慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌细胞内钙离子浓度的变化

目的:探讨SD大鼠慢性非细菌性前列腺炎(CAP)炎症组与正常对照组前列腺平滑肌细胞(PSMCs)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的差异及其在CAP中的意义。方法:利用SD大鼠前列腺蛋白提取液与弗氏完全佐剂(FCA)诱导出CAP模型,体外贴壁培养并纯化炎症组与正常对照组PSMCs,细胞经钙离子荧光探针FLUO-3AM孵育后在激光共聚焦显微镜(LSCM)下连续动态扫描。结果:CAP组与对照组的PSMCs钙离子荧光强度分别为80.39±9.00和27.95±10.04,差异具有显著性(P<0.01)。结论:CAP SD大鼠PSMCs[Ca2+]i明显升高,其升高可能增强了PSMCs的收缩作用,从而引起CAP的一系列如对疼痛敏感性增强、下腹部疼痛不适的症状。     

心肌细胞特异性Let-7b转基因小鼠的建立

目的建立心肌细胞中特异性过表达Let-7b的转基因小鼠。方法构建心肌细胞特异性过表达Let-7b的转基因载体,显微注射导入小鼠受精卵中,通过胚胎移植,获得转基因首建者小鼠。利用PCR检测子代小鼠Let-7b基因整合情况。通过实时定量PCR检测Let-7b过表达的效率。结果 PCR检测发现,1只小鼠在其基因组上整合有Let-7b基因。实时定量PCR结果显示,该转基因小鼠在心脏组织中特异性地过表达Let-7b基因。结论成功获得了在小鼠心肌细胞中特异性过表达Let-7b的转基因小鼠。     

肌肉特异性microRNA功能及运动对其影响的研究进展

<正>长时间有规律的训练能增加骨骼肌大小及其力量,改善骨骼肌对抗疲劳、提高骨骼肌利用碳水化合物和脂肪氧化供能的能力。而年龄增长、久坐不动的生活方式和一些慢性疾病会引起骨骼肌体积和功能衰减,如肌肉衰减征(sarcopenia)。目前对于运动调节骨骼肌适应的分子生物学机制并不是很清楚,最近关于肌肉特异性microRNA的研究为我们了解骨骼肌的适应提供了一个新的视野。MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约为20～30个     

罗格列酮联合依折麦布对脂化后血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的影响及可能机制的研究

目的探究罗格列酮联合依折麦布对脂化血管平滑肌细胞(SMC)胆固醇含量的影响及可能机制。方法将原代大鼠胸主动脉SMC分空白对照组、泡沫细胞组、依折麦布3.0、10.0、30.0μmol/L组、罗格列酮组(25.0μmol/L)、联合组(罗格列酮25.0μmol/L+依折麦布30.0μmol/L)。采用酶荧光法检测各组细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)的含量,并计算胆固醇酯(CE)值。RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达,Western blot检测LXRα和ABCA1蛋白表达量。结果泡沫细胞组较空白对照组LXRα和ABCA1mRNA(0.2980±0.0247 vs 1.0010±0.0554,0.3022±0.0266 vs 1.0009±0.0526)以及蛋白表达均减少(P0.05),TC、FC和CE含量显著增加(P0.05);与泡沫细胞组比较,依折麦布组3.0、10.0、30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白表达均增加,依折麦布组则呈现浓度依赖性;依折麦布组30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组TC、FC和CE含量减少(P0.05);且联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白增加更为明显(P0.05)。结论罗格列酮与依折麦布联合,显著减少细胞内胆固醇含量,增加SMC内的胆固醇逆转运效率,其机制可能与LXRα-ABCA1通路有关。     

缺氧诱导有丝分裂因子收缩大鼠主动脉壁血管平滑肌细胞的途径探讨

目的探讨发现于炎症区域1(FIZZ1)对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)的收缩作用机制。方法采用贴壁法培养RASMC,随机分为正常对照组,阳性对照组(血管紧张素Ⅱ终浓度1×10~(-7) mol/L),FIZZ1刺激组、2倍FIZZ1刺激组和4倍FIZZ1刺激组(分别用1×10~(-8) mol/L、2×10~(-8) mol/L和4×10~(-8) mol/L FIZZ1),调钙蛋白(CaM)抑制剂组和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂组(分别采用FIZZ1+CaM抑制剂W-7或MLCK抑制剂ML-7),各组分别刺激RASMC 48h。用RT-PCR测定各组CaM和MLCK mRNA表达。结果 4倍FIZZ1刺激组CaM mRNA显著高于正常对照组和阳性对照组,差异有统计学意义(1.22±0.31 vs 0.28±0.06和0.60±0.10,P0.05)、且MLCK mRNA表达水平显著高于正常对照组和阳性对照组,差异有统计学意义[(7.92±2.60)×10~(-4) vs (2.01±1.08)×10~(-4)和(4.80±1.21)×10~(-4),P0.05]。CaM抑制剂组和MLCK抑制剂组较3个FIZZ1刺激组CaM和MLCK mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论FIZZ1可能通过Ca~(2+)-CaMMLCK途径引起RASMC收缩。     

Construction of oxygen-glucose deprivation/reoxygenation injury model in the cultured neonatal rat myocytes

