自成人脂肪组织分离与培养间充质干细胞的实验研究

目的 探索成人脂肪组织源性间充质干细胞(ADMSCs)的分离、体外培养,为其将来应用于临床心肌梗死的治疗提供实验依据。方法 无菌条件下获取腹部手术病人大网膜脂肪组织,胰酶消化30min,离心,在含15％胎牛血清的DMEM中,37℃、5％CO2饱和湿度下常规培养,对第2代细胞进行免疫组织化学染色,鉴定其表面分子CD44、HLA-DR及Ⅷ因子。结果 成人脂肪组织中含有大量间充质干细胞,免疫化学染色鉴定除CD44阳性间充质干细胞外,所分离细胞同时含有部分HLA-DR阳性成纤维细胞和Ⅷ因子阳性的血管内皮细胞。结论 建立了一种自人体脂肪组织分离、培养ADMSCs经济简便的方法,为其应用于临床提供了实验依据。     

rhTNF-α对成骨向分化前后的人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子的影响

目的：研究在重组人肿瘤坏死因子（recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α）刺激下人脂肪基质细胞（human adipose tissue-derived stromal cells, hADSCs）增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor-2,FGF-2）和胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）分泌的变化。方法：采用吸脂术获得的第4代hADSCs,以终浓度为0、1、5、10、50、100 μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响;并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h后收集上清,以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况;在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清,ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化,收集细胞上清前24 h更换培养基,并在相应孔中加入rhTNF-α,使其终浓度为10 μg/L。所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正。结果：rhTNF-α能促进hADSCs的增殖,其作用表现为一定的浓度和时间依赖。相比于对照组,48 h时,10 μg/L rhTNF-α对增殖的促进作用并不明显,但96 h时则表现为促进作用（P<0.01）,而100 μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用（P<0.01）,96 h时则表现为明显的促进作用（P<0.01）。相对于对照组,rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1（P<0.01）;hADSCs经成骨向诱导后,上述3种生长因子的分泌有增加的趋势;不同成骨向分化阶段的hADSCs用10 μg/L rhTNF-α刺激后,在诱导第1天,rhTNF-α显著促进VEGF的分泌（P<0.01）,但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响;在诱导第3天和第7天,rhTNF-α对VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF-1（P<0.05）的分泌均有促进作用;但在第14天则抑制VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF（P<0.05）的分泌。结论：一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖;在不同成骨向分化阶段,rhTNF-α对hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1这3种生长因子的作用不同。     

肥胖并子宫内膜癌病人腹部脂肪组织芳香化酶mRNA的表达

①目的　了解绝经后肥胖并子宫内膜癌病人腹部脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平 ,并探讨其在子宫内膜癌发病中的作用及与胰岛素抵抗的关系。②方法　术中留取绝经后肥胖并子宫内膜癌、单纯肥胖妇女及正常体质量妇女腹部皮下及大网膜脂肪组织 ,进行总RNA提取 ,并应用半定量逆转录 聚合酶链反应技术检测芳香化酶mRNA的表达水平。同时测定空腹血糖及空腹真胰岛素水平。③结果　绝经后肥胖并子宫内膜癌病人脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平高于正常体质量妇女 (F =9.2 2、1 3.6 1 ,q =5 .39、6 .32 ,P <0 .0 1 ) ;与绝经后单纯肥胖女性比较无显著差异 (q =0 .2 6、0 .1 3,P >0 .0 5 )。绝经后肥胖并子宫内膜癌和单纯肥胖妇女脂肪组织芳香化酶mRNA的表达与空腹血清胰岛素水平呈正相关 (r =0 .6 37- 0 .737,P <0 .0 5 )。④结论　绝经后肥胖并子宫内膜癌病人腹部脂肪组织芳香化酶mRNA表达水平增高可能与子宫内膜癌发生无关 ,但是可能与高胰岛素血症有关     

