人类乳头状瘤病毒与腺性膀胱炎的相关性研究

人类乳头状瘤病毒 (ＨＰＶ)是一类与泌尿生殖系肿瘤关系密切的ＤＮＡ病毒。本研究试图通过免疫组织化学方法检测腺性膀胱炎等病变标本的ＨＰＶ感染情况 ,揭示ＨＰＶ与腺性膀胱炎的相关性 ,为探讨腺性膀胱炎的病因提供理论依据。1　材料与方法1 .1 　 标本来源36例腺性膀胱炎石蜡标本、2 6例膀胱移行细胞癌并腺性膀胱炎石蜡标本、2 6例膀胱移行细胞癌石蜡标本、2 5例正常膀胱石蜡标本 (生前无泌尿系疾病症状的成人尸检膀胱组织石蜡标本 )均来自广西医科大学附属第一医院病理科 ,均经病理检查确诊。鼠抗ＨＰＶ单克隆抗体 (ＨＰＶ通用型 )免疫…     

AAV-TGFβ1的构建及其与AV-TGFβ1对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较

目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI酶切位点。将TGFβ1基因亚克隆于腺相关病毒(AAV)载体中,并经酶切和测序分析进行鉴定。AAV-TGFβ1病毒被包装并转染H293细胞,通过免疫荧光检测AAV介导的目的基因表达。利用AAV-EGFP病毒检测AAV对髓核细胞的转染效率。AAV-TGFβ1和AV-TGFβ1分别转染髓核细胞后,通过Antonopulos法检测蛋白多糖的合成。结果测序分析证明TGFβ1序列与NCBI Gene Bank所报道的一致。经酶切鉴定证实AAV-TGFβ1重组质粒被成功构建。AAV可介导TGFβ1高效表达并高效转染髓核细胞。AV-TGFβ1可快速一过性地促进髓核细胞蛋白多糖合成,而AAV-TGFβ1可稳定促进蛋白多糖合成。结论AAV-TGFβ1病毒被成功构建并可稳定地促进髓核细胞蛋白多糖的合成。     

GA反义基因对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡的影响

目的研究反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶（GA）基因对裸鼠体内胃癌细胞凋亡作用的影响。方法将携带GA反义基因的质粒转染胃癌细胞SGC-7901，并将成功转染的胃癌细胞接种于裸鼠皮下，获得裸鼠胃癌移植瘤模型，通过TUNEL技术检测胃癌细胞凋亡的凋亡指数；RT-PCR技术检测移植瘤细胞内GAmRNA的含量。结果GA反义基因质粒载体成功转染胃癌细胞后，肿瘤生长速度减慢，癌细胞凋亡增加，肿瘤细胞内GAmRNA的含量减少。结论GA反义基因可抑制GA基因的表达，明显促进胃癌细胞凋亡。     

HCCR-2反义核酸对肝癌HepG2细胞的作用

Objective To investigate the effects of antisense recombinant euraryotic expression vector of HCCR-2 on the proliferation and apoptosis of HepG2. Methods The antisense recombinant eukaryotic expression vector of HCCR-2 was constructed. The vector was stably transfected to the HepG2 cells, and positive clones were selected by G418 (antiseuse vector group), pIRES2-EGFP vector was transfected into the HepG2 cells in the same way (pIRES2-EGFP group). The conditions of the nontransfected HepG2 cells were used as control (HepG2 group). Changes in cell growth curve, cell cycle, cell apoptosis and morphology of HepG2 cells after the transfec-tion were detected by MTT method, flow cytometry and transmission electron microscopy, respectively. All the data were analyzed by one-way ANOVA and chi-square test. Results The expression level of HCCR-2 mRNA was down-regulated to 0.39±0.04 in antisense vector group, and the expression level of HCCR-2 mRNA in pIRES2-EGFP group and HepG2 group were 0.62±0.06 and 0.72±0.03, respectively, with significant difference among the 3 groups (F=43.701, P<0.05). The apoptotic rate of HepG2 cells in antisense vector group, pIRES2-EGFP grop and HepG2 group were 13.30%, 2.51% and 2.07%, respectively, with significant difference among the 3 group (χ2=6.793, 8.721, P<0.05). The growth of HepG2 cells in antisense vector group was retarded, and was blocked in G0/G1 stage. Conclusions The HCCR-2 antisense recombinant eukaryotic expression vector can inhibit the mRNA expression of HCCR-2 and promote the apoptosis of cells. HCCR-2 may be involved in cell regulation and the proliferation of hepatocellular carcinoma cells.     

