葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药及诱导耐药表型与基因型的相关性研究

目的 了解葡萄球菌对大环内酯类抗生素生物耐药表型与基因型的符合情况,分析耐药基因检出与生物耐药诱导的关系,并预测细菌耐药流行趋势,从基因水平指导临床合理用药.方法 用KB纸片法检测本院2004～2005年分离的136株葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,以聚合酶链反应(PCR)法榆测葡萄球菌MsrA、vgb、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、MefA/E、ereA、ereB 10种耐药基因,并将其耐药表型与基因型进行比较.将对红霉素表型敏感而耐药基因阳性的菌株进行诱导,对比诱导前后药敏结果.结果 136株葡萄球菌对红霉素耐药的占80.88%,对红霉素和克林霉素同时耐药占43.38%,结果表明葡萄球菌对大环内酯类有较高的耐药率.耐药基因检测结果表明,共检出MsrA、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、ereB 7种耐药基因,耐药基因检出率为83.82%.其中核糖体甲基化酶基因ermC的阳性率最高,占检测基因的67.54%;其次为Sat4、MsrA、ereB、ermA、ermB、mphA,分别占50.00%、28.95%、22.81%、15.80%、9.65%、1.75%.MRSA、MRCNS、MSSA、MSCNS菌株耐药基因的检出率分别为100.00%,90.78%、73.08%、55.55%.11株对红霉素敏感而耐药基因阳性的菌株经红霉素诱导后有9株转为耐药,诱导阳性率为81.82%.结论 葡萄球菌对大环内酯类抗生素有较高的耐药性,在部分敏感株中检测出耐药基因,经诱导可产生耐药,提示菌株有潜在耐药性,需特别引起临床的重视.临床微生物实验室应同时开展表型及基因型检测,指导临床更加合理使用抗生素.     

天津市第一中心医院葡萄球菌耐药性调查

本文回顾调查分析我院 2 a来临床分离的葡萄球菌株的耐药情况如下。1　对象和方法1.1　菌株来源　天津市第一中心医院 1998- 12～ 2 0 0 0 - 12临床分离革兰氏阳性葡萄球菌 2 6 5株 ,其中 95 %来自住院患者 ,5 %为门诊患者 ,用 VITEK全自动细菌分析仪菌株鉴定到种。1.2　试验材料　培养基按 NCCL S标准 ,购自中国天津金章生物制品研究所。1.3　抗菌药物　青霉素 (PEN )、苯唑西林 (OXA)、克林霉素(CL I)、红霉素 (ERY)、万古霉素 (VAN)、环丙沙星 (CIP)、庆大霉素 (GEN)、四环素 (TET )、复方新诺明 (SXT)、氯霉素(CHL )、…     

一种二氧化氯溶液杀菌效果及影响因素的试验观察

为了解一种以盐酸活化的二元包装二氧化氯的杀菌效果及杀菌影响因素,以悬液定量法进行了试验观察。结果,以含50mg/L的二氧化氯溶液对悬液中大肠杆菌作用5min,金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作用10min杀灭率均为100％,在试验范围内,二氧化氯溶液的杀菌效果,随其pH值下降,浓度增大,温度升高及作用时间延长而提高,随有机物增加而减低。     

氟喹诺酮药物浓度对金黄色葡萄球菌耐药突变株选择的影响

目的了解氟喹诺酮药物浓度对金葡菌耐药突变株选择的影响。方法将金葡菌ATCC 25923接种于不同浓度环丙沙星及加替沙星琼脂平皿上，根据不同药物浓度平皿上生长的菌落数，计算菌落生长比例。对不同药物浓度筛选出的耐药突变株进行编码拓扑异构酶ⅣC亚单位基因par C（grl A）和促旋酶A亚单位基因gyr A喹诺酮耐药决定区的PCR扩增和测序，并测定外排泵抑制剂利血平对环丙沙星和加替沙星MIC的影响。结果药物浓度对平皿中生长的菌落数有明显影响。环丙沙星在低、中浓度主要选择出主动外排泵介导的非靶位耐药突变株，高浓度选择出Grl A变异的耐药突变株，以Ser-80→Phe为主。加替沙星低浓度选择出非靶位及靶位变异菌株，而中、高浓度均选择出Grl A变异株，也以Ser-80→Phe为主。结论氟喹诺酮药物浓度对金葡菌耐药突变株菌落数以及耐药位点的选择都有明显影响。     

鞘内阶梯浓度注射万古霉素治疗颅内葡萄球菌感染

目的:探讨应用万古霉素鞘内阶梯浓度注射对颅内葡萄球菌感染的治疗作用。方法:对30例颅内葡萄菌感染患者,腰穿后鞘内注入生理盐水10mL+万古霉素,1次/d;剂量从5、10、15、20、25、30、35mg逐日递增,疗程7d。同时静脉滴注万古霉素500mg全身用药,8h1次;在治疗前、后监测患者体温、颅内压、脑脊液常规、生化指标及细菌培养。结果:万古霉素鞘内注射治疗前观察指标升高,治疗2～3d后逐渐下降,第6～7d颅内压降低、体温、脑脊液生化及常规指标恢复正常,脑脊液细菌培养阴性;治疗前、后对比各指标有明显差异(P<0.05或P<0.01),无明显毒副作用。结论:应用万古霉素鞘内阶梯浓度注射治疗颅内葡萄球菌感染疗效显著,无并发症,操作简便,是临床治疗颅内感染切实可行的方法。     

