应用噬菌体随机肽库筛选2型登革病毒E蛋白的抗原表位

【目的】通过型特异性单抗与噬菌体随机 12肽库的生物淘洗 ,确定 2型登革病毒E蛋白分子的抗原表位。【方法】以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子 ,生物淘洗噬菌体随机 12肽库 ,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导 ,通过展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比 ,确定E蛋白的抗原优势表位并用相应的合成肽验证。【结果】常规生物淘洗获得富含芳香族氨基酸并有aHWbW核心结构的克隆 ,确定为非特异的塑料结合噬菌体。改进淘洗方法后 ,肽库筛选的噬菌体阳性克隆有共同的结构模体WFKKGS ,与DEN2E蛋白分子的 390～ 397有 3～ 5个氨基酸相同。其对应的合成 10肽能与淘洗单抗特异反应 ,并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。【结论】本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定DEN2E蛋白 390～ 397氨基酸残基 (WFKKGSSI)存在一线性的B细胞抗原表位。     

登革病毒抗体依赖性感染增强作用的研究进展

抗体依赖性感染增强作用(antibody-dependent enhancement,ADE)在登革病毒的致病机制中发挥重要作用.在存在亚中和浓度抗体的条件下,登革病毒可通过Fc受体或补体受体等途径进入靶细胞,进而导致ADE的发生.ADE的发生受病毒和宿主一系列复杂因素的调节,直接影响患者的临床表现和病情进展,对其作用机制的研究有助于加深对登革出血热发病机制的认识,对登革热疫苗以及治疗性抗体的研发具有重要意义.本文综述了登革病毒ADE的研究进展.     

深圳市龙岗区2009-2011年登革热媒介监测分析

目的 了解广东省深圳市龙岗区成蚊携带登革病毒状况与健康人群登革病毒抗体水平,为登革热的流行风险评估提供客观依据.方法 于2009-2011年对龙岗区10个街道和21个大运场馆进行蚊种构成及密度监测,检测成蚊携带登革病毒和健康人群的登革病毒IgG抗体水平.结果 2009-2011年龙岗区共捕获25 556只成蚊,其中东乡伊蚊和白纹伊蚊分别占2.45％与1.60％;学校和工地的诱蚊诱卵指数均高于平均水平,分别为18.34％和11.29％;不同生境成蚊密度以医院最高,达27.67只/灯;从2批伊蚊标本中检测有登革病毒,其中1批标本经测序分析与登革病毒Ⅱ型流行株同源性最高,达98％;检测884名健康人群中登革病毒IgG抗体阳性率为4.20％(37/884).结论 深圳市龙岗区伊蚊密度较低,但伊蚊携带登革病毒的效能较高,登革病毒已经在龙岗区自然界中存在.     

登革1型病毒荧光定量PCR快速检测

目的建立登革1型病毒的快速特异的荧光定量PCR检测方法。方法设计登革1型病毒特异的引物和TaqMan探针,制作标准曲线,并检测其特异性、重复性、再现性和敏感性,采用荧光定量PCR和常规PCR对临床标本进行检测比较。结果成功构建了标准曲线,回归方程为Y=-3.410logX+45.10,相关系数R2=0.999,扩增效率Eff=96.5%,灵敏度可达103 copies/mL,此荧光定量PCR方法对登革1型病毒检测高度特异,与其他3型登革病毒和乙型脑炎病毒之间并无交叉反应;采用登革病毒种特异引物探针和本研究建立的登革1型病毒型特异引物探针对166份cDNA样本进行荧光定量PCR检测,均发现126份为阳性,阳性率均为75.9%,Ct值为20.84～36.36,浓度范围为1～1.3×104copy/μL;常规PCR方法检测到其中36份为阳性,阳性率为21.7%。结论荧光定量PCR方法能够快速灵敏地检测登革1型病毒,并能实现对病毒滴度的绝对定量。     

感染登革病毒Ⅱ型后白纹伊蚊脂肪酸的动态变化

目的　研究感染登革病毒 型后 (DV2 )白纹伊蚊脂肪酸的动态变化。　方法　采用 DV2经胸注射白纹伊蚊 ,以气相色谱法检测感染后 5 d、10 d及 2 0 d白纹伊蚊脂肪酸含量 ,并与未感染 DV2相应龄期蚊虫脂肪酸含量比较。　结果　共检测了 13种脂肪酸 ,其中饱和脂肪酸 5种 ,不饱和脂肪酸 8种。不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比例在正常组随蚊虫龄期的增加先升后降 ;在 DV2组随其龄期的增加先降后升。在 DV2感染后 2 0 d脂肪酸不饱和度最高。在正常各组及感染 DV2各组中 ,均以软脂酸 (16 :0 )、十六碳烯酸 (16 :1)和油酸 (18:1) 3种脂肪酸的含量最高 ,占总脂肪酸含量的 80 %以上 ,但感染各组较正常对照组均有升高趋势。　结论　白纹伊蚊感染 DV2后虽有脂肪酸含量变化 ,但以不饱和脂肪酸的升高为主 ,故不会降低其体内的能量代谢 ,因而也不会降低其寿命。     

登革病毒基因组核苷酸变异与毒力的关系

登革病毒是一种流行于热带、亚热带地区的蚊媒病毒，其引起的登革热、登革出血热／登革休克综合征（DSS／DHF）已成为严重威胁人类健康的公共卫生问题。登革病毒缺乏精确的复制校正系统．在传播过程中核苷酸的变化会导致病毒毒力的变化，目前其致病与免疫机制尚未明了，缺乏有效的疫苗。本文就登革病毒基因变异与其毒力关系方面的研究进行综述。     

登革病毒疫苗研制的障碍

登革病毒是大多数热带国家儿童发病与死亡的主要原因,但至今仍无商品化的登革病毒疫苗供应.本文介绍了登革病毒的致病机理;阻碍疫苗发展的原因(包括感染的抗体依赖性增强作用和病毒的进化等);登革病毒疫苗的研究现状.     

从登革出血热病人血清分离到一株登革病毒

从登革出血热病人血清分离到一株登革病毒左丽１程明亮２刘乐和３郭辉玉３丁一生２凌天翼１１贵阳医学院免疫学教研室（５５０００４）２贵阳医学院传染病学教研室３广州中山医科大学微生物学教研室近年来，由登革病毒（ＤＶ）引发的登革出血热（ＤＨＦ）和登革休克...     

登革病毒速成甲基纤维素半向量空斑试验的建立

建立一种不需预先制备细胞单层的带成甲基纤维素半微量空斑技术。以登革Ⅱ型病毒为代表，对速成法和常规法的实验条件，可靠性，敏感性，重复性等作系统研究。用方差分析和ｔ检验对实验结果进行统计学处理。