XH—超高频美容仪治疗扁平疣368例体会

扁平疣是由人乳头状瘤病毒引起的皮肤病。好发于颜面、颈部、手背 ,是一种影响美观的皮肤病。笔者使用 XH-超高频美容仪治疗扁平疣 368例 ,取得了良好的效果 ,报告如下。1　临床资料368例均为门诊病人 ,男 1 78例 ,女 1 90例 ,年龄 1 8岁～ 70岁。病程最短 3个月 ,最长 2 0年。其中面部疣 1 82例、双手背疣 1 2 6例、双足背疣 46例、头皮疣 1 2例、全身疣 2例。2　治疗方法及效果常规消毒皮肤 ,2 %利多卡因局部浸润麻醉 ,用XH-超高频美容仪将病变组织分层气化 ,应注意 ,保护正常组织 ,使术区边缘与正常组织平滑、自然的过渡 ,以求术后术区…     

肾移植受者BK病毒感染的检测方法及免疫抑制方案对BK病毒活化的影响

目的 探讨肾移植术后受者BK病毒感染的检测方法及免疫抑制方案对BK病毒活化的影响.方法 选择1999年1月至2007年1月问进行肾移植术的200例受者为研究对象,其中100例基础免疫抑制方案为他克莫司(FK506)十霉酚酸酯(MMF)的受者作为密切观察组;另100例基础免疫抑制方案不同、但在年龄和术后是否发生急性排斥反应方面与密切观察组受者相一致(按1:1匹配)的受者作为对照观察组.在肾移植术后平均15.3个月时,分别采集所有受者的血、尿样本,行BK病毒尿沉渣Decoy细胞计数与BK病毒DNA含量的检测.分析和比较尿Decoy细胞计数、尿BK病毒含量及血BK病毒含量之间的关系;比较两组Decoy细胞、BK病毒尿症与BK病毒血症阳性率的差异.结果 200例受者的尿Decoy细胞、BK病毒尿症与病毒血症的阳性率分别为:34.0%、36.0%和16.5%.尿Decoy细胞计数与尿BK病毒含量呈正相关(r=0.714,P＜0.001),但尿液和外周血中BK病毒含量无明显相关性(P＞0.05).密切观察组的尿Decoy细胞、BK病毒尿症与BK病毒血症的阳性率分别为49%、50%和24%,对照观察组上述指标的阳性率分别是19%、22%和9%,两组的差异有统计学意义(P＜0.01).结论 尿沉渣Decoy细胞计数方法简单、易行并敏感,可以做为BK病毒活化的指标;血、尿BK病毒DNA的检测可进一步了解病毒活化情况、筛杳BK病毒相关的移植肾肾病.FK506+MMF的组合免疫抑制方案易发生BK病毒的活化,受者术后需进行密切观察和相关的检测.     

