登革病毒E蛋白抗原基因肌肉注射诱导小鼠免疫应答的初步研究

目的：研究登革病毒Ｅ基因免疫的可行性,方法：用脂质体转染法将构建的Ｅ基因重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｅ导入小鼠成纤维细胞ＮＨ３Ｔ３细胞,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹试验检测Ｅ基因的体外表达。然后将该重组真核表达质粒经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,检测其诱发特异性免疫应答水平。结果：重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｅ在小鼠体内诱发一定水平的体液和细胞免疫应答,且持续时间较长。结论：登革病毒Ｅ基因免疫可诱发特异性免疫应答。为登革病毒疫苗的研制提供了实验依据。     

登革病毒实验室检测方法及传播影响因素研究进展

登革病毒(DENV)为单股正链RNA病毒,可以引起登革热、登革出血热和登革休克综合征,目前没有特效抗病毒药物和理想疫苗.近年来气候变化和社会因素的影响,使得登革热的发病率逐年上升,给全球传染病防控带来严峻挑战.本文综述了 DENV的病原学、实验室检测方法及传播影响因素三个方面的研究,希望能为登革热的监测、检测和防控提供...     

登革病毒感染合并脂肪肝191例肝脏酶学分析

目的 探讨西双版纳州登革热合并脂肪肝病例的肝脏酶学变化特征,为制定当地登革热有效治疗方案提供依据。方法 对2013和2015年西双版纳州191例登革病毒感染合并脂肪肝病例临床资料和191例随机对照组进行登革病例主要肝脏酶学指标回顾性分析。结果 191例登革病毒感染合并脂肪肝患者丙氨酸氨基转氨酶增高率为84.8%,天门冬氨酸氨基转氨酶增高率为90.1%,γ-谷氨酰转移酶增高率76.8%和黄疸指数增高率20.4%,除黄疸指数外,其它3个指标均明显高于对照组(P<0.05)。结论 西双版纳州登革热病例中合并脂肪肝患者肝损伤严重,其中以丙氨酸氨基转氨酶、天门冬氨酸氨基转氨酶、γ-谷氨酰转移酶增高为主,提示一旦发现登革热患者合并脂肪肝时,临床医师应密切监测患者上述3种酶的变化并及时给予相关治疗。     

登革病毒致病相关因素与体液免疫机制研究进展

登革病毒(Dengue virus,DEN)属黄病毒科、黄病毒属的一个血清学亚群,包括四个不同血清型(DEN1～DEN4)。是能引起人类发生从自限性的类似流感样综合征的登革热(dengue fever,DF)到严重威胁生命的登革出血热(Dengue hemorrhagic fever,DHF)及登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS)的病原体。近年来登革病毒感染在     

抗Ⅳ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:研制Ⅳ型登革病毒(DENV-4)非结构蛋白1(NS1)特异性的单克隆抗体(mAbs),并鉴定其特异性。方法:在表达具有良好抗原性的重组DENV4-NS1蛋白的基础上,用重组DENV4-NS1蛋白和灭活的DENV-4免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光测定法(IFA)和Western blot分析对mAb的特异性进行鉴定;通过竞争抑制试验对mAb识别的抗原位点进行分析。结果:获得15株特异性针对DENV4-NS1的mAbs,与其他3型DENV的NS1不产生交叉反应。mAb的Ig亚类测定均为IgG1。竞争抑制试验显示,15株mAbs存在2个不同识别抗原位点。结论:成功地获得特异性针对DENV4-NS1蛋白的mAbs,为进一步研究DENV4-NS1蛋白的结构与功能及研制DENV-4的临床诊断试剂奠定了基础。     

2010年广州登革热患者临床及实验室特征分析

目的:分析2010年广州地区登革热患者的临床及实验室特征。方法:统计2010年8-12月我院收治47例登革热患者的临床及实验室检查结果,采用巢式PCR方法扩增并鉴定感染患者的登革病毒血清型别。结果:患者临床特征为发热(100%)、头痛(44.7%)、肌肉痛(55.3%)、骨关节痛(19.1%)以及皮疹(59.6%),实验室特征为白细胞、血小板计数减少(80.9%、63.8%)以及肝脏转氨酶升高(丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶升高分别为23.4%和36.2%);巢式PCR结果提示14例患者为DENV-4感染,6例为DENV-2感染。结论:2010年广州地区登革热患者症状典型、病情较轻,流行型别是DENV-4和DENV-2,DENV-4均为本土病例有输入及本土病例     

