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141.
Objective To detect new mutations among 29 glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficient individuals from Yunnan province. Methods The nitroblue tetrazolium (NBT) method was used to screen G6PD deficient individuals. Mutation was identified by single strand conformation polymorphism (SSCP), amplification created restriction site (ACRS), amplification refractory mutation system (ARMS) and DNA sequencing. Results Among 29 cases, 18 cases of G1388A, 1 case of C1004A, and 1 case of G1381A were identified. Nine cases remained to be defined. The G1381A mutation is a novel mis-sense mutation, with a substitution of threonine for alanine (A461T). The resultant G6PD had reduced enzymatic activity. In addition, G1381A caused a restriction site of Stu I to disappear, providing a rapid method for the detection of this mutation. Conclusion A novel mis-sense mutation G1381A was found. This mutation results in a substitution of threonine for alanine, producing enzyme with reduced activity. The loss of the Stu I restriction site offers a rapid method for the detection of this mutation. 相似文献
142.
《济宁医学院学报》2001,24(1):30-32
目的对融合基因GM-CSF/Fcγ2进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白真核表达载体.方法通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Fcγ2-.并通过T-A克隆策略,把突变后的融合基因GM-CSF/Fcγ2-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Fcγ2-并经过酶切和测序确证.结果成功对融合基因GM-CSF/Fcγ2-进行了突变,构建了真核表达载体pRc/CMV.2/GM-CSF/Fcγ2-.结论利用该PCR方法进行基因定点突变可行. 相似文献
143.
目的 对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法 通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -CSF Fcγ2-重组到真核表达载体pRc CMV2中 ,构建真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-并经过酶切和测序确证。结果 成功对融合基因GM -CSF Fcγ2-进行了突变 ,构建了真核表达载体pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-。结论 利用该PCR方法进行基因定点突变可行 相似文献
144.
目的 探讨乳腺癌组织中p53基因点突变。方法 应用非同位素PCR-SSCP技术检测48例石蜡包埋乳癌组织中,p53基因点突变。结果 48例乳腺癌中20例出现异常电泳,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变,其中8例位于第5-6外显子,9例位于第7外显子,3例位于第8外显子。免疫组化检测突变p53蛋白的表达25例为阳性(52%),其中5例SSCP未发现基因突变,突变可能发生在所检测的基因片点以外。结论 非同位素PCR-SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突点的方法,特别适用于大量标本基因点突变的筛选;p53基因点突变与突变型蛋白表达呈相关关系。 相似文献
145.
目的 对融合基因GM-CSF/Feγ2^-进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Feγ2^-融合蛋白真核表达载体。方法 通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Feγ2^-。并通过T-A克隆策略,把突变后的融合基因GM-CSF/Feγ2^-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-并经过酶切和测序确证。结果 成功对融合基因GM-CSF/Feγ2^-进行突变,构建了真核表达载体pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-。结论 利用该PCR方法进行基因定点突变可行。 相似文献
146.
食管癌中3p24和11p15.5染色体位点潜在抑癌基因的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨3p24染色体位点的杂和缺失和11p15.6位点的点突变同食管癌之间的相关性,寻找这2个位点中潜在的抑癌基因,并希望通过此研究能为最后确定该基因的功能奠定基础。方法:用PCR-RFLP法检测3p24染色体的3个位点(EAβMD,EA,βH,EAβR)上等位基因的杂合缺失情况,PCR-SSCP法检测11p15,位点的点突变。结果:经RFLP法显示:在3p24的EAβMD位点,杂合缺失率为7 相似文献
147.
目的 :探讨共济失调毛细血管扩张症 (AT)基因突变与食管癌及结肠癌发病的关系。方法 :运用PCR SSCP及DNA同位素测序等技术 ,对 17例食管癌和 15例结肠癌患者的AT基因第 41~ 5 1外显子进行突变检测。结果 :15例结肠癌标本的SSCP带型与正常对照组织无差异 ;17例食管癌标本中有 1例SSCP带型比正常对照组织多一条带 ,测序发现 ,该例标本在AT基因第 49外显子发生单碱基缺失。结论 :AT基因突变可能与某些类型的食管癌发病有关 ,但尚不能判断与结肠癌的相关性 相似文献
148.
ras基因在细胞分化与生长中具有重要作用。若ras基因密码子 1 2、1 3、5 9或 6 1位发生突变 ,将使p2 1蛋白的构型及GTP酶活性发生变化 ,从而影响细胞对外界信号的传导。在对ras突变基因的基础研究中 ,常需获得定点突变的ras基因片段。我们选择Megaprimer方法对N ras基因进行了定点突变 ,报告如下。1 材料与方法1 1 试剂 内切酶、TaqDNA聚合酶、dNTP等PCR试剂购自上海生工生物工程公司 ;PRISMTMReadyReactionDyeDeoxyTMTerminatorCycleSeq… 相似文献
149.
探讨狼毒大戟水提物是否具有致突变作用。 方法实验用昆明种近交小鼠为实验对象,采用传统的毒理学实验方法,以微核出现率和精于畸变率为观察指标,在高(360g/kg)、中(180g/kg)、低(30g/kg)剂量下,进行了初步观察。 结果中、高剂量组与阴性对照纽间有显著性差异(P 相似文献
150.
8例B细胞淋巴瘤的T细胞基因CD4 V4突变及其相关蛋白的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
【目的】检测B细胞淋巴瘤组织中T细胞的CD4V4基因突变情况及其相应病例的Fas/FasL、CD4、bcl 2和CyclinD1蛋白表达特征。【方法】PCR SSCP技术筛选检测 5 6例B细胞淋巴瘤CD4分子的V4外显子突变状况。用免疫组化方法检测有突变的B细胞淋巴瘤组织中L2 6 ,UCHL1,CD3,Fas ,FasL ,bcl 2和CyclinD1蛋白表达情况。【结果】 8例 / 5 6例(14 2 % )T细胞CD4V4外显子有变异。其中小淋巴细胞性淋巴瘤 (smalllymphocytelymphoma,SLL)和淋巴母细胞性淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma ,LBL)的Fas,FasL和CD4蛋白均为弱或无表达 ;滤泡性淋巴瘤 (follicularlymphoma ,FL) 3项均强表达 ;3例弥漫性大B细胞淋巴瘤 (diffuselargeBcelllymphoma ,DLBL)和 1例套细胞淋巴瘤 (mantlecelllymphoma ,MCL)Fas和FasL强表达 ,CD4无或弱表达。Fas和FasL双强表达的 4例 ,均有bcl 2和 /或CyclinD1过表达。【结论】B细胞淋巴瘤中CD4V4基因有突变 ,并提示这种突变与细胞死亡和细胞周期调控异常有关。 相似文献