融合基因骨形态发生蛋白-4/7重组腺相关病毒载体转染对骨髓基质干细胞成骨活性的作用

目的 应用高效细菌内同源重组系统pAd-Easy制备融合基因骨形态发生蛋白-4/7(BMP-4/7)基因的重组腺相关病毒(AAV),转染兔骨髓幕质干细胞(BMSCs),检测BMP-4/7的成骨活性.方法 采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP-4和BMP-7成熟肽cDNA,获取BMP-4/7融合基因,克隆到pGEM质粒中;从pGEM-BMP-4/7质粒中切取BMP-4/7融合基因克隆到穿梭载体,在大肠杆菌内重组,在293细胞中构建AAV-BMP-4/7重组腺相关病毒载体;采用SDS-PAGE电泳榆测BMP-4/7融合基因蛋白在大肠杆菌的表达;采用ELISA法检测融合基因BMP-4/7在BMSCB中的表达.AAV-BMP4/7转染兔BMSCs细胞7、14 d后,行碱性磷酸酶及骨钙素含量测定,观察成骨活性,以非转染组作为对照. 结果成功构建高滴度的携带BMP-4/7融合基因的重组腺相关病毒AAV.BMP-4/7.AAV-BMPd/7重组质粒载体转化大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳可见29～830 KD蛋白带,大多数蛋白存在于包涵体内.ELISA检测显示经AAV转染的BMSCs中BMP-4/7蛋白有表达,随着转染MOI值的增加,BMP-4/7蛋白的表达增高(P<0.01).AAV-BMP4/7转染细胞后,碱性磷酸酶及骨钙素含量均明显增高,并与转染后诱导培养的时间呈正相关,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01). 结论融合基因BMP-4/7可提高BMPs表达水平,有成骨活性,通过AAV可稳定表达.     

PRL-3 miRNA重组慢病毒对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用

目的 观察PRL-3在人胃癌SGC7901细胞增殖中的作用.方法 构建表达人工PRL-3 miRNA的慢病毒载体,转染SGC7901细胞,并检测其沉默PRL-3表达的效果;MTT试验评价沉默PRL-3表达对SGC7901细胞增殖的抑制作用.结果 成功构建表达PRL-3慢病毒载体.PRL-3慢病毒转染组,可沉默SGC7901细胞PRL-3的表达.MTT试验结果,沉默PRL-3的表达后,与空载体组比较,SGC7901细胞数下降了30.4%;生长曲线比较,SGC7901细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05).结论 PRL-3在胃癌生长中起着重要作用,可作为胃癌潜在的治疗靶点.     

新城疫病毒对人肺腺癌A549细胞系的作用

目的 观察新城疫病毒对人肺腺癌A549细胞的作用.方法 应用新城疫病毒(NDV)强毒株D90对体内、体外培养人肺腺癌A549细胞进行抗癌实验,通过体外培养A549细胞观察D90对肿瘤细胞的杀伤作用,进而建立14例A549肿瘤细胞裸鼠模型,对实验后裸鼠肿瘤组织进行病理学检查,通过光镜、电镜等方法观察肿瘤细胞形态学改变从而探讨新城疫病毒D90对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用,为临床应用奠定基础.结果 NDV强毒株D90可在体外培养条件下溶解、杀伤A549细胞.实验组与对照组比较肿瘤组织体积明显缩小(t'=4.753,P<0.01),光镜和电镜下可见肿瘤组织内血管分布减少,肿瘤细胞坏死与凋亡.结论 新城疫病毒强毒株D90能够抑制体外培养的人肺腺癌A549细胞的增殖并溶解、杀伤肿瘤细胞,能够抑制裸鼠体内肿瘤组织的生长和转移,对正常组织无影响.     

基因重组rAAV-TK治疗膀胱癌

目的 探讨基因重组rAAV-TK基因治疗膀胱癌的效果.方法 (1)通过rAAV-EG-FP转染膀胱肿瘤T24细胞,来确定重组腺相关病毒对该细胞的转染情况及转染效率;(2)通过rAAV-TK体外转染T24膀胱肿瘤细胞,MTT、流式细胞仪等方法来检测对T24细胞凋亡的诱导作用;(3)构建裸鼠膀肮肿瘤模型,分析rAAV-TK基因治疗膀胱痛的体内效果.结果 (1)在T24细胞中可以表达携带的外源基因EGFP;(2)rAAV-TK可以稳定感染T24细胞;(3)rAAV-TK转染124细胞72 h后,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率是34.12%,明显高于空病毒转染组和空白对照组;(4)瘤内注射rAAV-TK大约9 d后,肿瘤生长受到显著抑制,治疗结束后:各组肿瘤的体积分别是:rAAV-TK组(0.71±0.11)cm3、rAAV-MCS组(1.27±0.13)cm3和空白对照组(1.24±0.17)cm3(P<0.05).结论 体外和体内实验表明rAAV-TKⅨ可有效抑制膀胱肿瘤的生长,能够有效基因治疗膀胱肿瘤.