柴芩承气汤减轻急性胰腺炎大鼠胰腺钙超载的机制研究

目的：观察柴芩承气汤（Chaiqinchengqi decoction,CQCQD）对急性胰腺炎大鼠胰腺组织肌浆网钙ATP酶（sarcoendoplasmic reticulum Ca2＋-ATPase,SERCA）mRNA表达的影响。方法：30只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组及CQCQD组。采用蛙皮素腹腔注射法建立急性胰腺炎大鼠模型。逆转录聚合酶链式反应检测胰腺组织SERCA1和SERCA2 mRNA表达的变化;激光共聚焦显微镜检测腺泡细胞内钙离子浓度,并比较各组大鼠胰腺组织病理变化。结果：SERCA1 mRNA在正常胰腺和急性胰腺炎胰腺腺泡细胞均不表达。模型组与正常对照组比较,腺泡细胞SERCA2 mRNA表达下调,表达率为0.536（P=0.001）;CQCQD组与模型组比较,腺泡细胞SERCA2 mRNA的表达上调,表达率为1.803（P=0.035）。模型组大鼠细胞内钙离子的荧光强度高于正常对照组及CQCQD组（P〈0.05）;CQCQD组大鼠胰腺组织的病理评分低于模型组（P〈0.05）。结论：CQCQD可以通过上调SERCA2 mRNA表达,减缓胰腺细胞内钙超载,减轻胰腺组织的病理改变。     

糖尿病发病过程中大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙泵活性以及血流动力学变化的研究

目的探讨糖尿病发病过程中大鼠主动脉平滑肌细胞钙泵活性变化与血流动力学变化之间的联系以及对糖尿病大血管病变产生和发展的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,第4、8、12、16周用彩色多普勒对各组主动脉进行血流参数测量。然后处死各组动物取其主动脉并分离得到肌浆网蛋白和胞膜蛋白,分别测定SERCA和PMCA的活性。结果4wk开始随着病程延长糖尿病组大鼠腹主动脉峰值血流速度、平均血流速度较对照组明显降低(P<0.05),而搏动指数和阻力指数则明显增高(P<0.05);12wk开始血管内径逐渐减小(P<0.05),16wk时内膜中膜厚度明显增加(P<0.05);PMCA的活性在早期(4wk)轻度增高,从12wk开始明显降低(P<0.05);SERCA活性在8wk起较对照组明显降低(P<0.05)。结论随着糖尿病病程逐渐延长,糖尿病大鼠主动脉血管结构发生改变,功能损坏;PMCA和SERCA活性改变导致的胞内钙离子调控紊乱参与了糖尿病大血管病变的发生和发展。     

电针内关对缺血再灌注损伤大鼠心肌肌浆网钙泵活性及mRNA表达的影响

目的：观察电针内关对缺血再灌注损伤大鼠心肌SERCA活性及其基因表达的影响,并以神门穴、合谷穴作对比研究。方法：实验分为假手术组、心肌缺血再灌注模型组（模型组）、电针内关组、电针神门组、电针合谷组,用无机磷比色法测定SERCA活性、RT-PCR法分析SERCA基因表达。结果：与假手术组比,模型组SERCA活性及其基因表达均有非常显著性差异（P〈0.01）,电针内关组、电针神门组与模型组比较差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）,电针内关组优于电针神门组（P〈0.05,P〈0.01）。结论：电针内关上调心肌SERCA基因表达,增强SERCA活性是实现对再灌注损伤心肌组织保护作用的途径之一。电针内关与电针神门两组疗效差异说明经穴对靶器官机制调节作用与经脉（穴）脏腑间的特异联系密不可分。     

