胃癌中VEGF、NRP1和干细胞标志物CD44的表达及相关性

目的探讨VEGF、NRP1和干细胞标志物CD44在胃癌组织中的表达及三者间的相关性。方法应用高通量组织芯片技术和免疫组化SP法检测72例胃癌和52例正常胃组织中VEGF、NRP1和CD44蛋白的表达,并分析三者之间的相关性以及与胃癌临床病理特征的关系。结果 (1)胃癌组织中VEGF、NRP1和CD44蛋白阳性率分别为76.4%、66.7%、83.3%,三者在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织,差异均具有统计学意义(P均<0.01)。(2)VEGF、NRP1蛋白表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05);CD44表达与Lauren分型、分化程度、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05)。(3)胃癌组织中VEGF、NRP1和CD44蛋白的表达均呈正相关(rs=0.578,rs=0.278,rs=0.316,P均<0.05)。结论 VEGF、NRP1和干细胞标志物CD44在胃癌中均呈高表达,且与胃癌的恶性生物学行为密切相关。VEGF与NRP1之间可能存在协同作用,二者均与干细胞标志物CD44的表达密切相关,其具体机制有待进一步研究。     

植入式闭环芯片系统对清醒兔心率的调控作用

目的:通过电刺激迷走神经观察植入式闭环芯片系统对清醒兔心率的调控作用?方法:将12只心率正常的新西兰兔随机分2组:对照组?迷走神经电刺激(vagus nerve stimulation,VNS)组?VNS组兔体内植入自主研发的闭环芯片1周,随机电刺激右侧迷走神经1 h,恢复1 h;对照组体内植入无刺激的芯片?MD2000WL软件记录实时心电图(electrocardiogram,ECG),芯片根据ECG计算心率?结果:植入式闭环芯片可在清醒兔体内工作?芯片可以成功记录完整心电图?VNS组调控期间心率明显低于调控前的基础心率[(265.2 ± 15.2)次/min vs.(289.5 ± 15.7) 次/min,P < 0.05]?VNS组调控期间心率和对照组相比较,VNS组的心率明显降低[(-24.3 ± 3.6) 次/min vs.(-4.6 ± 5.1)次/min,P < 0.05]?结论:植入式闭环芯片系统可以长期调控清醒兔的心率?     

微流控芯片非接触电导法测定僵蚕中草酸铵的含量

目的:建立测定僵蚕中草酸铵含量的方法。方法:采用微流控芯片非接触电导法,探讨缓冲液种类和浓度、添加剂种类和浓度、进样时间和分离电压等因素对分离检测的影响。结果:优选缓冲体系为3 mmol/L三羟甲基氨基甲烷+3 mmol/L柠檬酸(p H=3.0)、不加添加剂、进样时间为10 s、分离电压为2.0 kV。草酸铵质量浓度在10~150μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 8);检测限为3.0μg/ml;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<2.0%;平均加样回收率为99.1%,RSD=1.4%(n=9)。结论:该方法简便快速、重复性好,为僵蚕的质量控制提供了一种新方法。     

缺氧预处理诱导大鼠心肌细胞差异表达microRNA的芯片筛选与生物信息学分析

目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对照组(CON)和缺氧预处理组(HPC),CON组细胞正常培养,HPC组细胞经历10 min缺氧和30 min再给氧,提取心肌细胞总RNA,行miRNA芯片筛选,qRT-PCR验证芯片结果。利用软件预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果与CON组相比,HPC可诱导大鼠心肌细胞miRNA表达谱发生明显改变,共有12个miRNA上调,14个miRNA下调(P<0.01,FDR<0.05);选择其中荧光信号值>500的7个miRNA,用于生物信息学分析。qRT-PCR检测miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216水平,变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示差异表达miRNA所调控的靶基因功能明显富集于27个GO和6条信号通路。结论 HPC可诱导成年大鼠心肌细胞miRNA表达谱明显改变,这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因参与HPC介导的心肌细胞保护作用。     

疑似结核患者 T-SPOT．TB 检测结果分析

目的：通过比较结核感染 T 细胞斑点实验（T-SPOT．TB）与结核蛋白芯片在结核诊断中的灵敏性和特异性,探讨 T-SPOT．TB 在结核感染中的应用和诊断价值。方法对以疑患结核收住入院的236例患者进行前瞻性研究,收集患者资料,采用两种方法进行检测,对其结果进行分析,比较两种方法的灵敏性和特异性、阳性预测值和阴性预测值、阴性似然比和阳性似然比。结果236例疑患结核患者确诊结核为168例,T-SPOT．TB 方法的阳性率为62％,敏感性为84．5％,特异性为92．6％,阳性预测值96．5％,阴性预测值86．9％;结核蛋白芯片阳性率42％,敏感性为53．0％,特异性为83．8％,阳性预测值为89．0％,阴性预测值为41．9％。两者统计学指标比较分析,T-SPOT．TB 对结核的诊断有更高的特异性和灵敏度。结论TSPOT-TB 实验与其他结核检测方法相比,在结核的诊断中有较高的灵敏度和特异性、阳性预测值,阴性预测值低于文献资料的报道;由于不受免疫因素的影响,特别适用于免疫力低下或使用免疫抑制剂前隐性结核感染人群的筛查,但两种方法联合检测能提高灵敏度和特异性。     

