HCV NS3 N末端部分氨基酸缺失对NS3/NS3与NS3/NS4A分子间相互作用的影响

目的旨在弄清ＮＳ３参与分子间相互作用的确切区段，为研究针对ＮＳ３的抗ＨＣＶ寡肽小分子药物的设计提供依据。方法参照ＨＣＶ中国河北株序列设计ＮＳ３引物，将其Ｎ末端的前１５个和前３０个氨基酸分别缺失掉。然后用酵母双杂交系统检测ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用强度在缺失前后的变化，从而判明ＮＳ３Ｎ末端氨基酸在分子间相互作用中的意义。核苷酸序列分析采用ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ３７３Ａ型自动测序仪。结果ＮＳ３Ｎ末端氨基酸缺失前后，ＮＳ３／ＮＳ３分子间及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用的强度相差有显著性（Ｐ＜０．０１），但缺失１５个氨基酸和缺失３０个氨基酸对上述相互作用强度的影响差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ＮＳ３Ｎ末端的１～３０个氨基酸在ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用中有一定意义，其Ｎ末端前１５个氨基酸（ＡＰＩＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧ）对于分子间相互作用更为关键。本研究结果将为抗ＮＳ３丝氨酸蛋白酶活性的寡肽抑制物的研究打下基础，并为抗ＨＣＶ的寡肽小分子药物的设计提供依据     

玉米浆用量、渗透压和耗糖速率对甘油发酵的影响

Candida krusei发酵生产甘油过程中,菌体生长由玉米浆限制,菌体对玉米浆的得率为1．63g/g,培养其中玉米浆浓度相同时,增加渗透压或通过流加补料限制生长阶段的菌体生长,可使甘油生产阶段的比耗糖速率减慢,比耗糖速率保持在不很高的水平,可以因消耗的葡萄糖用于生长,维持,甘油和副产物形成所占比例的变化而提高甘油得率。     

223株酵母样真菌的鉴定及药敏分析

我院检验科细菌室自 1 998年 1月至 2 0 0 0年 2月间从临床标本中分离到酵母样真菌 2 2 3株 ,用念珠菌鉴定试条 ID32 C进行鉴定 ,并用 ATB FUN-GUS药敏试条对 6种抗真菌药物进行药敏试验 ,结果报告如下。1　材料和方法1 .1　材料1 .1 .1　菌株来源 :临床送检培养标本 ,2 2 3株酵母样菌中来自痰标本 1 86株 (包括咽拭子 7株 ) ,尿标本 1 8株 ,粪便标本 8株 ,血标本 4株 ,其他标本 7株。1 .1 .2　 ID32 C念珠菌鉴定试条 ,ATB FUNGUS药敏试条 ,ATB expression全自动药敏分析仪均为法国生物—梅里埃公司产品。1 .2　方法 :标本接种于…     

rhIL—13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究

目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素-13（rhIL-13),便于进一步研究开发。方法 根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL-13编码基因片段,经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL-13cDNA全长序列;将其托入pPICZαA质粒中,构建成pPICZαA-IL-13表达载体。该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL-3表达阳性菌株;用Western Blotting和ELISA检测发酵上清中IL-13的抗原性和表达量,B9-11细胞株分析其生理学活性。结果 15%—SDS-PAGE显示重组人IL-13分子量约13kd,Western-blotting证实为人IL-13,ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达15ug/ml,其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论 成功获得IL-13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株。该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。     

毕氏酵母KM71和GS115发酵工艺的比较

目的：探讨毕氏酵母菌KM71和GS115表达人可溶性FLt3配体,CD40L－IL－13,IL－11及TNFα等外源蛋白的发酵工艺,方法：挑取KM71或GS115单个菌落在BMGY培养基中初步培养,在其A600值达2－6时,转入发酵罐中行高密度发酵,结果：KM71诱导表达时,以甲的需求较低,故添加甲醇速度应较慢,并应提高菌的接种浓度;而S115菌株生长速度较快,代谢甲醇的能力较强,表达量相对较高。结论：KM71和GS115可用于不同性质外源蛋白的表达,表达量较高,是一种理想的表达系统。αα     