人脂肪干细胞对大鼠带真皮下血管网皮片移植的影响

目的探讨人脂肪干细胞(ADSCs)对大鼠带真皮下血管网皮片移植成活的影响及其机制。方法体外培养增殖ADSCs,流式细胞术鉴定,应用EdU标记ADSCs。于大鼠背部设计术区,实验组(n=10)局部注射EdU标记ADSCs PBS悬液,对照组(n=10)注射PBS。术后7d处死大鼠,比较两组移植皮片的成活率;取移植皮片组织行苏木精-伊红染色,光镜下观察微血管数目;免疫组织化学染色观察组织中CD31及血管内皮生长因子(VEGF)的表达;EdU标记检测ADSCs在移植皮片内的分布及分化。结果实验组大鼠移植皮片成活率、组织单位面积内微血管数目、VEGF表达均高于对照组,差异有显著性(t=3.870～14.729,P<0.05)。实验组EdU标记ADSCs阳性细胞分化为部分小血管内皮细胞,对照组检测不到EdU阳性ADSCs细胞分布。结论局部移植的ADSCs可以在组织内分化成血管内皮细胞,并促进VEGF等生长因子的分泌,从而促进大鼠带真皮下血管网皮片移植成活。     

进一步重视脂肪新功能对创面愈合作用的研究

创面愈合的研究范围正随着相关领域的研究进展而不断拓展和完善。以皮下脂肪组织为例 ,以往多数的研究认为 ,脂肪组织来源于间充质细胞 (mesenchymalcell,MC) ,其功能仅是一个能量贮存仓库。但近年来的研究表明 ,脂肪组织还可能是一个重要的内分泌器官 ,在发育学、信号转导 ,以及干细胞作用等多方面与组织修复存在着密切联系。有专家认为 ,加强对脂肪细胞新功能的研究和开发 ,有可能对创面修复和组织再生机制产生新的认识 ,并寻找出新的促愈合手段。脂肪细胞参与创面愈合首先表现在它可能作为一个内分泌器官。迄今为止 ,已经发现人的脂肪细…     

18F-FDG PET/MRI中棕色脂肪组织摄取的影像学表现和规律分析

目的 研究并分析18F-氟脱氧葡萄糖（FDG）PET/MRI中棕色脂肪组织（BAT）摄取的影像学表现和规律。 方法 回顾性分析2017年7月至2020年1月于空军军医大学第二附属医院行18F-FDG PET/MRI检查的1 529名受检者的影像学资料和临床资料,其中男性836名、女性693名,年龄14~93（53.6±13.2）岁;BAT摄取18F-FDG阳性者31名,其中男性13名、女性18名,年龄16~61（33.3±11.6）岁。分析BAT摄取18F-FDG的PET/MRI影像学表现,选取18F-FDG摄取增高部位[以周围肌肉组织的最大标准化摄取值（SUV_max）为临界值],采用三维勾画法勾画感兴趣区,计算SUV_max和平均标准化摄取值（SUV_mean）。SUV_max和SUV_mean与性别及摄取部位数目的相关性采用Spearman相关性分析,与年龄、体重指数（BMI）、检查当日平均气温的相关性采用Pearson相关性分析。组间计数资料的比较采用χ2检验;计量资料的比较采用独立样本t检验。 结果 （1）BAT摄取18F-FDG阳性者的PET/MRI图像表现为颈部、锁骨上区、纵隔、脊柱两旁及肾上区等部位呈对称性分布的片状、结节状及串珠状的18F-FDG高摄取灶,MRI图像的T1加权成像（WI）、T2WI均呈高信号,频率衰减反转恢复序列呈低信号,弥散加权成像未见高信号。（2）BAT摄取多发生于寒冷的季节,男性和女性BAT摄取18F-FDG的阳性率差异无统计学意义（χ2=2.07,P=0.15）;BAT摄取18F-FDG阳性者的年龄、BMI和检查当日气温均明显低于阴性者[（33.3±11.7）岁对（ 54.1±13.5）岁、（21.89±2.79） kg/m2对（24.01±3.26） kg/m2、（7.5±6.5）℃对（16.5±11.9）℃],且差异均有统计学意义（t=?12.03、?5.15、?8.97,均P<0.001）。（3）BAT摄取的SUV_max和SUV_mean均与年龄、BMI呈负相关（r=?0.45~?0.36,均P<0.05）,与摄取BAT部位数量呈正相关（r=0.61、0.59,均P<0.001）,与性别和检查当日平均气温均无明显相关性（r=0.01~0.29,均P>0.05）。 结论 在18F-FDG PET/MRI显像中,BAT摄取存在特定的影像学表现和规律性,大多发生在寒冷的季节,年轻、偏瘦者较易出现。     

