当归芍药散调控泛素-蛋白酶体途径改善SAMP8小鼠认知能力的作用及其机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）调控泛素-蛋白酶体途径（UPP）改善SAMP8阿尔茨海默病（AD）模型小鼠认知能力的作用机制。方法 15只SAMR1小鼠为正常组，60只SAMP8小鼠随机分为模型组及DSS高、中、低剂量组（57.6、28.8、14.4 g·kg^-1·d^-1），连续灌胃给药8周。Morris水迷宫实验测试定位航行与空间探索能力；苏木素-伊红（HE）染色法检测海马CA1区神经元病理结构改变；免疫组化法（IHC）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马β淀粉样蛋白（Aβ）和磷酸化（p）-Tau蛋白含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）、UCHL3 mRNA和蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期延长（P<0.05），穿越平台象限次数和平台象限停留百分比减少（P<0.05）；CA1区神经元明显减少、胞体聚缩；β-淀粉样前体蛋白（β-APP）和p-Tau阳性细胞数量明显增多（P<0.05）；Aβ和p-Tau蛋白水平升高（P<0.05）；Ub mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）；E3、26S蛋白酶体、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）。与模型组比较，DSS高、中剂量组逃避潜伏期缩短（P<0.05），穿越平台象限次数和停留百分比增加（P<0.05）；DSS各剂量组CA1病理改变明显改善；各剂量组β-APP及中、低剂量组p-Tau阳性染色细胞数量减少（P<0.05）；各剂量组Aβ及p-Tau蛋白水平下降（P<0.05）；各剂量组 Ub mRNA表达降低（P<0.05），高、中剂量组26S、E3、UCHL3 mRNA表达水平升高（P<0.05），中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05）；各剂量组Ub蛋白表达降低，高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高（P<0.05）。结论 DSS可改善SAMP8小鼠认知能力，其机制可能与降低UPP途径中Ub及升高E3、26S、UCHL1、UCHL3的表达，减少Aβ和p-Tau异常沉积有关。     

轻型颅脑损伤患者血清泛素C末端水解酶L1水平变化情况分析

目的分析血清泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)水平在轻型颅脑损伤中的意义及同预后的关系。方法选取2014年8月到2015年7月东莞市塘厦医院收治的30例轻型颅脑损伤患者作为观察组,根据头颅CT阴性和阳性分为A、B两组;同时取30例健康体检者为对照组,用ELISA方法检测患者血清UCH-L1水平,分析患者轻型颅脑损伤程度与UCH-L1水平的关系,并评估患者预后质量。结果对照组血清UCH-L1水平明显低于观察A、B两组,差异有统计学意义(P<0.05);观察A组患者血清UCH-L1水平明显低于观察B组,差异有统计学意义(P<0.05);观察A组患者GOS评分低于观察B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清UCH-L1可以作为鉴别轻型颅脑损伤的生物标志物,对患者预后质量的判断具有一定的参考价值。     

去泛素化酶24基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究去泛素化酶24(USP24)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫荧光等方法检测USP24在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征;采用双荧光素酶报告基因实验检测USP24启动子转录活性。结果:qPCR和免疫荧光结果表明,USP24基因在出生1周时表达水平较低,3周时急剧升高,随后维持在相似水平至第8周;USP24主要定位于支持细胞和生精细胞的细胞质;与野生型相比,USP24在ARKO小鼠睾丸表达降低;性成熟小鼠睾丸中,USP24定位于成熟精子头部后端及中部。双荧光素酶报告基因实验结果显示,睾酮刺激后USP24启动子的转录活性升高。结论:USP24基因的表达水平的升高与小鼠的性发育相关,且其蛋白在小鼠成熟精子上表达。USP24是受雄激素受体(AR)调控的靶基因。USP24可能参与调控小鼠的精子发生过程。     

重组泛素连接酶SH2-U-box/RING的构建与表达

目的 构建重组泛素连接酶SH2-U-box、SH2-RING,并克隆进入pFlag-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者瘤细胞中过度活化的BCR/ABL,抑制肿瘤细胞的生长提供基础.方法 设计引物,扩增接头分子Grb2的SH2结构域以...     

