Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达

目的　克隆 2型登革病毒E基因并用酵母真核表达 ,获得全长的重组E蛋白 ,为其结构与功能的研究提供条件。方法　从感染DEN2 (NGC株 )后病变的C6 /36细胞上清中提取RNA ,通过RT -PCR扩增E基因片段 ,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒 ,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定 ,取Mut+菌诱导表达 ,SDS -PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果　RT -PCR得到 1 5kb的E基因片段 ,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因 ;Mut+ 酵母转化菌可分泌表达约 6 9kDa的蛋白 ,与DEN2E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论　成功将克隆的全长DEN2E基因在酵母菌中表达 ,获得的重组E蛋白具有免疫反应性。     

登革2型病毒包膜蛋白在毕赤酵母中的表达和病毒样颗粒的组装

目的在组成型的毕赤酵母系统中表达登革2型病毒包膜蛋白E和前膜蛋白prM,并研究病毒样颗粒在酵母细胞中的组装特性。方法以登革2型病毒ZS01/01株mRNA为模板,扩增编码prM/E蛋白的基因。将目的基因克隆至表达载体pGAPZaA的多克隆位点,并转化毕赤酵母GS115。经Zeocin抗生素筛选和PCR鉴定后获得酵母菌重组克隆,并进行表达和鉴定。结果成功克隆登革2型病毒prM/E基因,SDS-PAGE和Western blot检测表明包膜蛋白E在组成型的毕赤酵母系统中得到高水平表达;利用透射电镜在重组酵母胞浆内检测到30-50 nm的登革2型的病毒样颗粒,并发现类似登革病毒感染的双层膜结构;免疫电镜结果证实重组病毒样颗粒可以与抗登革2型病毒血清反应,具有免疫反应性。结论成功的建立了组成型表达登革2型病毒样颗粒的毕赤酵母系统,为登革病毒样颗粒疫苗的制备奠定了基础。     

用逆转录—聚合酶链反应检测海南岛登革热流行区？…

目的 寻找中国海南岛一带登革热疫区，登革病毒潜伏的动物宿主及鉴定其毒株型别。方法 采用１￣４型登革病毒通用引物，用塑转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测海南岛登革热流行区蝙蝠脑细胞，血清和埃及伊蚊的登革病毒ＲＮＡ。结果 检测３５例疫区蝙蝠脑细胞，２０例阳性；检测１８例蝙蝠血清，３例阳性；检测三组埃及伊蚊，１组阳性，３组非流行区者都阴性。用４个登革病毒原型株的单克隆荧光抗体技术检测２０例登革病毒Ｒ     

登革热38例临床分析

将1991年38例登革热患者临床表现与1985～1986年37例比较发现:消化道症状较多而出血较少。在大多数病例实验室结果显示心肌酶升高、肝、肾功能受损,外周血白细胞及血小板计数减少。38例中的大多数患者感染Ⅰ型或Ⅳ型登革热病毒。     

2006年广州市登革热媒介及其带病毒现状调查

目的调查广州市登革热传播媒介的孳生情况及媒介蚊虫的登革病毒自然感染率,为今后预防和控制登革热流行提供科学依据。方法采用蚊幼虫调查法,调查广州市8区登革热媒介蚊虫的主要孳生情况,再以采集的蚊虫标本为研究对象,用反转录聚合酶链反应技术检测所取标本中是否携带登革病毒。结果广州市8区调查点的容器指数以白云区、荔湾区和天河区较高,分别为68.52%、52.54%和47.20%,其他依次为越秀区、番禺区、黄埔区、海珠区和花都区,分别为46.00%、42.25%、39.06%、34.00%和31.43%。白纹伊蚊的孳生容器类型有14种,以花盆底盘、废缸罐、废桶类最高,分别占全部积水容器的54.97%、14.67%和11.64%;在261个阳性积水容器中,以废旧轮胎、废缸罐和石穴阳性率最高,阳性率分别为57.14%、54.02%和47.62%;所采集的登革热媒介蚊虫标本均不携带登革病毒。结论广州市8个区的容器指数均较高,而媒介蚊虫登革病毒自然感染率较低,存在登革热流行的基本条件,一旦有病原输入极易引起疾病的流行传播。应采取以消灭蚊虫孳生地为主的综合性防制措施,防止登革热的发生。     

输入性蚊类携带登革病毒的检测方法的研究

〔目的〕研究适用于国境卫生检疫对输入性蚊类携带的登革病毒检测的方法。〔方法〕针对国境口岸输入性蚊类样本的特点和检疫检测的要求,筛选与试验对蚊样本检测登革病毒快速、敏感、特异的技术和方法。〔结果〕口岸输入性蚊类样本具有蚊虫数量少、不可重复获得等特点,需要有检测小样本蚊虫的方法,大样本检测需要一次完成并结果较准确。〔结论〕确定了适合对蚊虫小样本检测登革病毒的方法。"单克隆抗体免疫荧光法"和"RT-PCR"技术被用于对蚊虫大样本进行病毒分离及鉴定,并制定了相应的行业标准规程。     

宿主异常免疫反应与登革病毒致病的关系

登革病毒感染在全世界范围内流行的越来越频繁，爆发日益增加，发生登革出血热及登革休克综合症（DHF／DSS）的病例数也呈现增加的趋势。每年，全球范围内有将近一亿人感染登革热，其中大约有50万例登革出血热。目前，登革病毒引起的DHF／DSS的机制尚未完全明了，本文主要就宿主免疫功能异常与登革病毒致病的关系的研究进展作一综述。     

登革热

登革热（dengue fever）是登革病毒引起、伊蚊传播的一种急性传染病。临床特征为起病急骤，高热，全身肌肉、骨髓及关节痛，极度疲乏，部分患可有皮疹、出血倾向和淋巴结肿大。应做好疫情监测，以便及时采取措施控制扩散。     

套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用

目的 建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)快速检测黄热病毒方法。方法 参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物，并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性，随后对镁离子、dNTP及引物浓度，PCR反应条件进行优化，建立稳定、特异的套式RT-PCR快速检测黄热病毒方法，并以同属于黄病毒科的登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎病毒为对照，验证其特异性。结果 外引物扩增可获得404 bp左右的特异性扩增片断，阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断，但可见非特异性片断；内引物扩增可获得349 bp左右片断，阴性对照无扩增条带。结论 套式RT-PCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。