廊坊地区3岁计划免疫健康儿童乙型肝炎疫苗免疫效果调查

目的:了解廊坊地区3岁计划免疫健康儿童乙型肝炎疫苗免疫效果,从而对酵母重组乙型肝炎疫苗的免疫效果进行评价。方法:酶联免疫吸附技术(ELISA)检测1998、1999、2000年3年间经过酵母重组乙型肝炎疫苗计划免疫的廊坊地区3岁健康儿童血清中乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),测定其吸光度值(CO),CO/阴性对照的CO>2.1为阳性,当抗-HBs为阳性且CO/阴性对照的CO>10时,则说明体内已有免疫力可预防HBV的感染,如抗-HBs<10则保护力减弱甚至不能防止HBV感染。结果:1998年共检测542名儿童,其中免疫成功的占42.4％;1999年检测602名,其中免疫成功的占45.7％,2000年共检测410名,免疫成功的占40.2％。经过酵母乙肝疫苗计划免疫的廊坊地区3岁健康儿童整体免疫成功率与其它文献报道比较,一直处于较低水平。讨论:机体的免疫应答与疫苗的种类、质量有关,并且健康儿童中有一部分群体肝细胞对酵母重组乙肝疫苗处于不应答状态。     

四糖小培养在酵母样真菌鉴定中的应用

目的:探讨四糖小培养在酵母样真菌检测中的应用.方法:采用四糖发酵、玉米-吐温琼脂小培养、芽管生成实验,对本院1996～1997 2 a内临床发现的202例酵母样真菌进行鉴定.结果:白色念珠菌感染占65%(含类星形念珠菌3%),热带念珠菌占17%,近平滑念珠菌占5%,少见菌种及酵母菌占13%.从标本来源看,呼吸道标本占56.4%,泌尿道标本占19.0%,外伤标本占12.3%,消化道标本占8.4%,血液标本占2.9%,骨髓及脑积液标本各占0.5%.结论:检测结果和临床相符,四糖小培养法有较高的推广价值.     

杂合启动子控制下乙肝病毒表面抗原SA—28融合基因在酵母中？…

在杂合启动子ＡＤＨ２－ＧＡＰＤＨ控制下于酿酒酵母中表达乙肝病毒表面抗原ＳＡ－２８融合基因的过程研究中,确定系统表达的有效阻遏条件为在１０．０ｇ／Ｌ的葡萄糖浓度下进行细胞的预培养,采用稀释操作和碳源饥饿培养等较彻底的支阻遏方式以克服葡萄糖酵解产物阻遏对表达的影响。实验还显示了溶解氧浓度对表达的影响和乙醇流加方式对表达期酵母生长与表达的调节作用。实验获得主培养４５ｈ后湿菌体浓度为１８６ｇ／Ｌ,细胞内ｐ     

酵母重组乙型肝炎疫苗在中小学生中接种效果评价

目的 评价中小学生大规模乙型肝炎疫苗接种效果。方法 随机选取来实行乙型肝炎疫苗计划免疫管理的6－18岁中小学生1829名,采用血清流行病学方法观测大规模酵母重组乙型肝炎疫苗接种效果。结果 对HBsAg、抗－HBs和抗－HBc全阴性者,接种疫苗1年后,抗－HBs阳性率为70．55％,HBsAg和抗-HBc阳性率分别为0．56％和1．96％;该人群接种前HBVM阳性率为63．31％,接种后为85．51％,抗－HBs阳性率显著增高,且以6－12岁低年龄组人群更明显,而HBsAg和抗－HBc阳性率在接种后1年无明显变化。结论 酵母重组乙型肝炎疫苗大规模接种后,在中小学生中形成了乙型肝炎高保护性、低感染状态。     

应用酵母双向杂交系统筛选和鉴定P75NGFR作用的蛋白

目的：探讨Ｐ７５ＮＧＦＲ介导神经细胞凋亡的分子机制。方法;以转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的大鼠小脑神经细胞株Ｒ２Ｌ２为细胞模型,应用酵母双向杂交系统（ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ）筛选和鉴定Ｐ７５ＮＧＦＲ胞内区Ｐ７５ＩＣＤ作用的蛋白。结果：和Ｐ７５ＮＧＦＲ作用的蛋白由一个６００ｂｐ大小的ＣＤＮＡ片段编码。结论：该工作将有助于探讨Ｐ７５ＮＧＦＲ介导细胞凋亡的分子机制和信号,为勃勃系统退行性病变的病因、