耐氟康唑光滑念珠菌ERG11基因突变分析

Objective To study the mutations of ERG11 gene which encodes P450 lanosterol 14-α demethylase, and to explore the possible role of ERG11 gene in inducing fluconazole resistance in Candida glabrata. Methods ERG11 genes of 9 fluconazole-resistant Candida glabrata isolates and 10 fluconazole-sensitive Candida glabrata isolates were cloned into pUC57-T vector. The open reading frame of ERG11 gene were sequenced by two directional sequencing using universal primers. All sequences were compared with the published sequence. Results Ten kinds of synonymous point mutation were found. Neither missense mutation nor frame-shifting mutation was found. Among the 10 kinds of synonymous point mutation, 5 were found in both fluconazole-resistant and fluconazolesensitive Candida glabrata isolates, and 3 were only found in fluconazole-resistant isolates, 2 were only found in fluconazole-sensitive ones. The majority of the point mutations were located between 1320-2200 base pair of ERG11 gene. Conclusions There are ERG11 gene polymorphisms in clinical strains of Candida glabrata. ERG11 gene mutations are not found to be involved in the development of fluconazole resistance in Candida glabrata.     

环丙沙星联合多西环素对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度的影响

目的 探讨环丙沙星联用多西环素对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度(MPC)值的影响,为防止产生细菌耐药提供依据.方法 应用肉汤法富集浓度为1010 CFU/ml金黄色葡萄球菌ATCC29213菌株,采用琼脂平板二倍稀释法测定环丙沙星、多西环素单药以及2药以不同浓度联用时对金黄色葡萄球菌ATCC29213的防耐药突变浓度(M...     

云南省白族、彝族遗传性非综合症性耳聋人群GJB2基因突变研究

目的研究白族和彝族耳聋人群GJB2基因的突变情况.方法对白族、彝族和汉族的耳聋患者及正常人群GJB2基因进行测序分析,研究该基因的突变位点、突变频率及该基因与遗传性非综合症性耳聋的相关性.结果发现了GJB2基因的三种突变方式：79G-A突变、341A-G突变和235delC突变.结论 79G-A突变与遗传性非综合症性耳聋有极高的相关性;341A-G、235delC这两种突变不仅与非综合症性耳聋有密切的相关性.     

2种氟喹诺酮类药物对临床分离金黄色葡萄球菌突变选择窗的影响

目的通过测定左氧氟沙星及莫西沙星对金黄色葡萄球菌临床分离菌株防突变浓度(MPC),比较氟喹诺酮类对金黄色葡萄球菌突变选择窗(MSW)的影响,为临床合理使用抗菌药物,防治细菌耐药产生提供依据。方法采用标准琼脂二倍稀释法测定2种氟喹诺酮药物对38株临床分离的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC25923的最低抑菌浓度(MIC),采用肉汤法富集3×1010CFU.mL-1的金黄色葡萄球菌测定2种氟喹诺酮药物MPC,计算MPC50、MPC90、MPC/MIC。结果左氧氟沙星对38株金黄色葡萄球菌的MPC90、MPC90/MIC90分别为16 mg.L-1、8,莫西沙星分别为2 mg.L-1、4;结合药物动力学参数莫西沙星400 mg.次-1,1次.d-1,其Cmax/MPC90、AUC/MPC90分别为2.3、18,左氧氟沙星500 mg.次-1的Cmax/MPC90、AUC/MPC90明显高于300 mg.d-1组,分别为0.5、2.4。结论对金黄色葡萄球菌的临床分离菌株莫西沙星比左氧氟沙星MPC90低,MSW窄,防突变能力更强。左氧氟沙星500 mg.次-1,1次.d-1,能够提高左氧氟沙星的防突变能力。     

散发性大肠癌K—ras基因点突变研究及其临床病理意义

目的观察散性大肠癌K—ras基因12、13密码子点突变情况,探讨其与临床病理特征的关系。方法对2005～2009年问浙江省肿瘤医院确诊的140例大肠痛进行回顾性分析,并提取石蜡标本中癌组织DNA,经PCR扩增后应用焦磷酸测序技术检测K—ras基因第12、13密码子点突变情况。结果K—ras基因突变率397％（55／140）,12密码子突变率78．2％（43／55）,13密码子突变率21．8％（12／55）。共发现7种突变类型,包括12密码子（GGT→AT、GGT→AGT、GGT→TGT、GGT-→GTT、GGT→CGT、GGT→GCT）和13密码子（GGC→GAC）,以12密码子（CGT→GAT）最常见,占突变总数41．8％（23／55）。K—ras基因突变与性别、年龄、大体类型、瘤体、原发部位、病理亚型、组织学分级、浸润深度、转移、Duke’S分期、脉管侵犯均无相关性（P〉0．05）;第12与13密码子突变在原发部位、淋巴结转移上差异有统计学意义（P〈0．05）。结论散发性大肠癌中K—ras基因突变率为39．7％,12密码子（GGT→GAT）突变是最常见类型。特定位点的突变与一些临床病理参数密切相关,其中12密码子突变在结肠癌中的发生率高,并易出现淋巴结转移。通过K—ras基因检测有助于指导临床开展大肠癌个体化治疗。     

