运用低密度表达谱芯片检测原发胶质母细胞瘤中相关基因表达

我们应用选取目前胶质瘤相关基因调节通路中的95个基因制成的低密度表达谱芯片（MFC）通过高通量实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术对胶质母细胞瘤中的基因表达进行分析，以期进一步阐明胶质母细胞瘤的发病机制，并希望能找到一种更简单、有效的能高通量检测肿瘤组织基因表达的方法。     

DNA芯片技术的临床研究应用

DNA芯片技术具有快速、高效、大规模、高容量、高度并行性等特点。随着临床各学科的相关DNA芯片相继问世,为生命科学、医学、化学等领域的研究提供了一个强有力的工具。本文对近年来DNA芯片技术的研究应用进行了综述。     

前列腺癌基因诊断芯片的临床应用

目的应用基因芯片诊断前列腺癌.方法提取前列腺癌及正常前列腺组织总DNA并纯化mRNA,以包含了9个前列腺癌相关的特异基因和1个参照基因的xy检测系统cDNA临床芯片,对前列腺癌及正常前列腺组织的基因表达谱进行分析.结果9个前列腺癌相关基因检测中癌与正常组织存在显著差异,其中显著上调的有7条;显著下调有2条.结论前列腺癌临床基因诊断芯片作为前列腺癌分子水平的诊断的方法,有望提高前列腺癌的检出率.     

Agilent 2100 Bioanalyzer在人乳头瘤病毒检测中的应用

目的：探讨Agilent2100Bioanalyzer芯片分析系统（简称Bioanalyzer)在人乳头瘤病毒（HPV）的PCR检测和分组中的应用。方法：先分别进行通用引物介导PCR（GP－PCR）和型特异性引物介导PCR，扩增HPV高保守区（L1区）的共同序列和各型（包括HPV6，11，16和18型）的特型性序列，然后分别用常规的琼脂糖凝胶电泳技术和Bioanalyzer对PCR产物进行检测，并比较两种检测方法的准确度，重复性和灵敏度。结果：Bioanalyzer在确定片段长度时的准确度和重复性比琼脂糖凝胶电泳高，前者的准确度在95％以上，后者仅为85％，Bioanalyzer的检测灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高100倍，结论：Bioanalyzer芯片分析系统结合PCR方法可对HPV进行特异，准确，稳定，灵敏的检测和型别鉴定，具有重要的推广价值。     

结直肠癌淋巴结转移研究获进展

中南大学湘雅医院申教授和裴海平教授领衔的课题研究组。综合运用蛋白质组学、组织芯片和Western杂交等最新的医学研究技术，对收集的大量临床标本进行了系列研究，初步揭示结直肠癌发生淋巴结转移的医学之谜。研究成果近日发表在世界该研究领域顶尖的核心刊物《蛋白质组学》杂志上。     

组织芯片技术在免疫组化及原位杂交阳性对照中的应用

组织芯片亦称组织微阵列(tissue microaryyay,TMA)是将数十个、数百个组织标本整齐地排列在同一张载玻片上的微缩组织切片。组织芯片具有高通量、节约组织原材料和检测试剂、实验条件一致性及实验结果可比性好、实验误差小等优点，在病理学研究中有广阔的应用前景…。我们利用组织芯片技术制作免疫组化及原位杂交的阳性对照组织芯片，将阳性对照的组织芯片与待检测的组织裱在同一张玻璃切片上，进行免疫组化及原位杂交染色，取得了比较理想的结果，现介绍如下。     

转移相关基因nm23和P53及S100A4在晚期胃癌中的表达及与侵袭转移的相关性研究

目的探讨转移相关蛋白（nm23和P53及S100A4）在晚期胃癌转移发展过程中的意义。方法应用组织芯片和免疫组织化学方法研究nm23、P53和S100A4在74例胃癌患者的癌、癌旁、淋巴结转移、远处转移（肝脏、胰腺、卵巢等）组织中的表达。结果同癌旁组织相比，癌组织中P53和S100A4表达明显升高（P〈0．01），而nm23的表达明显降低（P〈0．05）；同癌组织相比，淋巴结中nm23的表达明显降低（P〈0．05）。远处转移组织S100A4表达明显升高（P〈0．01）。3者的阳性表达与胃癌的部分恶性生物学行为有关。癌组织中nm23^＋／P53^＋、P53^＋／S100A4^＋和nm23^＋／S100A4^＋的基因表型比例分别为48例（64．9％）、50例（67．6％）和39例（52．7％），其中P53^＋／S100A4^＋、nm23^＋／S100A4^＋和nm23^＋／P53^＋／S100A4^＋均与胃癌的高转移潜能相关。结论nm23和S100A4在肿瘤转移中发挥了重要作用；联合检测nm23、P53和S100A4的表达可用于评定胃癌的转移潜能。     

组织芯片技术的建立

目的 制作组织芯片并初步应用，探讨组织芯片技术的优缺点。方法应用组织：出片技术制成120例胃粘膜疾病组织芯片，采用免疫组织化学技术检测胃粘膜疾病组织芯片中13种细胞周期调控因子(Uhipuitin,p16、p2l、p27、p53、p57、cyclinA、eyclinB、cyclinDl、eyclinE、CDK2、CDK4、CDK6)的表达：结果胃粘膜疾病组织：出片包含了慢性浅表性胃炎、肠化生、异型增生、肠型胃癌4种病变．每张组织芯片上120个样,排列整齐,外形为圆形。仅用13张芯片即完成了全部实验，获得了胃粘膜疾病中13种细胞周期调控因子(Uhipuitin、p16、p21、p27、p53、p57、cyclinA、cyclinB、cyclinDl、cyclinE、CDK2、CDK4、CDK6)表达的数据。结论应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点，组织芯片技术与传统的病理学技术方法相比，具有广阔的应用前景。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

应用抑制消减杂交和cDNA表达谱芯片筛选肝星形细胞持续活化的相关基因

目的：利用抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）和cDNA表达谱芯片筛选早期活化的肝星状细胞与大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化组织、重度肝纤维化组织中差异表达的基因.方法：从SSH构建的大鼠轻度和重度肝纤维化中两个差异cDNA文库中挑选1 000条上调显著的基因,与正常大鼠4 136条基因克隆制作成一张芯片,筛选持续期活化的肝星状细胞相关基因.结果：获得与HSC持续活化相关的上调基因633条,下调基因715条,其中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶（SGK）在正常大鼠基因克隆和2、8周SSH上调差异基因中均呈上调信号.结论：联合应用SSH和cDNA表达谱芯片是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速、经济和有效方法;SGK可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点,参与了肝星状细胞的早期活化和信号传导.