登革病毒E蛋白入胞机制研究现状

登革病毒（denguevirus,DENV）属于黄病毒科黄病毒属,是具有包膜的单股正链RNA病毒。病毒可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革休克综合征,广泛流行于热带和亚热带地区,全球流行超过100个国家。登革病毒依赖包膜蛋白E蛋白构象的改变,从而发生病毒包膜和宿主细胞膜之间的融合将病毒核酸传递人细胞质中,但其感染入胞机理尚不十分清楚。本文就登革病毒相关E蛋白入胞机制的最新研究进展作一简要综述。     

广州市2009年新出现登革3型病毒的分子流行病学分析

目的 对广州市2009年新出现的3型登革病毒(DEN)株的E基因进行RT-PCR扩增和序列测定,探讨其来源及基因型.方法 收集广州市2009年登革热患者急性期血清,用C6/36细胞培养分离DEN,RT-PCR扩增病毒全长E基因,测序并绘制系统进化树,结合流行病学资料进行分子流行病学分析.结果 2009年采集的19份患者血清标本中,分离到7株3型DEN株,RT-PCR扩增后测序获得E基因序列,7株DEN3病毒E基因均由1479个碱基组成,编码493个氨基酸,基因序列未见插入或缺失,分析发现7株病毒来自两个不同的亚型:09/GZ/1081、09/GZ/1483和09/GZ/10806属于东南亚/南太平洋型,09/GZ/10616、09/GZ/11144、09/GZ/11194和09/GZ/13105属于印度次大陆型,各亚型群内毒株序列同源性较高.结论 广州市2009年DEN3为输入性,分属两个基因型.     

登革2型病毒NS3蛋白具有抑制病毒复制的作用

目的 构建登革2型病毒非结构蛋白NS3及其结构域基因的真核表达载体, 并鉴定重组蛋白在BHK-21细胞内对登革病毒复制的抑制作用。方法 以登革2型病毒新几内亚毒株(NGC DENV-2)基因组RNA为模板, 设计引物扩增获得编码NS3及其蛋白酶NS3P和解旋酶NS3H的基因, 通过基因重组的方法分别将3段基因片段克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+), 获得重组表达载体pcDNA3.1-NS3、pcDNA3.1-NS3P和pcDNA3.1-NS3H;经脂质体法分别转染BHK-21细胞后, 用RT-PCR、间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达的蛋白。结果 成功构建pcNS3、pcNS3P和pcNS3H重组质粒, 转染进BHK-21细胞48 h后, 分别检测出相对分子量约为69 kDa、50 kDa及18 kDa的特异蛋白;且转染pcNS3、pcNS3H组均与空白对照组及未转染组间的病毒载量存在着差异(P<0.05);转染pcNS3P组与未转染组及空白对照组的病毒载量无统计学差异(P>0.05)。结论 DENV-2的非结构蛋白NS3能够抑制病毒的复制。     

广州地区2012年1、2型登革病毒基因型特征研究

目的 测定广州市2012年1、2型登革病毒(DENV 1、DENV 2)的E基因序列,探讨其来源及基因型。方法 收集广州市2012年478例登革热患者急性期血清478份,用C6/36细胞培养分离登革病毒,RT-PCR法扩增全长E基因,测定序列并绘制系统发育树,结合流行病学资料进行分子流行病学分析。结果 478例患者标本中分离到DENV 1 6株,DENV 22株,测序获得E基因序列,E基因长度均为1 485 bp,编码495个氨基酸,DENV 1碱基同源性为97.4%~99.9％,推导的氨基酸同源性为99.2%~100.0％,其同源性与2011、2006和2004年份的国内DENV 1流行株接近。DENV 2碱基同源性为91.3%,推导的氨基酸同源性为97.8%,其同源性与我国DENV 2流行株相对较远。进化分析发现,DENV 1均属于同一亚型,即亚洲型,DENV 2属于两个亚型,即马来西亚/印度次大陆和东南亚型。结论 推测广州市2012年DENV 1和DENV 2均为输入性,DENV 1可能由柬埔寨和广东佛山输入,DENV 2可能由孟加拉国和缅甸输入。