目的 为体外研究心肌缺血再灌注损伤,构建体外培养乳鼠心肌细胞氧糖剥夺/复氧损伤(H/R)细胞模型.方法 原代培养新生SD大鼠心肌细胞,细胞培养至第5 d,更换无糖培养基,同时将细胞置入三气培养箱(0.5% O2,5% CO2,94.5% N2)中氧糖剥夺培养,模拟体内心肌缺血损伤.实验分组依据氧糖剥夺时间分1、2、3 h组和正常对照组(C组).观察C组和氧糖剥夺各组复氧复糖6 h心肌细胞形态和超微结构,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 随氧糖剥夺时间延长,心肌细胞形态损伤渐加重,从仅表面颗粒增多至细胞皱缩,间隙增大,细胞超微结构表现线粒体肿胀加重;氧糖剥夺3 h组部分心肌细胞胞膜破裂,脱离贴壁生长,线粒体高度肿胀,部分膜破裂,肌丝溶解.同时随氧糖剥夺时间延长细胞存活率下降,细胞培养液LDH活性升高(P＜0.05).结论 成功建立体外培养乳鼠H/R模型,氧糖剥夺2 h为较适宜的模拟体内心肌缺血损伤时间.     

有氧训练大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a和肌细胞增强因子2的表达

背景:研究表明微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原可调解骨骼肌的分化与重塑。目的:观察有氧训练对腓肠肌微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组和有氧训练组,有氧训练组采用大鼠跑台运动模型,而对照组不进行运动训练。训练4,6周后采集各组大鼠腓肠肌组织,并称取腓肠肌的质量,实时定量PCR检测骨骼肌中肌球蛋白、微小RNA-133a、肌细胞增强因子2与成肌分化抗原mRNA的表达,并采用免疫组织化学的方法检测腓肠肌Ⅱ型肌纤截面积的改变。结果与结论:训练4,6周,有氧训练组大鼠腓肠肌的相对质量以及肌球蛋白重链-Ⅱa的表达水平较对照组显著增加(P<0.05或P<0.01),Ⅱ型肌纤维横截面积即显著增大(P<0.05),其微小RNA-133a和肌细胞增强因子2mRNA的表达较对照组显著升高(P<0.05,P<0.01),而成肌分化抗原mRNA的表达在各组间差异均无显著性意义。证实,有氧训练可上调大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a、肌细胞增强因子2mRNA的表达。     

Grp78和caspase-12在缺氧心肌细胞中的表达

目的利用体外培养的心肌细胞缺氧模型,观察不同缺氧时间点Grp78和caspase-12在心肌细胞中的表达变化。方法将原代培养的大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组,缺氧0.25h、0.5h、1h、1.5h、2h、4h、8h、12h、16h、24h组,通过TUNEL法检测缺氧心肌细胞凋亡,应用Westernblot法检测不同缺氧时间点Grp78和caspase-12在心肌细胞中的表达。结果与对照组相比,缺氧组细胞凋亡指数随缺氧时间延长逐渐升高;Grp78蛋白于缺氧0.25h开始表达,缺氧1h达到峰值;procaspase-12于缺氧0.5h表达开始增高,2h达到峰值;caspase-12于缺氧1h表达上升,4h达到峰值。结论缺氧激活了内质网应激反应,可引起心肌细胞凋亡。     

胡椒碱减轻H2O2 引起的兔心房肌细胞内向整流钾电流及超速激活延迟整流钾电流的异常改变

目的: 研究胡椒碱对H₂O₂引起的兔单个心房肌细胞内向整流钾电流(I_K1)及超速激活的延迟整流钾电流(I_KUr)异常的影响。方法: 采用全细胞膜片钳技术分析50 μmol/L H₂O₂对兔单个心房肌细胞I_K1和I_KUr的影响,并研究预先应用7 μmol/L胡椒碱对其的保护作用。结果: 7 μmol/L胡椒碱对正常兔心房肌细胞I_K1和I_KUr及其通道动力学无显著影响。在50 μmol/L H₂O₂作用下,兔心房肌细胞I_K1峰值由(-148.2±16.7)pA/pF降低至(-64.2±9.8)pA/pF (P<0.05),电流-电压曲线上移;而I_KUr峰值由(16.0±2.1)pA/pF降低至(6.1±1.4)pA/pF (P<0.05),电流-电压曲线下移,通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线左移及恢复时间减慢,而且存在频率依赖性特征。预先给予7 μmol/L胡椒碱,明显减轻H₂O₂对I_K1和I_KUr的抑制作用(P<0.01),并可减少H₂O₂对超速激活延迟整流钾通道动力学的异常影响。结论: 胡椒碱可减轻氧化应激对心房肌细胞I_K1和I_KUr的影响。     

微小RNA-760在H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响

目的探讨微小RNA-760(miR-760)在缺血再灌注(H/R)后H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响。方法采用H9c2细胞制备H/R模型,通过转染调控H9c2细胞的miR-760表达,并通过系统随机化法分为对照组、模型组(H/R组)、阴性对照组(H/R+miR NC组)和H/R+miR-760 mimics组,以RT-PCR检测H9c2细胞中miR-760的表达,CCK-8检测miR-760对H9c2细胞活力的影响,流式细胞术检测miR-760对H9c2细胞凋亡的影响,Western blot检测miR-760对心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3表达的影响。结果 miR-760在H/R组H9c2细胞中的相对表达量较对照组显著降低(P<0.001),而H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的miR-760表达量较H/R组明显上调(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力显著降低(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的活力显著增加(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的凋亡率显著增加(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的凋亡率显著降低(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的Bcl-2表达量显著下调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著上调(均为P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组的Bcl-2表达量显著上调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著下调(均为P<0.001)。结论 miR-760在H/R后H9c2细胞中表达下调,上调miR-760的表达能够抑制H9c2细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax和cleaved caspase-3的表达有关。