C基因型乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子突变与疾病进展的相关性研究

目的探讨HBV前C区（PreC）及基本核心启动子（BCP）突变与慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者疾病进展的关系。方法收集88例慢性HBV感染者血清标本，包括36例无症状携带者（其中24例为HBV携带者，12例为HBsAg携带者）、36例慢性乙型肝炎（慢性乙肝）和16例肝硬化患者。所有标本均经型特异性引物PCR法鉴定为HBVC基因型，并用巢氏PCR法扩增HBVPreC和BCP基因片段，用PCR产物直接测序法测序，然后用ClustalW1．8软件进行序列分析。结果在50例HBeAg阳性患者中，无症状携带者、慢性乙肝和肝硬化组的T1762／A1764双突变率和T1846突变率分别为12．5％、42．1％、100％和0％、5．3％、28．6％，差异均有统计学意义（P值分别为0．03和0．02）。在38例HBeAg阴性HBV感染者中，无症状携带者、慢性乙肝和肝硬化组的T1762／A1764双突变率分别为16．7％、58．8％和66．7％，差异无统计学意义（P=0．08）。肝硬化组的C／G1753突变率显著高于无症状携带者及慢性乙肝组（分别为55．6％、8．3％、11．8％，P=0．01），其A1896突变率也高于无症状携带者组（分别为55．6％、8．3％，P=0．01）。结论HBVT1762／A1764双突变与C基因型HBV慢性感染者的疾病进展有关。     

线粒体DNA继发突变对Leber遗传性视神经病变的影响

Leber遗传性视神经病变是一种多发于青壮年的母系遗传性疾病,可导致双眼严重的急性无痛性、且一般是永久性的双侧中心视野缺失.3个线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)原发突变ND4 G11778A、ND1 G3460A和N06 T14484C是其致病的主要因素,但家族问及家族内不同成员之间的表型差异表明存在其他的修饰因子,包括核及线粒体遗传修饰因子、环境因素.本综述主要阐述mtDNA继发突变对LHON表型表达的影响.     

CACNA1H基因G773D突变对钙通道功能的影响

目的研究儿童失神癫痫（childhood absence epilepsy，CAE）患儿CACNA1H基因G773D突变对钙通道功能的影响。方法用定点突变重叠延伸聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）方法构建G773D突变体，脂质体法将突变体和野生型人Cav3．2a cDNA分别转染HEK-293细胞，获得稳定表达细胞株，全细胞膜片钳法研究其电生理变化。结果突变体和野生型细胞钙通道激活和失活动力学差异无统计学意义，但突变体G773D钙电流密度明显高于野生型。结论CACNA1H基因G773D突变可使其编码通道电流增加，并可能引起神经元兴奋性增加。     

7个非综合征型耳聋家系患者的mtDNA A1555G突变分析

目的探讨非综合征型耳聋家系患者mtDNA A1555G突变及其临床特征。方法应用聚合酶链反应、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序技术对7个非综合征型耳聋家系112个成员的mtDNA A1555G突变进行检测，并分析听力临床资料。结果7个家系中所有受检的母系成员mtDNA A1555G突变均为阳性，突变性质含同质性和异质性二种；非母系成员及配偶该突变为阴性。突变的性质与临床表型的有关。结论mtDNA A1555G突变可导致非综合征型耳聋和氨基糖苷类抗生素致聋，其突变性质含均质性和异质性两种，且与临床表型相关。     

免疫系统超突变反应可能引发癌症

美国科学家发现 ,人体免疫系统会使用一种比较冒险的机制来抵御疾病 ,然而一旦失手 ,则可能会引起癌症 .这一机制称为超突变 ,它能改写免疫系统Ｂ细胞里控制产生抗体的基因 ,修正抗体分子的形状 ,使它能更有效地附着在致病因子上并消灭它 .正常情况下 ,超突变只发生在Ｂ细胞染色体上编码产生抗体的区域 ,但美国哥伦比亚大学的科学家在最新一期英国《自然》杂志上报告说 ,他们发现超突变可能会失去控制 ,在抗体编码区域以外的区域发生 ,导致细胞染色体变得脆弱 ,更易产生癌症 ,他们检查了 10 0多份Ｂ细胞淋巴瘤组织样本 ,发现在部分样本中 ,…     