小泛素相关修饰物与1型糖尿病

小泛素相关修饰物作为一个表达于全身多个器官的蛋白质家族,可对胞内多种转录因子、酶、蛋白质进行翻译后修饰.生理状态下,小泛素相关修饰物与胰岛β细胞的发育、成熟以及胰岛素的分泌密切相关.同时,它通过抑制机体自身免疫反应,减少胰岛β细胞凋亡而减缓1型糖尿病的发生、发展.对此家族蛋白及其修饰过程的深入研究为治疗1型糖尿病提供新的思路.     

大黄素通过上调Smad4蛋白表达抑制胰腺癌细胞

目的以Jab1为作用靶点探讨大黄素抗胰腺癌作用及可能的机制。方法 293T细胞随机分为对照组(不处理)、大黄素组(20μmol/L大黄素处理)、Jab1组(转染HA-Jab1质粒),用免疫印迹实验(Western blot)法测定胰腺癌PANC-1和As PC-1细胞系中Jab1与Smad4的蛋白表达。用免疫共沉淀(IP)测定大黄素组及Jab1对β-Tr CP1与Smad4结合的影响。采用Western blot法检测对照组及大黄素干预组PANC-1和As PC-1细胞系中Smad4蛋白表达。结果胰腺癌PANC-1细胞和As PC-1细胞中Jab1呈高表达,Smad4呈低表达,Jab1与Smad4呈负相关关系(P0.01)。293T细胞中Jab1能促使β-Tr CP1与Smad4结合,促进Smad4蛋白降解;而大黄素通过抑制β-Tr CP1与Smad4结合,增加Smad4的表达水平(均P0.05)。结论与Jab1的作用相反,大黄素可能通过抑制泛素化酶途径,抑制Smad4的降解,从而起到抗肿瘤作用。     

认知功能障碍中泛素蛋白酶体通路的作用

众多信号转导通路功能稳定是保持正常认知的生物学基础，其中，泛素蛋白酶体通路 （UPP）功能障碍会导致蛋白质降解出现障碍，神经元稳定性遭到破坏，出现神经元变性坏死。现通过介 绍突触可塑性中起关键作用的分子与UPP的相互关系，阐述认知功能障碍中UPP的作用机制。     

自噬在心力衰竭中的微观、宏观作用研究

自噬是在溶酶体的介导下降解细胞内受损的分子物质和细胞内容物,进而维持细胞内环境的稳态。随着自噬作用机制的逐步揭示,其在心力衰竭中的分子作用机制也备受关注。心肌细胞在缺血、缺氧、饥饿等应激状态下,相应的细胞器,如线粒体、内质网、泛素-蛋白酶体遭受破坏,细胞内环境在发生改变过程中可观察到自噬活动的增加,并清除受损的蛋白质和细胞器等,进而阻止心力衰竭的进展。自噬不仅可以维持心肌细胞的内环境,而且也参与了心肌细胞的重构和凋亡,对维持心肌细胞的形态和功能发挥重要作用。因此,如何调控心力衰竭中心肌细胞的自噬活动,将可能成为未来心力衰竭治疗的突破点。     

SUMO-2/3活化介导丹参对缺血神经元的保护机制

[目的] 从类泛素化(SUMO)角度研究丹参对缺血性脑血管病后的神经元保护机制。[方法] 原代分离培养SD大鼠海马神经元细胞,免疫荧光方法予以鉴定;制作神经元体外氧糖剥夺(OGD)模型,分为对照组、OGD组和丹参治疗组;酶联免疫吸附(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量,原位凋亡法检测凋亡细胞率;蛋白印记和免疫荧光方法检测SUMO-1和SUMO-2/3在细胞内的表达定量和定位情况。[结果] 所培养细胞高表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白-2(MAP-2),胶质纤维酸性蛋白(GFAP),神经元纯度大于95%;ELISA结果显示,3组中LDH含量对照组<丹参治疗组P<0.05),但SUMO-1无明显变化(P>0.05),而丹参治疗能够进一步提高SUMO-2/3的表达(P<0.05);免疫荧光结果显示OGD神经元发生了SUMO-2/3由细胞浆向细胞核的明显移位现象,而丹参治疗能够进一步增强这种效果。[结论] 丹参能够通过诱导SUMO-2/3,而非SUMO-1的活化机制,发挥对缺血神经元的保护作用。