腹主动脉缩窄术前跑台运动对大鼠心源性恶液质的影响及机制

目的：以腹主动脉缩窄（AAC）大鼠为心力衰竭模型,观察手术之前进行跑台运动干预对大鼠心力衰竭和心源性恶液质的防治作用,观察大鼠骨骼肌萎缩,脂肪组织褐色化及炎症情况的改变,探究运动对心源性恶液质的预防作用及其可能的调节机制。方法：5周龄SD大鼠,随机分成假手术组（CON组）、腹主动脉缩窄组（AAC组）和跑台运动干预加AAC组（E+AAC组）,每组8只。E+AAC组进行持续4周的跑台运动,跑台速度26 m/min,每次运动40 min,每周5次。4周后,CON组进行假手术,AAC组和E+AAC组进行AAC手术,术后6周采用超声心动图检测大鼠心脏结构和功能。动物处死后,分别称量体重、心脏、脂肪组织和骨骼肌的重量。采用酶联免疫法检测血浆中白细胞介素6(IL-6)和炎症调节因子C反应蛋白（C-RP）的水平,采用天狼星红染色检测心肌纤维化,HE染色观察脂肪组织形态,real-time PCR方法检测皮下、内脏和褐色脂肪组织中褐色化和白色脂肪的标志基因m RNA表达,测定脂肪组织M1和M2型巨噬细胞标记基因m RNA表达。结果：（1）与CON组相比,AAC组大鼠的心重/体重显著升高（P<0.0...     

脂肪来源干细胞和富血小板血浆的研究与应用进展

再生医学是医学研究的新兴领域,其主要依托于安全可靠的种子干细胞、生物材料和细胞因子.人类脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)是从脂肪组织中分离出的一种具有多向分化潜能的干细胞;同时,ADSCs也是近年来组织工程研究中一种理想的种子细胞.ADSCs的增殖、分化过程受到许多细胞因子以及激素的调节作用.     

骨骼肌无细胞基质的制备及其生物相容性研究

目的细胞外基质是脂肪组织工程材料的研究热点之一。通过探讨骨骼肌无细胞基质的制作方法及生物相容性,为其在脂肪组织工程中的应用奠定基础。方法取健康成年小香猪新鲜骨骼肌组织,横切成厚2～3 mm的组织块,采用低渗-去垢剂法脱细胞处理。处理后采用HE染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色及扫描电镜检测骨骼肌无细胞基质是否有细胞成分残留,并观察其基本结构;应用MTT法检测骨骼肌无细胞基质细胞毒性。取乳腺癌患者自愿捐赠脂肪组织,分离培养人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs),从形态学、流式细胞学和成脂、成骨分化能力方面进行鉴定。将骨骼肌无细胞基质与第3代hADSCs共培养,于培养后第1、3、5、7天通过细胞活性检测材料上细胞黏附、扩散和增殖情况,了解其与细胞之间的相互作用。结果 HE、Masson、免疫组织化学染色及扫描电镜观察显示骨骼肌无细胞基质肌纤维去除完全,无细胞核残留,基质结构保留完整;大量连接成网状的胶原纤维呈多孔隙样结构,规则排列。MTT检测示骨骼肌无细胞基质细胞毒性为1级,细胞相容性好。细胞活性检测示hADSCs在骨骼肌无细胞基质上能很好地伸展,且能与周围基质黏附,进入基质内部并相互交织。结论经脱细胞处理的骨骼肌无细胞基质具有良好生物相容性,可能作为脂肪组织工程的支架材料。     

局麻下吸脂的护理配合

脂肪抽吸术是指利用各种设备,通过皮肤的小切口,将多余的皮下脂肪抽出,从而达到减肥或改善体型目的的外科技术。而在局麻下吸脂,是指将大量的含肾上腺素及利多卡因的溶液灌注到皮下,使皮下脂肪组织变得肿胀与坚硬后再进行抽吸的一种技术。该技术安全性高、组织损伤轻、出血少、麻醉