表达Cys548雌激素受体突变型cDNA的真核载体构建及其促转录活性分析

目的 考察一个548位点C→T单核苷酸突变的雌激素受体(ER)在体外条件下,对乳腺癌细胞株(MCF-7)信号通路的影响,以探讨ER单核苷酸突变引起非雌激素依赖性性早熟的可能机制.方法 用重叠延伸PCR定点诱变技术对548位点的碱基进行定点突变.构建定点突变表达载体pSG5-MuER.构建含雌激素受体反应元件(ERE)的萤光素酶报告基因载体pGL3-ERE-Luc.将野生和突变ER质粒分别和pGL3-ERE-Luc共转染MCF-7细胞,观察萤光素酶的变化,以检测突变ER反应活性的变化.结果 成功构建ER突变质粒psG5-MuER和ER报告质粒pGL3-ERE-Luc,psG5-MuER较pSG5-ER能够增加萤光素酶的产生.结论 该突变雌激素受体在体外具有高促转录活性特征,构建的载体可用于进行进一步的相关研究.     

人CGT52TGT MBL突变体在CHO细胞中的表达及其产物分析

目的: 初步探索MBL基因CGT52TGT点突变引起调理吞噬缺损的机制。方法: 采用PCR技术, 从质粒pMBLm52中获取含CGT52TGT点突变的MBL基因, 将其插入真核表达载体pcDNA4 /HisMaxC中构建重组表达载体。经测序验证后, 电转染入CHO细胞。以800mg/LZeocin筛选转染后的CHO细胞30d; 随后的30d中, 维持Zeocin的浓度在200mg/L, 以获取稳定转染的细胞。以RT PCR分析其mRNA的表达情况。表达产物经Ni NTAagarose纯化后, 以非还原SDS PAGE和Westernblot对表达产物进行初步鉴定。结果:以PCR扩增的MBLm52基因片段长约750bp, 将其插入表达载体构建重组真核表达载体pcDNA4 /HisMaxC MBLm52, 测序验证序列正确后将其电转染入CHO细胞。从细胞培养上清中获得的纯化的表达产物, 主要为相对分子质量(Mr)约60 000的分子, 寡聚化程度明显低于重组人野生型MBL和从人血浆中分离的MBL。结论: MBL基因CGT52TGT点突变可能并不影响其表达产物向胞外分泌的过程, 但突变后产生的Cys可能形成新的二硫键, 影响MBL结构单位和/或寡聚分子的形成, 推测该突变MBL蛋白不能发挥正常的功能。     

非小细胞肺癌患者外周血和胸水脱落细胞检测T790M突变的比较

目的比较非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者外周血和胸水脱落细胞T790M突变检出率的差异。方法收集52例NSCLC患者的胸水和外周血标本,检测两者的T790M突变,并对检测结果进行分析。结果外周血标本和胸水脱落细胞T790M突变的阳性率分别为30.8%、46.2%。外周血检测T790M突变阳性的16例胸水脱落细胞检测结果均阳性,外周血检测阴性的28例胸水脱落细胞检测结果22例阴性,6例阳性。外周血检测初步判为临界阳性的8例中胸水脱落细胞检测结果4例阴性,2例阳性,2例弱阳性。结论胸水脱落细胞比外周血标本检出率高,有胸水标本的患者建议优先选择胸水检测T790M突变。     

云南省傣族G6PD一个家系的突变型研究

在调查云南少数民族Ｇ６ＰＤ缺乏症时，采用Ｇ６ＰＤ硝基四氮唑蓝纸片法筛查，按ＷＨＯ标准化方法进行生化变异型鉴定，再用错配碱基ＰＣＲ引入酶切位点法进行ＤＮＡ突变型研究，首次在傣族中发现Ｇ６ＰＤｃＤＮＡ突变型：１３８８Ｇ→Ａ。