基于基因芯片的miRNA表达差异在结核性脑膜炎与病毒性脑膜炎诊断中的价值

目的: 评价基于基因芯片的miRNA表达差异在结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)与病毒性脑膜炎(viral meningitis,VM)诊断中的价值。方法: 选取2017年12月至2019年9月在首都医科大学附属北京胸科医院和首都医科大学附属北京天坛医院治疗的TBM患者28例和VM患者27例作为验证样本进行实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证。选取前期收集的8例TBM患者和5例VM患者作为基因芯片样本进行全基因组miRNA微阵列分析,通过预测差异性miRNA的靶基因、基因本体(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析、构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络筛选出两病间前10个差异性miRNA枢纽基因。再采用qRT-PCR对患者间表达差异明显的miR-21-5p进行验证,并通过受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)分析miRNA的诊断价值。结果: 通过miRNA微阵列分析初步筛选出26个差异表达的miRNA(14个表达上调,12个表达下调)和对应的靶基因3217个。经GO富集分析、KEGG信号通路分析筛选出190个相关靶基因,对其进行PPI网络分析,筛选出前10个靶基因作为核心靶基因。对基因芯片检测样本的hsa-miR-21-5p相对表达量进行qRT-PCR验证,发现TBM患者hsa-miR-21-5p的表达水平[15.890(3.423,25.581)]较VM患者[0.807(0.614,0.955)]明显上调(Z=-2.355,P=0.019),差异倍数(TBM/VM)在基因芯片和qRT-PCR中分别是4.817和4.660,两种检测方法结果基本一致;对28例TBM和27例VM患者的hsa-miR-21-5p进行qRT-PCR结果比较,发现hsa-miR-21-5p在TBM患者的相对表达量为4.825(2.433,21.362),明显高于VM患者[0.204(0.112,0.711)],差异有统计学意义(Z=-5.000,P=0.000),且ROC曲线区分TBM与VM患者的AUC为0.893(0.806~0.980),敏感度为85.7%,特异度为88.9%。结论: 相较于VM患者,作为基因芯片检测中表达差异明显的miR-21-5p在TBM患者中表达明显上调,可作为鉴别TBM与VM的潜在生物标志物。     

基因芯片与线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB耐药性的价值

目的 评价基因芯片技术与线性探针技术(GenoType MTBDRplus)快速检测MTB耐药性的临床应用价值。方法 选取西安市胸科医院2017年4月至2018年8月住院治疗的493例涂阳肺结核患者作为研究对象,收集其痰标本,痰标本量均不少于2ml。每例患者用同一份痰标本分别进行基因芯片检测、线性探针检测和BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960液体培养”),同时对培养阳性且鉴定为MTB的临床分离株进行MGIT 960液体药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,分析基因芯片技术及线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性的效能。结果 454例研究对象同时具有3种药敏试验检测结果。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,基因芯片法和线性探针法检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.0%(65/73)、96.1%(366/381)、0.82和90.4%(66/73)、96.1%(366/381)、0.83;检测涂阳肺结核患者痰标本MTB异烟肼耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为80.2%(93/116)、96.7%(327/338)、0.80和81.9%(95/116)、97.0%(328/338)、0.82。454例涂阳肺结核患者痰标本中,453例应用2种分子生物学检测方法检测MTB利福平耐药性结果相同,符合率为99.8%;445例应用2种分子生物学方法检测MTB异烟肼耐药性结果相同,符合率为98.0%。结论 基因芯片技术和线性探针技术(GenoType MTBDRplus)检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性与MGIT 960液体药敏试验具有较高的一致性,二者均可为临床提供快速、特异的耐药检测结果。     

缺氧诱导因子-1α和p53在原发性肝癌中的表达及其与临床病理参数的相关性

缺氧诱导因子(HIF)-1α在大多数正常组织中检测不到,在缺氧、癌基因激活、抑癌基因失活、生长因子等因素的刺激下,HIF-1 α与另一亚单位HIF-1 β结合,作用于结构基因的调控序列,促进下游基因转录,使组织细胞对缺氧产生适应性调节.     

组织芯片技术及其应用进展

组织芯片技术，又叫组织微阵列（TMA）。应用该技术，可以对数个及至成百上千个样本同时进行免疫组化、原位杂交等组织原位的分子生物学研究。近年来，该技术在肿瘤研究中的应用日渐广泛，但也存在一些有待改善的地方。现综述如下。     

β-catenin、 CyclinD1、c-myc蛋白在脑胶质瘤中的表达及意义

采用免疫组化二步法检测脑胶质瘤及正常脑组织中β-catenin、CyclinD1、c-myc蛋白的表达.结果三者在正常脑组织中均为阴性表达;在不同病理分级的胶质瘤组织中三者均有表达,且表达程度随肿瘤病级分级增高而增高.相关分析发现三者的表达相互间均有相关性.认为β-catenin在细胞质、核内的集聚可促进cyclinD1、c-myc的表达,与胶质瘤细胞周期调节紊乱、增殖有关.