利多卡因、异丙酚对缺血再灌注心肌细胞膜Na^＋—K^＋—ATP酶、肌浆网Ca^2＋—ATP酶活性的影响

目的观察利多卡因、异丙酚对缺血再灌注心肌细胞膜Na _K _ATP酶、肌浆网Ca2 _ATP酶活性的影响。方法SD大鼠48只 ,随机均分为6组。假手术组 ;生理盐水组 ;利多卡因5mg·kg-1 组 ;利多卡因10mg·kg-1 组 ;异丙酚300μg·kg-1·min-1 组 ;异丙酚1000μg·kg-1·min-1 组。于缺血前5min ,生理盐水及利多卡因经股静脉注射给药(30s内注射完) ;异丙酚持续输注至缺血开始时为止。结扎冠脉左前降支 ,造成左室前壁相应心肌组织缺血15min ,然后松开结扎线再灌注10min ,应用分光光度法测定心肌细胞膜Na _K _ATP酶、肌浆网Ca2 _ATP酶活性。结果利多卡因可明显地促进肌浆网Ca2 _ATP酶活性的恢复(P<0.05) ,大剂量时还促进心肌细胞膜Na _K _ATP酶活性的恢复(P<0.05)。异丙酚可显著地促进心肌细胞膜Na _K _ATP酶活性的恢复(P<0.05 ,P<0.001),大剂量时促进肌浆网Ca2 _ATP酶活性的恢复(P<0.05)。结论利多卡因、异丙酚可促进再灌注期间心肌细胞膜Na _K _ATP和肌浆网Ca2 _ATP酶活性的恢复 ,从而抑制钙超载而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

急性缺血对单个家兔窦房结起搏细胞自发性电活动的影响及雷诺定的干预作用

目的:观察急性缺血对窦房结(sino-atrial node,SAN)起搏细胞(pacemaker cells,PCs)自发性电活动的影响及肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)钙释放特异性阻断剂雷诺定的干预作用,探讨SR钙释放在急性缺血诱导的心动过缓中的作用。方法:实验分为2组:非干预组(实验Ⅰ组),细胞先灌流正常台式液作为对照;记录自发性动作电位(action potential,APs)后,灌流缺血样台式液(低pH、无葡萄糖以及100%N2饱和)5~8 min模拟缺血;最后用正常台式液冲洗。雷诺定干预组(实验Ⅱ组)在灌流缺血样台式液5~8 min之前,先灌流40μmol/L雷诺定15 min,其他实验步骤同实验Ⅰ组。结果:实验Ⅰ组灌流缺血样台式液5~8 min后起搏频率(beating rate,BR)减慢13%(P<0.05),APs的超射值(overshoot,OS)增大 6 mV(P<0.01),APs时程(actionpotential duration,APD)延长44%(P<0.05),而最大舒张期电位(maxi mumdiastolic potential,MDP)无显著变化;实验Ⅱ组经雷诺定干预处理15 min后,BR减慢12%(P<0.05),灌流缺血样台氏液5~8 min后,BR进一步减慢23%(P<0.01),OS增大 5 mV(P<0.05),APD延长29%(P<0.05)。结论:5~8 min缺血可改变单个家兔SAN PCs自发性电活动,而雷诺定不能阻断该效应,提示SR钙释放可能在急性缺血诱导的家兔单个SANPCs起搏过缓中的作用不大。     

牛磺酸对心肌缺血／再灌注损伤的保护作用及机制探讨

离体大鼠心脏灌流模型的实验表明，牛磺酸除明显减轻再灌注心肌的钙超载和脂质过氧化外，还显著改善心肌肌浆网（ＳＲ）的钙转运功能，牛磺酸使肌浆网的钙─三磷酸腺苷酶活性较缺血／再灌注组升高１．１１倍，摄钙初速率和最大摄钙量分别升高６１．７±１．１％和４０．９±６．４％。牛磺酸可直接拮抗氧自由基灌流导致的心肌细胞和ＳＲ的损伤，对离休ＳＲ无直接作用，对心肌局部的肾素─血管紧张素系统也未见有影响。研究结果显示，牛磺酸的心肌保护作用还与其降低再灌注时心肌的脂质过氧化有关。     

下坡运动对大鼠骨骼肌肌浆网功能的影响

目的：观测研究下坡(离心)运动对大鼠骨骼肌肌浆网Ca2+-ATP酶活性,Ca2+摄取与释放在量与时程上的影响。此外,测定离子载体的刺激作用,即测定在含与不含(Ca2+离子载体)A23187时Ca2+-ATP酶活性的比值,用以评定囊泡的完整性。方法：成年雄性SD大鼠随机分为对照与离心运动组, 离心运动的大鼠分别于运动后即刻, 4, 24, 48, 72 和144h后取样 (n=7). 离心运动方式采用90min持续跑台下坡运动(-16°;15m/min)。取大鼠红股肌制备组织匀浆, 测定肌浆网Ca2+-ATP酶活性,Ca2+摄取与释放。结果：与对照组[19.25±1.38 nmol ·min-1·(mg protein)-1]相比, 肌浆网Ca2+摄取分别于运动后即刻和4h下降了29% and 36% (P<0.05), 24h依然降低(P<0.05). 肌浆网Ca2+释放与对照组[31.06±2.36 nmol·min-1·(mg protein)-1] 相比,也分别于运动后即刻和4h下降了37% and 39% (P<0.05), 24h持续降低(P<0.05). 用含离子载体测定的肌浆网Ca2+-ATP酶活性运动后4h降低了31%(P<0.05), 并于运动后24h仍然降低 (P<0.05)。运动后, 含与不含A23187时测定的Ca2+-ATP酶活性的比值未见显著性改变, 表明该运动没有明显改变肌浆网膜的完整性。结论：一次性低强度，长时间下坡运动导致肌浆网功能长时间降低, 运动后恢复期两天尚未完全恢复, 亦可构成离心运动诱导的骨骼肌某些功能降低的基础。提示这些变化可能产生于离心收缩时肌节长度不匀一性所造成的张力应激。     

