IGF－ⅠmRNA表达量。结果：促排卵前，后血清及卵泡液IGF－Ⅰ浓度差异无显著性；低反应组（卵泡数≤3个）颗粒细胞IGF－ⅠmRNA明显低于中，高反应组（卵泡数分别为4－13个和≥14个）。结论：血清IGF－Ⅰ水平不能反映卵泡发育数，颗粒细胞IGF－Ⅰ mRNA的量可能影响促排卵周期卵巢对促排卵药物的反应。     

短时受精不同脱颗粒细胞方式对体外受精结局的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗中几种短时受精脱颗粒细胞方式对胚胎质量及临床结局的影响。方法将261个IVF-ET周期根据脱颗粒细胞时间分为：短时受精后18小时脱颗粒细胞组（A组）94个周期、短时受精后5h脱颗粒细胞组（B组）95个周期和短时受精5h后部分（1/3-1/2）脱颗粒细胞组（C组）72个周期。分别比较三组的受精率、多精受精率、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果三组的受精率、正常受精率、多精受精率、卵裂率、临床妊娠率和流产率差异无统计学意义（P〉0.05）,A组的优胚率、胚胎利用率和胚胎种植率显著高于B组（P〈0.05）。结论短时受精后即刻剥除部分卵子颗粒细胞观察第二极体,在确保受精的情况下剩余卵母细胞保留自体卵周颗粒细胞共培养,可以提高常规IVF的胚胎质量,从而提高常规IVF总的临床妊娠率和胚胎种植率。     

PGC-1ɑ在多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢组织的表达变化

  目的  探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）大鼠模型及肥胖PCOS大鼠模型卵巢组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α（PGC-1α）的表达,以及PCOS 发生的可能机制。  方法  SD大鼠30只,随机分为对照组、PCOS组及肥胖PCOS组,PCOS两组大鼠每日一次予脱氢表雄酮〔DHEA,60 mg/（kg·d）〕溶于0.2 mL注射用大豆油中皮下注射,共21 d,制备PCOS模型,肥胖PCOS模型组大鼠在DHEA制模基础上加入高脂饮食,每组大鼠各10只。造模前（0 d）和造模后第22天称体质量,取腹主动脉血检测血清睾酮（testosterone,T）水平,取大鼠卵巢组织,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学染色和Western blot检测PGC-1ɑ蛋白表达。  结果   造模前3组大鼠体质量差异无统计学意义,造模后第22天,大鼠增加的体质量以及大鼠血清 T 质量浓度,均为肥胖PCOS组>PCOS组>对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。大鼠卵巢组织HE染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织镜下可见不同发育时期的卵泡和少量黄体,颗粒细胞排列多为4～6层;PCOS组及肥胖PCOS组大鼠卵巢组织中未成熟的小卵泡数量明显增加,颗粒细胞1～3层排列、较松散,部分卵泡闭锁,肥胖PCOS组大鼠卵巢闭锁卵泡直径增大,颗粒细胞层数减少,卵母细胞消失等现象更明显。免疫组化染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织PGC-1ɑ蛋白阳性表达主要分布于卵丘及颗粒细胞。从PGC-1ɑ蛋白在卵巢组织的表达平均灰度均值来看,PCOS组（0.53±0.06）和肥胖PCOS组（0.36±0.03）均低于对照组（0.75±0.03）,差异有统计学意义（P<0.05）,肥胖PCOS组PGC-1ɑ表达低于PCOS组（P<0.01）。Western blot检测结果与免疫组化染色结果一致。  结论  PGC-1ɑ表达降低与高脂环境下卵巢颗粒细胞损伤有关。PGC-1ɑ在卵巢卵泡的颗粒细胞中表达降低可能是PCOS发生发展的重要原因。     

β2糖蛋白I(β2GPI)在卵泡液中的表达水平及其与卵泡发育的关系

目的:探讨β2糖蛋白I(β2GPI)与卵泡发育的关系。方法:选取体外受精/卵胞质内单精子注射(IVF/ICSI)助孕治疗的卵巢功能正常者100例(NC组)、多囊卵巢综合征(PCOS)患者85例(PCOS组),卵巢储备功能低下(DOR)患者62例(DOR组),长方案促排卵,收集人绒毛膜促性腺激素(h CG)注射日血清及取卵日优势卵泡的卵泡液,应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定各组卵泡液中β2GPI的水平;电化学发光法测定h CG注射日血清E2水平,并对IVF/ICSI周期卵泡液中β2GPI水平与h CG注射日血清E2水平、获卵数以及卵成熟率进行相关性分析。结果:各组卵泡液中β2GPI浓度相比均无统计学差异(P0.05);NC组IVF/ICSI周期中卵泡液中β2GPI的水平与h CG注射日血清E2水平、获卵数及卵成熟率均呈负相关(r=-0.279,P0.05;r=-0.243,P0.05;r=-0.711,P0.01)。结论:卵泡液中β2GPI的水平与卵巢功能无显著相关性,卵泡液中β2GPI的表达水平与IVF/ICSI周期中卵泡的发育存在负相关。     

燃煤型氟中毒对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响

目的动态观察燃煤型氟中毒对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法将清洁级SD雌性大鼠90只随机分为对照组、中氟组、高氟组,每组30只,对照组大鼠食用非病区玉米饲料(含氟量5.2 mg/kg),中氟组和高氟组分别在饲料中添加45%和75%的某病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米饲料(含氟量分别为47.8、96.0 mg/kg)。每组分别于60、120、180 d动态观察雌鼠氟斑牙变化情况,测定尿氟、骨氟水平,采用透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构变化,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况。结果成功建立燃煤型氟中毒雌鼠模型。透射电镜下发现,对照组卵巢颗粒细胞形态结构正常;染氟组可见颗粒细胞核膜皱缩,内质网、核糖体逐渐减少,线粒体肿胀,胞浆内出现较多的脂滴,随染氟剂量的增加逐渐出现颗粒细胞凋亡特征。除中氟组染氟60 d时卵巢颗粒细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义外(P0.05),各染氟组雌鼠颗粒细胞凋亡率均高于同期对照组(P0.05),且随染氟时间的延长和剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐增加。结论氟中毒可能通过影响大鼠卵巢颗粒细胞结构,诱导和促进卵巢颗粒细胞凋亡,且颗粒细胞超微结构的损伤程度和凋亡率与染氟时间及剂量有关。     

双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响

目的 探讨双氢睾酮（DHT）对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素（AMH）表达的影响。方法 从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体（FSHR）细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组（无药物干预）、10^-8mol/L DHT组、10^-5mol/L DHT组,2×10^-5mol/ L蛋白激酶B(Akt)抑制剂（MK-2206 2Hcl）组和10^-8mol/L DHT+2×10^-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化;Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果 大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93.33%±3.09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8 mol/L DHT和10-5 mol/L DHT均可使颗粒细胞AMH表达增加（P<0.05）,但这两个浓度的DHT对颗粒细胞AMH的表达影响差异无显著性（P>0.05）;与对照组相比,10^-8 mol/L DHT可以使p-Akt、AMH表达升高,2×10^-5 MK-2206 2Hcl使AMH表达降低（P<0.05）;与2×10^-5MK-2206 2Hcl相比,10^-8mol/L DHT+2×10^-5 MK-2206 2Hcl处理组AMH表达升高（P<0.05）。结论 DHT可以上调大鼠原代卵泡颗粒细胞AMH的表达,这种作用可能与Akt信号通路有关。