以可溶性PBP2a为靶点筛选拮抗MRSA中药的实验研究

目的 以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的可溶性片段为靶点,利用生物传感器筛选能够拮抗MRSA的中药.方法 从临床上分离鉴定出MRSA,利用基因重组技术体外诱导表达PBP2a 25～668位氨基酸,并对表达的可溶性蛋白进行鉴定及生物学功能分析;然后将PBP2a包被于羧甲基葡聚糖样品池上,利用生物传感器筛选能够拮抗MRSA的中药.结果 成功诱导表达出可溶性目的 蛋白PBP2a,相对分子质量为74×103,且具有一定的转肽酶及β-内酰胺酶活性;利用生物传感器筛选出10种能够拮抗MRSA的中药,其中黄芩、黄连、夏枯草3种中药抗MRSA作用较强.结论 以MRSA临床分离株中可溶性PBP2a为靶点,利用生物传感器成功筛选出了能够拮抗MRSA的中药.     

重组人甲状旁腺素1-34分子量测定方法的研究

分别采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)、Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Tricine-SDS-PAGE)和分子排阻色谱法(SEC)测定重组人甲状旁腺素1-34的相对分子质量,为制定该品种的质量标准提供依据。MALDI-TOF/MS测定基质溶液为α-氰基-4-羟基肉桂酸(a-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid,CCA);Tricine-SDS-PAGE电泳采用Tris-tricine电极缓冲系统;SEC测定色谱柱为TSK-GELG2 000 SWXL(300mm×7.8mm,5μm);流动相为三氟乙酸-乙腈-水(0.05∶20∶80);检测波长为215nm;流速为0.5 mL.min-1。结果:质谱法测定结果准确,实验值与理论值一致,误差±1;Tricine-SDS-PAGE测定结果与理论值基本一致,误差小于10%;但SEC法测定结果与理论值偏差较大。质谱法适用于产品的质量控制。     

不同前列腺疾病患者血清PSA水平的观察比较

前列腺特异性抗原（t-PSA）是一种仅由前列腺上皮细胞产生和分泌的相对分子质量为33000-34000的丝氨酸蛋白酶，具有很好的组织特异性，在前列腺癌（PCa）患者的血清中可明显升高。但部分前列腺增生（BPH）患者及前列腺炎（Cp）患者血清t-PSA亦可升高，且前列腺癌与前列腺其他疾病患者血清t-PSA水平存在重叠区域，并为泌尿界学者所接受。我科自2003年1月至2005年11月，对140例前列腺疾病患者检查血清水平，并进行分析，现报告如下。     

丹皮多糖2b主要成分的相对分子质量的测定

目的测定丹皮多糖2b(PSM2b)主要成分的相对分子质量,为建立对照品的标准提供依据。方法PSM2b经Sepharose 4B柱分离,冷冻干燥后得到丹皮多糖的两个成分PSM2b-A和PSM2b-B,采用HPLC法检测均一性和相对分子质量;并分别以0.7%N a2SO4溶液和超纯水作为流动相进行比较。结果PSM2b-A为均一性的糖蛋白,是PSM2b的主要成分。流动相为0.7%N a2SO4溶液时,其相对分子质量为3.596 2×105,分散度指数(D)为4.15。流动相为超纯水时,其相对分子质量为4.758 5×105,分散度指数为1.03。结论采用HPLC法测定丹皮多糖主要成分的相对分子质量时,不同流动相测定的结果有差异,流动相采用超纯水比0.7%N a2SO4溶液更为适合。     

治疗重症抑郁和糖尿病周围神经病变的新药——度洛西汀

盐酸度洛西汀(duloxetine,商品名Cymbalta)为一种口服选择性5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SS-NRI)。由美国礼来制药公司出品[1],FDA于2004年8月3日批准本品上市治疗重症抑郁(MDD),2004年9月3日又批准用于治疗糖尿病周围神经病变(DPN)所致疼痛等症状。化学名称为( )-(S)-N-甲基-γ-(1-萘氧基)-2-噻吩丙胺盐酸盐,分子式为C18H19NOS·HCl,相对分子质量为333.88。结构式见图1。图1盐酸度洛西汀结构式Fig 1 Structural formula of duloxetine hydrochloride1药理作用[2]1.1作用机制本品对MDD和DNP的确切作用机制尚不…     