重组腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导治疗慢性充血性心力衰竭：短期及中期作用

背景:慢性充血性心力衰竭(CHF)时,心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2 ATPase,SERCA2a)的蛋白表达和活性均明显降低,这导致钙离子的调控异常和心脏收缩和舒张功能不全。目的:观察腺相关病毒为载体的SERCA2a基因转导对CHF大鼠的短期和中长期治疗作用,探讨其治疗心力衰竭的多种可能的机制。设计:随机对照设计。单位:解放军总医院老年心内科和病理生理研究室。方法:将雄性SD大鼠随机分为,假手术组,CHF组,CHF GFP组和CHF SERCA2a组4组,每组又分为基因转导10,30d2个时间点,后3组采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,手术后18～20周,造模成功的大鼠进行经腹心包腔内注射,CHF组注射500μL无菌生理盐水,CHF GFP组和CHF SERCA2a组分别注射等量携带GFP基因和SERCA2a基因的重组腺相关病毒。主要观察指标:①于基因转导后10,30d,检测大鼠的血流动力学参数,应用WesternBlot方法检测SERCA2a蛋白表达;改良的Jones法测定SERCA2a活性。②应用蛋白质组学研究技术分析比较基因转导30d组中CHF和CHF SERCA2a亚组大鼠的心肌蛋白质组表达的差异。③应用电泳分离和定量的方法检测基因转导30d组的各亚组大鼠心肌肌球蛋白重链亚型的表达情况。结果:①SERCA2a蛋白表达和活性:CHF组和CHF GFP组低于假手术组。基因转导10d后,CHF SERCA2a组与CHF组比较,SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%,但低于假手术组水平;基因转导30d后,CHF SERCA2a组SERCA2a蛋白表达和活性已经达到假手术组大鼠水平。②心脏功能:基因转导10d后,CHF SERCA2a组血流动力学指标中左室舒张末压力明显下降,其他指标明显升高,但未完全达到对照大鼠的心功能水平;基因转导30d后心脏收缩和舒张功能进一步改善,各项指标与假手术组比较差异不显著。③心肌蛋白质组的研究发现,基因转导30d后,CHF SERCA2a组多种能量代谢的酶表达明显增加。④凝胶电泳发现:CHF时α-MHC的表达明显降低而β-MHC则显著增加,α-MHC/β-MHC明显低于假手术组大鼠;基因转导30d后,α-MHC、β-MHC的表达以及α-MHC/β-MHC恢复至假手术组大鼠水平。结论:以重组腺相关病毒2作为载体,SERCA2a基因转导可以增强衰竭心脏的SERCA2a功能,纠正Ca2 稳态异常,增加心脏能量代谢,纠正MHC亚型的异常表达,增强心脏收缩和舒张功能;因而SERCA2a基因转导对CHF具有良好的短期和中长期治疗作用。     

肌浆网Ca2+-ATP酶及磷酸受钙蛋白与心力衰竭的基因治疗

心力衰竭（CHF）是各种心血管疾病的严重或终末阶段，其发病率和死亡率均呈上升趋势，且预后较差，不断开发的药物治疗也未能解决这一难题。随着分子生物学的飞速发展，基因治疗作为一种新的治疗策略为CHF的治疗提供了新的途径。CHF的基本表现为心肌收缩和（或）舒张功能的障碍，其中，Ca2＋是心肌舒缩活动的中心环节，肌浆网Ca2^＋-ATP酶（sarcoplasmic reticulum Ca2^＋-ATPase，SERCA）则是心肌Ca^2＋调控的重要机制。