环境雌激素基因重组酵母测评系统的应用

检测和评价环境雌激素及其它内分泌干扰物，是进行内分泌干扰物研究首先要解决的关键问题之一。根据天然雌激素的主要分子作用机制，在酵母中表达有活性的人雌激素受体(hER)蛋白，同时将报告基因置于雌激素效应元件(ERE)控制之下并导入酵母细胞中，通过检测报告基因的表达产物来反映环境雌激素通过雌激素受体介导而产生的拟雌激素作用。我所何世华博士用分子生物学方法基因重组出了用于检测雌激素类物质的酵母菌，并建立了环境雌激素酵母测评系统。现用该评价系统对不同样品进行检测，结果如下。     

酵母双杂交系统的研究进展与应用

酵母双杂交系统作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台,在近几年来得到了广泛运用.酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术.大量的研究文献表明,酵母双杂交系统既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的相互作用,也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的相互作用.因此,它在许多的研究领域中有着广泛的应用.本文就酵母双杂交的技术平台和应用加以介绍.     

人前列腺特异性抗原基因重组表达载体pPICZaC-m PSA的构建和表达

目的在毕赤酵母细胞中表达PSA，为临床的检测和治疗提供材料。方法经KT—PCR获得PSA全长cDNA并测序。将编码成熟PSA237氨基酸的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPICZα—C，该栽体含有AOXl启动子和a-factor信号肽序列，构建表达载体体pPICZαC—mPSA。甲醇诱导X33细胞表达rPSA，ELASA试剂盒筛选高表达rPSA的细胞株。结果获得了人PSA全长序列，构建了表达栽体pPICZα-mPSA。获得了高表达rPSA的酵母X33细胞株。表达产量为1．2mg／L。结论建立了重组人前列腺特异性抗原的毕赤酵母表达体系。规族化的生产有助于PSA的生物学特性的研究和临床检测和治疗的应用．     

不同剂量重组(酵母)乙肝疫苗接种后抗体阳转率对比

目的探讨不同剂量的重组（酵母）乙型肝炎疫苗接种阳转率的差别。方法将200例乙肝标志物阴性的门诊预防接种者随机分为A、B两组。A组重组（酵母）乙型肝炎疫苗的剂量为5μg，B组为10μg，两组均按0、1、6个月免疫程序接种3针。结果A组阳转率为75％，B组阳转率为92％。两组比较，x^2=10．488，P〈0．01。结论接种10μg重组（酵母）乙型肝炎疫苗抗-HBs阳转率高，免疫效果优于5μg重组（酵母）乙型肝炎疫苗。     

重组乙型肝炎疫苗(酵母)按不同免疫程序接种成人的免疫原性研究

目的探讨重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酵母)对成人的免疫原性。方法在济阳县乡村随机整群选择健康的15~40岁乙肝病毒(HBV)易感者591人,按0、1、6个月和0、6个月免疫程序,接种广东省深圳康泰生物制品有限公司生产的重组乙肝疫苗(酵母),每剂10μg/1.0ml。结果全程免疫后1个月时,0、1、6个月和0、6个月两种免疫程序的有效乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)阳转率分别为95.91%、86.08%,两种免疫程序产生有效抗-HBs,抗体几何平均浓度(GMC)分别为332.5毫国际单位/毫升(mIU/ml)(95%CI为279.17mIU/ml~396.03mIU/ml)和227.4mIU/ml(95%CI为186.34mIU/ml~277.51mIU/ml)。0、1、6个月免疫程序的有效抗-HBs阳转率和GMC均高于0、6个月程序,差异有显著的统计学意义。结论10μg/ml重组乙肝疫苗(酵母)接种15~40岁人群的免疫原性良好,其长期效果需进一步随访。     

酵母SOD分离纯化及其酶学性质的研究

目的发酵培养Y12 酵母菌分离制备酵母SOD并研究其部分酶学性质。方法用已筛选出的一株Y12 酵母菌对其在优化培养条件下发酵培养得到湿菌体 ,破壁抽提得SOD粗酶液 ,采用硫铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG 10 0凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换柱层析 ,分离得到酵母SOD并测定其部分酶学性质。结果Y12 酵母菌SOD产量达 12 6 3u·g-1湿菌体 ,分离得到酵母SOD ,该酶属Cu、Zn SOD ,比活力为 10 73 5u·mg-1,活力回收率为 5 4 1% ,紫外吸收峰在2 5 7 2nm ,分子质量为 32 4 5 6u ,亚基分子质量为 16 2 2 7u。结论此酵母SOD与文献中报道的动物血红细胞Cu、Zn SOD基本相近。     

老年肺炎的治疗

肺炎指的是肺组织受刺激而表现出的炎症反应，如细菌或病毒的感染、吸入某些化学物质、或者胸腔遭受损伤都会引起肺炎。少数病人也会有立克次体、真菌以及酵母引发的肺炎。发生肺炎时，受损伤的部分通常会粘连，肺泡内充满炎性渗出物、炎性细胞和纤维蛋白。     

毕赤酵母表达阿片肽发酵条件的研究

研究了由毕赤酵母胞内两步发酵法表达活性小分子阿片肽的条件.正交实验确定最佳生长条件为:甘油24g/L、酵母膏11g/L、蛋白胨22g/L、YNB 20ml/L,初始pH5.0.菌体密度可达2.46;以单因素实验确定最佳表达条件为:起始菌体浓度2.44,初始pH 6.25,每10h流加0.6%甲醇(v/v),表达时间96h.阿片肽250ml摇瓶产量由196mg/L提高至496mg/L.     

两种培养基分离鉴别酵母样真菌在临床上的应用

目的：探讨CHROMagar显色培养基和沙保弱培养基分离鉴别酵母样真菌的差异。方法：取临床标本263例，同时分别划线接种于两种培养基上，分离鉴别酵母样真茼。结果：CHROMagar显色培养基分离鉴别酵母样真茼快速、简便、准确，通过茸落显色易于观察、假阳性低、检测效果好。沙保弱培养基尚需改进本身质量。结论：CHROMagar显色培养基的质量在分离鉴别酵母样真苜上优于沙保弱培养基。     

免疫抑制小鼠阿萨希丝孢酵母菌皮肤感染差异表达基因筛选

目的观察免疫抑制宿主和健康宿主在遭遇条件致病真菌初期基因表达的差异,筛选新的真菌免疫相关基因,以进一步了解条件致病真菌导致系统性真菌病的发病机制. 方法免疫抑制和健康小鼠各6只,经皮下接种阿萨希丝孢酵母菌(Trichosporon asahii)孢子,24 h后处死,取皮损组织,提取总RNA进行基因表达谱芯片研究. 结果筛选出11条免疫相关差异表达基因,实验组编码补体C2、TNF-诱导蛋白、干扰素诱导蛋白、CD53、CD79、CD22等10个免疫相关基因表达下调,编码触珠蛋白(haptoglobin)基因表达上调. 结论实验显示免疫抑制小鼠皮损局部免疫功能在免疫应答的某些环节受到了抑制,如补体激活、干扰素诱导等,这些改变可能在丝孢酵母菌皮肤感染,甚至进一步播散的过程中发挥着重要作用.