基因定量检测方法研究进展

基因定量检测已经成为研究基因组变异以及由于基因重组所引起的相关疾病的重要手段。大片段的基因组的重复和缺失可以引起致病突变。使用PCR和测序等定性检测方法很难探测到杂合状态的缺失和重复,因此探寻高效、可靠、灵敏的基因定量检测方法是当务之急。在过去的几年中已经相继出现了一些自动高效的技术方法。现在可用的基因定量方法大致可以分成3类:DNA印迹技术,细胞遗传学方法和以PCR扩增为基础的定量。本文对基因定量的最新进展作一综述,探讨其优缺点以期对定量研究方法的选择有所帮助。     

东方人苯丙酮尿症的分子遗传学—苯丙氨酸羟化酶基因中一终止突变与单体型4的连锁不平衡性

应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的每个外显子及其侧翼的内含子,并克隆到M 13载体中进行序列分析。发现中国人苯丙酮尿症(Phenylketonuria,PKU)患者的PAH基因外显子3中有1个Arg~(111)→Ter~(111)的点突变,此突变与东方人最常见的突变单体型4呈连锁不平衡。此突变占中国人PAH等位基因的10％左右,但不存在于高加索人群中,表明在种族分化过程中PAH基因位点发生了互不相关的突变事件。     

由GJB2基因233delC突变所致重度语前聋日本患儿的成功耳蜗植入

已有研究表明 ,部分非综合征型遗传性耳聋患者是由于 GJB2基因突变引起 ,而基因突变的位点因种族血统而异。日本人群中 ,最常见的是 2 33del C遗传因子突变。为了了解此类患儿遗传类型及耳蜗植入的治疗效果 ,该作者对 1993年 10月至 2 0 0 0年 9月间行耳蜗植入的 33例患儿中 15例病因不明的先天性重度非综合征型耳聋患儿进行研究。 15例中 ,男性 5例(33.3% ) ,女性 10例 (6 6 .7% ) ,接受耳蜗植入的年龄36～ 70个月 (平均 4 5 .3个月 ) ,所有患儿 CT扫描未见耳蜗和其它畸形。研究内容包括对患儿血标本采用PCR直接测序法进行 DNA基因分…     

大肠癌组织p53基因突变及其与临床病理关系的探讨

应用非同位素标记ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对３４例大肠癌组织ｐ５３基因第五外显子突变进行了检测。结果：５０％（１１／２２）结肠癌，８．３％（１／１２）直肠癌存在ｐ５３基因突变，低分化腺癌高于高、中分化腺癌（Ｐ＜０．０５），ＤｕｋｅｓＢ、Ｃ期高于ＤｕｋｅｓＡ期（Ｐ＜０．０５），ｐ５３基因第五外显子突变在已发生淋巴转移的大肠癌组织中呈现较强的趋势。提示：检测结肠癌原发灶ｐ５３基因第五外显子突变，对指导结肠癌的诊断、治疗及预后判断具有一定意义     

Smith-Fineman-Myers综合征的候选基因GPC4分析

目的:探讨GPC4基因与中国山东Smith-Fineman-Myers综合征(SFMS)的关系,并分析SFMS患者GPC4基因突变。方法:利用primer3设计扩增GPC4全部编码序列及内含子和外显子接头序列的引物,采用PCR扩增结合PCR产物直接测序方法检测GPC4基因开放性阅读框架区域基因突变。结果:在GPC4基因开放性阅读框架区域内并未检测到导致疾病的基因突变。结论:山东SFMS家系患者不是由于GPC4基因编码区域基因突变所致。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞p53基因突变的研究

目的　探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞中 p5 3基因第 4～ 8外显子的突变规律及其意义。　方法　取瘢痕患者手术切除的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕标本各 12例 ,并设患者自身正常皮肤标本及血标本为对照。体外分离、培养上述组织标本的成纤维细胞。采用聚合酶链式反应 单链构象多态性(PCR SSCP)分析方法和基因测序法 ,检测各种组织成纤维细胞中p5 3基因的突变情况。　 结果　 12例瘢痕疙瘩标本中有 9例p5 3基因外显子 4、5、6、7出现点突变和移码突变 ,增生性瘢痕标本、正常皮肤标本及血标本中均未检出突变。　结论　p5 3基因突变是瘢痕疙瘩形成和发展的重要因素之一。     

荧光偏振检测HBV DNA C区BCP双突变

目的：建立简便、灵敏的HBV DNA序列中BCP双突变点的检测方法．方法：采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测．首先对HBV C区基因进行PCR扩增，然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交，使探针的3’端可以在DNA聚合酶的催化下，依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP，然后检测该3’端带有荧光素的探针，根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸．结果：该方法可以检测出HBV基因序列中BCP双突变核苷酸类型以及检测1个拷贝的模板，并且可以从BCP野性株DNA序列中检出5％BCP双突变DNA序列．结论：该技术可以检测血清中HBV DNA C区BCP双突变．     

桥粒蛋白斑菲素蛋白1的1个新的纯合突变（888delC）导致的外胚层发育不良-皮肤脆性综合征

作者报道1例罕见的桥粒蛋白斑菲素蛋白1遗传异常导致的外胚层发育不良-皮肤脆性综合征。患者为1例6岁男孩,出生时皮肤发红,随后出现皮肤脆性增加、进行性跖部角化、甲营养不良和脱发。皮肤活检示表皮细胞间隙增宽和桥粒小、结构不完整、数量少。斑菲素蛋白1基因PK P1突变分析示