透明质酸对骨关节炎的治疗作用

透明质酸（HA）是构成关节软骨和滑液的主要成分，当发生骨性关节炎（OA）、类风湿关节炎（RA）以及其他感染性和非感染性关节疾病时，HA在关节内的产生和代谢发生异常，滑液中HA的浓度和相对分子质量（Mr）明显降低，软骨发生降解和破坏，导致关节生理功能障碍。黏弹性补充疗法就是通过补充外源性HA，恢复滑液的润滑功能，促进软骨的修复，改善关节功能，从而达到治疗的目的。近年来，国内外学者对该疗法的治疗机制进行了诸多研究，现作综述如下。     

泛影葡胺的治疗作用

泛影葡胺(meglumini diatrizoas)注射液主要成分为泛影酸,化学名称为3,5-二乙酰氨基-2,4,6-三碘苯甲酸,1-去氧甲氨基山梨醇,分子式为C11H913N2O4×C7H17NO5,相对分子质量为809.13。是一种常见的高渗离子型阳性造影剂,其产生对比效果的泛影酸盐中牢固结合的碘可吸收X射线,临床上主要应用于各种造影检查,如静脉和逆行性尿路造影、血管造影、关节腔造影、瘘管造影、子宫输卵管造影、内窥镜逆行性胰胆管造影(ERCP)、涎管造影等。近年研究发现泛影葡胺不仅具备造影作用,还可以对许多疾病起到治疗作用,现综述如下。1粘连性肠梗阻泛影葡胺在…     

PICK1基因敲除小鼠的繁育及子代基因型的鉴定

目的 探讨蛋白激酶Cα相互作用蛋白(PICK1)基因敲除小鼠的优化繁育方法及 PICK1 基因敲除小鼠子代鼠的鉴定方法,为进一步研究 PICK1蛋白的功能奠定基础.方法 用 6 种不同的交配方式观察子代鼠的各表型比率及雌、雄性PICK1 基因突变纯合子小鼠的繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组 DNA,用 PCR 方法扩增 PICK1 基因片段,电泳后观察结果.结果 PICK1 / 、PICK1 /-、PICK1-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性PICK1 基因突变纯合子小鼠有繁殖能力,雄性PICK1 基因突变纯合子小鼠无繁殖能力.琼脂糖凝胶电泳显示PCR 产物分子量大小为 400 bp 和 200 bp,与目的 基因片段相对分子质量大小一致.结论 雌、雄性PICK1 基因突变杂合子小鼠交配是繁育PICK1 基因突变纯合子子鼠的较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定PICK1 基因突变纯合子子鼠,为PICK1 蛋白功能的实验研究提供了较理想的动物模型.     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素2B亚基的表达

目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质.方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx28的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接到表达载体pET-28a构建重组质粒,阳性重组子转化表达宿主菌E. coli BL-21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,应用SDS-PAGE和Western-blot (WB)分析重组蛋白生物活性.结果:PCR扩增stx2b基因约220bp,成功构建重组质粒pET28a-stx2b,并在原核细胞中得到高效表达,目的蛋白质的相对分子质量约为7500,约占蛋白质总量的40%;WB显示目的蛋白质可与特异性抗体发生特异性反应.结论:成功克隆EHEC O157:H7 stx2b基因,在原核系统获得目的蛋白质的高效表达,为O157:H7感染机制及疾病诊断和疫苗研究奠定基础.     

强心甾类固醇对肿瘤作用的研究进展

摘要：强心甾类固醇（CTS）是真核生物细胞膜钠钾三磷酸腺苷转移酶（Na+，K+-ATPase）,简称钠泵的特异性配体，现已证实CTS除了传统意义上的强心作用外，也对许多肿瘤细胞的增殖和凋亡具有很强的调节作用。CTS可能通过多种途径诱导细胞凋亡来发挥较强的抗肿瘤活性作用，并且很可能主要是通过激活钠泵相关的信号传导通路而实现抗肿瘤活性。