河南汉族人群蛋氨酸合成酶基因多态性检测

目的 了解河南汉族人群蛋氨酸合成酶(MS A2756G)基因的分布特点.方法 运用PCR-RFLP技术对500例健康个体的MS A2756G进行基因多态性分析,并结合文献进行了不同种族间的分析比较.结果 河南汉族人群中MS A2756G突变纯合子GG型频率为0.4%,突变杂合子AG型频率为15%,G等位基因频率为7.9%,与其他种族比较,MS A2756G基因型在中国河南汉族人群中的分布差异有统计学意义.结论 MS A2756G基因多态性在不同种族间分布存在着明显差异.     

Reis-Bücklers一家系的TGFBI基因突变筛查

目的 对临床诊断为RBCD角膜营养不良的一家系进行TGFBI基因突变筛查,确定患者的病因.方法 采集家系中所有人的血样,提取基因组DNA,然后采用聚合酶链反应及直接测序的方法 ,TGFBI基因的所有外显子进行突变检测,以家系中正常人及100例无亲缘关系的正常志愿者DNA样本作为对照.结果 发现患者的TGFBI基因4号外显子的第371位碱基G→T,导致该基因编码的蛋白质的第124位氨基酸Arg变为Leu.家系中正常人及100名正常对照样本均未发生该突变.结论 错义突变R 124 L是导致患者该临床表型的主要病因.     

乙型肝炎病毒基因组异质性与宫内传播关系的研究

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）宫内感染是造成中国及东南亚地区存在大量HBV表面抗原（HBsAg）慢性携带者的重要原因之一。本研究以8对HBsAg阳性母亲及其发生宫内HBV感染的新生儿为研究对象,以8例HBsAg阳性、但其新生儿未发生宫内感染的母亲为对照。从研究对象中分离HBV准种,通过比较各组病毒基因组特异性突变的发生比例,采用适应性进化分析检测特异性突变的生物学意义,     

无义突变在血友病的研究进展

血友病（hemophilia）是一组由于凝血因子Ⅷ、Ⅸ（FⅧ、FⅨ）基因缺陷致血浆中FⅧ或FⅨ含量不足或功能缺陷,引起凝血障碍而出血的疾病。包括血友病A（hemophilia A,HA）和血友病B（hemophilia B,HB）,是临床较常见的遗传性出血性疾病,约占先天性出血性疾病的85％。     

小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物与其受体结合关键氨基酸的鉴定

目的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)在细胞表面介导多种生物学效应。本文目的是解析小鼠uPA蛋白结构中与其受体结合的关键氨基酸。方法包含小鼠uPA全长cDNA的质粒购于ATCC公司,小鼠cDNA序列进一步克隆至Puro-pMT表达载体。用定点突变法构建各类uPA突变体表达质粒。表达质粒用磷酸钙转染至S2细胞中,用10μg/ml嘌呤霉素筛选稳定表达细胞。表达的重组蛋白分别用CM sephadex柱和sephadex G75柱纯化。纯化后的蛋白分别用SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定。用表面等离子共振技术(SPR)检测重组uPA与uPAR的结合常数。结果用定点突变法成功构建小鼠uPA S22、Y23、K24、Y25、F26、S27、I29、R31、E41、S358分别突变为丙氨酸的突变体及R28、30、31突变为N28、H30、W31的突变体M3。经阳离子交换层析和分子筛纯化,重组蛋白的纯度均大于95%并能被小鼠uPA抗体所识别。结合试验表明野生型uPA和M3型uPA的KD值分别为0.467 nM和1.64 nM,10种点突变uPA的KD值范围为0.388 nM至36.5 nM。结论小鼠uPA中至少有7个氨基酸(Y23、K24、Y25、F26、S27、I29、R31)涉及小鼠uPA-uPAR的结合;Y23、Y25和F26是其中的关键氨基酸。