山麦冬多糖的分离纯化及单糖组成研究

山麦冬为百合科植物湖北麦冬Liriope spicata(Thunb.)Lour.var.prolifera Y.T.Ma的干燥块根,是湖北大宗道地药材。现代研究表明,其主要活性成分山麦冬多糖有降血糖、延缓衰老、抗疲劳、辅助抑制肿瘤、抗辐射等作用[1,2]。而目前对于山麦冬多糖的分离纯化及单糖组成分析尚未见报     

幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H. pylori疫苗的新途径.[方法]培养和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断.将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a( ),构建重组表达载体PET32a-OMP36.转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白.(结果)测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性.SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%.Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性.[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP 36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H. pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础.     

一种鲍鱼脏器多糖的鉴定及活性研究

目的 对鲍鱼脏器中获得的一种多糖AHP-12进行纯度和组成的鉴定,并对其抗肿瘤活性进行分析.方法 高效液相色谱和琼脂糖凝胶电泳鉴定纯度;凝胶色谱法测定相对分子质量;明胶比浊法测定硫酸根含量;比色法测定氨基己糖含量;气相色谱测定单糖组成;MTT法检测其体外抗肿瘤活性.结果 鲍鱼脏器多糖AHP-12为一种均一的多糖组分;其相对分子质量约为3×105;硫酸根舍量为13.07%;氨基己糖含量为4.98%;单糖组成为鼠李糖、岩藻糖和半乳糖组成,其摩尔比为: Rha:Fuc : Gal=1:2.2 : 1.7;AHP-12对HeLa细胞增殖有一定的抑制作用.结论 从鲍鱼脏器中提取经分离纯化得到的多糖AHP-12是一种均一的多糖,且为硫酸酯多糖和氨基多糖,具有较弱的体外抗肿瘤活性.     

维甲酸/聚乙二醇-聚乳酸二嵌段共聚物胶束的制备及其体外性质

目的:制备甲氧基聚乙二醇-聚乳酸[methoxyl poly(ethylene glycol)-poly(lactic acid),mPEG-PLA]二嵌段共聚物及其载全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)的胶束,验证共聚物的结构,并考察胶束的形态、粒径、载药量、包封率、体外释放特性及其溶血性质。方法:采用辛酸亚锡催化的开环聚合法制备不同嵌段比例的mPEG-PLA二嵌段共聚物,用核磁共振氢谱(1HNMR)和傅利叶红外光谱(FTIR)验证其结构,凝胶渗透色谱(GPC)考察其相对分子质量及分布。用透析法、丙酮溶剂蒸发法及丙酮挥发透析法制备空白及载ATRA胶束。透射电子显微镜(TEM)观察胶束的形态,动态光散射仪(DLS)测定其粒径分布。采用紫外分光光度法测定胶束的载药量和包封率,并研究其体外释放性质及溶血性质。结果:制备了5种不同嵌段比例的mPEG-PLA共聚物,TEM结果显示ATRA胶束呈类球形。胶束的粒径及载药量受制备方法、药物/嵌段共聚物比例以及嵌段共聚物性质的影响,通过筛选得到丙酮挥发透析法及嵌段共聚物/药物的比例为5∶2为最适制备条件,得到胶束的平均粒径在267.5~431.8 nm内,并随着嵌段共聚物疏水部分的增大而增加;胶束的载药量在11.23%~20.01%内,包封率为31.79%~56.57%,也具有随疏水嵌段增大而增加的趋势。载药胶束在PBS-乙醇(9∶1)的释放液中48 h体外累积释药率为61.6%~94.1%,载药胶束与50%血浆混合后药物释放趋于零级,药物的释放随聚合物相对分子质量的减小和载药量的减小而增加。100~150mg.L-1的载药胶束无溶血现象,而5 mg.L-1的ATRA溶液即出现溶血。结论:通过研究嵌段比例对mPEG-PLA嵌段共聚物载ATRA胶束一系列体外性质的影响,为选择最适的嵌段共聚物比例提供了依据。载药量,体外释放及溶血性质结果显示mPEG-PLA嵌段共聚物载ATRA胶束具有明显的增溶,缓释作用,并能够减少药物的毒副作用。     

紫杉醇前药的开发与临床研究进展

<正>紫杉醇(Paclitaxel,Taxol),紫杉-11-烯-9-酮,5β环氧化-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基-4,10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-β[(2′R,3′S)-N-苯甲酰-3′-苯基异丝氨酸酯],分子式C47H51NO14,相对分子质量为853.9,是从太平洋杉树Taxus brevifolia的树皮中分离得到的一种微管稳定剂[1],对多种癌症具有明显的治疗作用。1992年以来,美国食品药物管理局     

干姜油中姜酚类成分的UPLC/Q-TOFMS分析

目的 采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOFMS)对干姜油中姜酚类成分进行分析,并对主要成分进行鉴别.方法 用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以水(A)-乙腈(B)梯度洗脱,检测波长280 nm,使用APCI离子源,正离子与负离子模式下采集数据.结果 鉴定出干姜油中姜酚类化合物8个,分别为:6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚、12-姜二醇、10-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚和10-姜二酮.结论 经过超高效液相色谱的分离,借助Q-TOFMS测定的相对分子质量及正负离子信息可以鉴定干姜油中的主要姜酚类成分,为干姜油姜酚类成分的鉴定提供了一种准确有效的方法.     