基因多态性分析在凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定中的应用

目的建立快速凝固酶阴性葡萄球（CNS）菌种的基因鉴定方法。方法对培养获得的、经Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph鉴定系统鉴定为CNS的100株临床分离菌株和质控菌株应用tRNA基因间长度多态性PCR分析（tDNA-PCR）和肠杆菌基因间相同序列（ERIC）两种分子生物学方法进行常见的CNS菌种鉴定，同时改良实验条件，并将tDNA-PCR及ERIC-PCR两种分子生物学方法的鉴定结果与传统的Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph鉴定系统进行比较。结果tDNA-PCR及ERIC-PCR两种分子生物学方法对质控菌株及经Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph系统鉴定的12种临床分离CNS菌株均可以得到各自不同的电泳图谱，它们可以快速、准确地对常见12种CNS，包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、华纳葡萄球菌、模仿葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、心耳葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、头状葡萄球菌、施氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌和里昂葡萄球菌进行菌种鉴定。从图谱的肉眼观察看，12种CNS均可以很好地鉴别开。tDNA-PCR及ERIC-PCR与Auto Scan-4和API Staph鉴定系统的一致率为95％。经Taq酶聚合后进行电泳，tDNA-PCR在100～600bp产生6～10条DNA片段；ERIC-PCR在100～1200bp仅产生1～8条DNA片段。结论tDNA-PCR及ERIC-PCR是快速、敏感的CNS菌种鉴定的方法，具有高度的特异性。     

耐甲氧西林溶血葡萄球菌临床分离及耐药谱分析

耐甲氧西林溶血葡萄球菌(Methicillin resistant Staphylococcus haemolyticus,MRSH)是目前临床常见的重要凝固酶阴性葡萄球菌,常表现为多重耐药.1997年1月～1998年12月从我院临床各种感染标本中分离到134株溶血葡萄球菌.为了探讨这些菌株中MRSH对非β-内酰胺类抗生素的耐药性以及在临床各种感染标本中的分离情况作统计分析,旨在为临床治疗MRSH菌感染提供选择抗生素的实验室依据.     

一种碘伏消毒液杀菌效果及相关性能试验观察

碘伏消毒液由碘与聚醇醚类表面活性剂络合而成,为了解其杀菌效果及其他相关性能,采用悬液定量杀菌试验和理化分析方法进行了实验室观察。结果,以含有效碘250 mg/L该消毒液对金黄色葡萄球、大肠杆菌和绿脓杆菌作用1.5 m in,杀灭对数值均>5.00,对白色念珠菌作用1.5 m in,杀灭对数值>4.00。现场试验结果表明,用含有效碘2500 mg/L该消毒剂对志愿者手和手臂皮肤擦拭消毒3 m in,对自然菌的杀灭对数值均>1.00。将该消毒液原液于37℃恒温保存6个月,有效碘含量下降率为0.99%。结论,洗得宝碘伏消毒液杀菌效果良好,稳定性较好。     

战伤喷剂杀菌效果及影响因素的试验观察

为了研究战伤喷剂杀菌效果及其影响因素,采用悬液定量杀菌试验进行了观察。结果,季铵盐活性物170mg/L喷剂分别作用5min,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌平均杀灭率为99.99%;用850mg/L该喷剂对白色念珠菌作用5min,平均杀灭率为99.99%。该喷剂在54℃放置14d,其杀菌效果无明显降低。受有机物和作用温度等因素对其杀菌效果影响不明显。以该喷剂原液作皮肤喷雾消毒,对自然菌平均除菌率为89.13%。结论,该战伤喷剂可有效杀灭细菌繁殖体和真菌,性能稳定。     

D试验和多重PCR检测红霉素耐药葡萄球菌

目的了解红霉素耐药的葡萄球菌对克林霉素的耐药表型和基因型，指导临床合理使用抗生素。方法用NCCLS标准D试验检测红霉素和克林霉素的耐药表型，通过多重PCR检测耐药基因ermA、ermC和msrA。结果所有144株葡萄球菌中，84株（58．3％）对红霉素和克林霉素耐药（cMLS），27株（18．8％）对红霉素耐药对克林霉素敏感但D试验阳性（iMLS），33株（22．9％）对红霉素耐药，对克林霉素敏感但D试验阴性（MS）。在MS型耐药的菌株中均只检测到msrA基因，在cMLS和iMLS型耐药的菌株中，除了1株3种基因均阴性外，其他均检测到ermA或ermC基因。在金葡菌中iMLS型耐药的菌株以ermC基因稍多（3／5），而cMLS型耐药的菌株以ermA基因居多（56／62）；在凝固酶阴性葡萄球菌中iMLS型和cMLS型耐药的菌株均以ermC基因居多（分别为22／22和11／14）结论iMLS型耐药的葡萄球菌在临床比较多见，多重PCR和D试验均可对其鉴别，临床微生物实验室应常规进行D试验。