次抑菌浓度喹诺酮类药物体外诱导人型支原体ParE基因突变的研究

目的　探讨体外诱导耐喹诺酮类药物的Mh的ParE基因突变情况。方法　以含氧氟沙星、左旋氧氟沙星、盐酸环丙沙星、司帕沙星的培养基培养Mh标准敏感株 12代后 ,将其ParE基因进行PCR扩增 ,分析其核苷酸序列。结果　氧氟沙星、左旋氧氟沙星诱导Mh发生 70位的G→A的突变 ,导致 4 2 6位的天冬氨酸转变为天冬酰胺。结论　ParE基因中 70位的突变与Mh耐喹诺酮类药物有关。     

国人无综合征性耳聋患者的线粒体基因组7445A→G突变263例调查

目的 :探讨国人无综合征性耳聋 ( NSD)患者的线粒体 DNA 744 5 A→ G( m t DNA744 5 A→ G)突变的发生情况。方法 :对 32个 NSD家系 12 8例和 135例散发的 NSD患者 ,10 0例正常人 ,以 PCR法检测 mt DNA 744 5 A→ G突变情况。结果 :全部受检者无 mt DNA744 5 A→ G突变发生。结论 :国人 NSD患者的 m t DNA744 5 A→ G突变的发生率较低 ,且明显低于 mt DNA15 5 5 A→ G的突变发生率     

c-erbB-2过表达及点突变与喉癌发生的关系

目的:探讨喉癌基因c-erbB-2点突变及过表达同喉癌发生发展的关系.方法:应用PCR-SSCP对c-erbB-2 的点突变进行检测,采用免疫组化法分析c-erbB-2 的过表达.结果:40例喉癌阳性表达率为52.5%(21/40).其中24例声门上癌表达率为57%(17/30);6例声带癌表达率为50%(3/6),4例声门下癌表达率为22.5%(1/4),同前者差异有高度显著性(P＜0.01),未见c-erbB-2的点突变检出.结论:喉癌中广泛存在着c-erbB-2 的扩增及过表达,而喉癌细胞中却无c-erbB-2点突变,推测可能存在着另外的基因改变或c-erbB-2的扩增和过表达为喉癌发生的主要原因.     

糖尿病患者胰岛素基因启动子的突变检测和临床应用

目的 :探讨胰岛素基因启动子突变是否与中国人 2型糖尿病相关。方法 :随机选择黑龙江省中国汉族人 89例 2型糖尿病 ,应用聚合酶链式反应———单链象多态性 (PCR -SS CP)检测方法检测胰岛素启动子突变。结果 :89例 2型糖尿病中未发现 1例异常泳动变化。结论 :胰岛素基因启动子突变可能不是中国人 2型糖尿病的重要遗传因素。文献报道美国黑人中胰岛素基因启动子突变 ( 8个碱基TGGTCTAA的重复序列 )与 2型糖尿病相关 ,本研究结果提示此种相关有明显的种族异质性     

中药的抗诱变作用

近几年来我国对中草药抗诱变作用的研究日渐深入,说明人们已经意识到了中药在对抗诱变及抗癌治疗中所发挥的重要作用。现将收集到的有关资料综述如下： 枸杞子：有人以ＳＣＥ（姐妹染色互换率）为指标证实老年人口服枸杞子能提高ＤＮＡ损伤后的修复能力,保护由ＭＭＣ（丝裂霉素）诱发的遗传物质损伤。也有人报道,枸杞子水提物有抗突变作用。 甘草：甘草水提物具有拮抗Ｂ（ａ）Ｐ致ＤＮＡ链断裂的作用。且强于枸杞子。刘德祥等分别报道,甘草水提物对ＡＦＢ１,ＣＰ诱发的人外周血ＣＡ（染色体畸变）、ＰＣＥ（小鼠嗜多染红细胸）微核率和…     

钝顶螺旋藻抗突变作用的研究

对钝顶螺旋藻的抗突变作用进行了研究。结果表明：钝顶螺旋藻在２０００ｍｇ／ｋｇ剂量下,对环磷酰胺所致小鼠骨髓细胞微核增加有拮抗作用（Ｐ＜０．０５）,对丝裂霉素所致小鼠睾丸染色体畸变在染色体畸变细胞率指标上具有拮抗作用（Ｐ＜０．０５）,在性染色体单价体,常染色体单价体,具有拮抗趋势,但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。在６７,６７０ｍｇ／ｋｇ两个低剂量下,对环磷酰胺所致小鼠骨髓细胞微核和对丝裂霉素所致小鼠睾丸染色体畸变在染色体畸变细胞率增高的拮抗作用无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。     

新疆哈萨克族食管癌APC抑癌基因等位基因中缺失和点突变研究

目的：探讨抑癌基因在哈萨克族食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法：应用ＰＣＲ技术并配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和银染的单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法对４１例新疆地区原发性食管癌及正常中家族性结肠腺瘤样息肉易感基因（ＡＰＣ）等１１外显子杂合缺失（ＬＯＨ）及占突变进行检测。结果：３１例信息个１３例显示杂合缺失,杂合缺失率为４１．９％,其中哈族的杂合     

用PCR体外定点突变技术诱导霍乱毒素A亚基突变体的构建

目的： 有效去除霍乱毒素Ａ 亚基（ ＣＴ Ａ） 的毒性作用而保存其佐剂性能。方法： 采用ＰＣＲ 体外定点突变技术（ＰＣＲ ＳＤＭ） ,设计两对引物,引入一个突变位点,通过重叠延伸法两次ＰＣＲ 扩增,使ＣＴ Ａ 编码基因第６３ 位密码子由ＣＴＣ 突变为ＴＴＴ,亦将扩增片断克隆入ＰＵＣ１９ 载体。结果： ＤＮＡ 测序结果表明在预期位点已发生突变,用ＰＣＲ 诱导成功ＣＴ Ａ 突变体。结论： ＰＣＲ 诱导突变准确、简便,为深入研究ＣＴ 免疫佐剂的作用打下了基础     

慢性进行性眼外肌麻痹与线粒体DNA缺失的关系

目的：对２例慢性进行性眼外肌麻痹（ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｏｐｈｔａｌｍｏｋｅｇｉａ,ＣＰＥＯ）患者的骨髂肌中的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行缺失突变分析。方法：用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和放射自显影等方法。结果：在２例ＣＰＥＯ患者的骨骼肌标本中均存在线粒体ＤＮＡ的单一的大片段缺失突变;缺失的长度分别为４．５ｋｂ和５．５ｋｂ;突变型ｍｔＤＮＡ在总体ｍｔＤＮＡ中所占的比     

PAI-2ΔCD突变体的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

目的构建ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体基因,实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ的分离纯化方法。方法用ＰＣＲ扩增ＰＡＩ－２ΔＣＤ基因,经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后,突变体基因与原核表达载体ｐＬＹ－４重组并转化蛋白酶缺陷型菌株ＪＦ１１２５。经温度诱导表达,表达产物用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后,经高压匀浆破菌,用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实在相应相对分子质量处出现表达条带,约占全菌总蛋白的１５％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实表达产物具有ＰＡＩ－２免疫原性,溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。５Ｌ发酵菌液可得湿菌约１００ｇ,经多步纯化后,每升发酵菌液可得纯度达９７％的ＰＡＩ－２ΔＣＤ约３６ｍｇ,比活性为２８６４０ＡＩＵ／ｍｇ。结论成功构建了ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体,实现了在大肠杆菌中的表达,并成功地分离纯化了重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ蛋白。