抗胆汁螺杆菌单克隆抗体的制备

目的 制备抗胆汁螺杆菌单克隆抗体(McAbs).方法 用胆汁螺杆菌B2m株皮下免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行融合.以酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选抗胆汁螺杆菌单克隆杂交瘤细胞株并初步鉴定其特异性;免疫印迹试验测定单抗所结合的抗原表位;免疫双向扩散试验确定IgG亚类;腹腔接种法、辛酸-硫酸铵盐析法大量制备、纯化单克隆抗体.结果 经过ELISA筛选获得11个阳性杂交瘤细胞株,其效价最高达1.4×105以上,并与实验动物常见的15种病原菌呈阴性反应;IgG亚类为IgC2a和IgG2b;免疫印迹试验显示,6株(A～F)与胆汁螺杆菌大约相对分子质量(17、20、21、30、52、66)×103的抗原特异结合,5株(G～K)皆与胆汁螺杆菌、幽门螺杆菌等三种螺杆菌大约相对分子质量(52、82)×103的抗原呈阳性反应,表明A～F株针对的是胆汁螺杆菌特异性抗原,G～K株可能具有属特异性.结论 筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,所结合的抗原为胆汁螺杆菌或螺杆菌的免疫优势抗原,为进一步的种、属生物学特性研究、菌株分型及血清学检测方法建立等奠定了基础.     

蜂毒素脂质体质量评价方法的研究

目的考察蜂毒素脂质体包封率的测定方法和游离药物的含量测定方法,对蜂毒素脂质体进行质量评价.方法对于游离蜂毒素的含量测定,比较了单波长考马斯亮蓝法、双波长考马斯亮蓝法、福林-酚法、二喹啉甲酸法及高效液相色谱法等5种含量测定方法.对于蜂毒素脂质体包封率测定,筛选了透析法及超滤-离心法.结果在吸收度及线性均良好的情况下,双波长考马斯亮蓝法可用于测定蜂毒素脂质体包封率时游离蜂毒素的含量,检测范围为0.5～25.0μg/mL,范围内线性良好,相关系数为0.9996.脂质体包封率测定采用超滤离心法,游离药物的平均回收率在95.75%～98.30%之间,脂质体不能透过截留相对分子质量为105的超滤膜.采用超滤离心法结合双波长考马斯亮蓝法测定3批蜂毒素脂质体的包封率为(91.45±0.83)%,RSD小于1%.结论该方法可用于蜂毒素脂质体的质量评价.     

以可溶性PBP2a为靶点筛选拮抗MRSA中药的实验研究

目的 以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的可溶性片段为靶点,利用生物传感器筛选能够拮抗MRSA的中药.方法 从临床上分离鉴定出MRSA,利用基因重组技术体外诱导表达PBP2a 25～668位氨基酸,并对表达的可溶性蛋白进行鉴定及生物学功能分析;然后将PBP2a包被于羧甲基葡聚糖样品池上,利用生物传感器筛选能够拮抗MRSA的中药.结果 成功诱导表达出可溶性目的 蛋白PBP2a,相对分子质量为74×103,且具有一定的转肽酶及β-内酰胺酶活性;利用生物传感器筛选出10种能够拮抗MRSA的中药,其中黄芩、黄连、夏枯草3种中药抗MRSA作用较强.结论 以MRSA临床分离株中可溶性PBP2a为靶点,利用生物传感器成功筛选出了能够拮抗MRSA的中药.     

重组人甲状旁腺素1-34分子量测定方法的研究

分别采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)、Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Tricine-SDS-PAGE)和分子排阻色谱法(SEC)测定重组人甲状旁腺素1-34的相对分子质量,为制定该品种的质量标准提供依据。MALDI-TOF/MS测定基质溶液为α-氰基-4-羟基肉桂酸(a-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid,CCA);Tricine-SDS-PAGE电泳采用Tris-tricine电极缓冲系统;SEC测定色谱柱为TSK-GELG2 000 SWXL(300mm×7.8mm,5μm);流动相为三氟乙酸-乙腈-水(0.05∶20∶80);检测波长为215nm;流速为0.5 mL.min-1。结果:质谱法测定结果准确,实验值与理论值一致,误差±1;Tricine-SDS-PAGE测定结果与理论值基本一致,误差小于10%;但SEC法测定结果与理论值偏差较大。质谱法适用于产品的质量控制。