NK细胞体外培养及对HepG2细胞的杀伤活性研究

目的:研究NK细胞的体外培养及对HepG2的杀伤活性。方法:采集外周血,肝素抗凝,分离单个核细胞(PMBC),用NK细胞培养基(补加IL-2200U/ml)培养12d,用流式细胞仪检测其表面标志及细胞毒颗粒表达水平,并按效靶比5∶1、10∶1、20∶1加入HepG2细胞,比较其杀伤活性。结果:培养12d的NK细胞CD3~-CD56~+阳性率(73.6±11.3)%与培养前的阳性率(14.2±5.1)%相比有显著性差异(P<0.001),其穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达水平分别为(75.5±10.9)%、(62.2±8.9)%、(63.9±10.5)%。在5∶1～20∶1效靶比范围内,随着效靶比增加,NK对HEPG2细胞杀伤活性增强(P<0.05)。结论:NK细胞对肿瘤细胞具有杀伤活性,随着效靶比增加,杀伤活性增强。     

自体CIK联合rhIL-2对B细胞恶性淋巴瘤患者T细胞亚群及β2微球蛋白水平的影响

目的探讨自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)联合重组人白细胞介素(rh IL)-2对B细胞恶性淋巴瘤患者T细胞亚群及β2微球蛋白水平的影响。方法接受CIK联合rh IL-2治疗的46例B细胞恶性淋巴瘤患者为观察组,并选择同期未接受CIK联合IL-2治疗的46例B细胞恶性淋巴瘤患者为对照组。比较两组T细胞亚群、β2微球蛋白、生活质量及临床疗效。结果治疗后,观察组CD3~+、CD3~+/CD8~+、CD3~+/CD56~+水平均比同组治疗前及对照组高(P<0.05);β2微球蛋白比同组治疗前及对照组低(P<0.05);观察组临床疗效总缓解率高于对照组(P<0.05);观察组躯体功能、角色功能、认知功能、情绪功能、社会功能得分均比同组治疗前及对照组高(P<0.05)。结论在B细胞恶性淋巴瘤患者中应用自体CIK联合rh IL-2方案效果显著,可有效改善T细胞亚群和β2微球蛋白水平,提高生活质量,且安全性高。     

厄洛替尼联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肺腺癌的临床观察

目的探讨厄洛替尼(Erlotinib)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)生物免疫治疗晚期肺腺癌的临床效果。方法选取2013年1月至2014年2月间经病理学或细胞学检查确诊的一线治疗失败的100例晚期(ⅢB期~Ⅳ期)肺腺癌患者,随机分为试验组和对照组,每组50例。试验组患者采用厄洛替尼和CIK生物免疫治疗,对照组患者采用厄洛替尼单药治疗,评价两组患者无进展生存(PFS)时间和不良反应发生情况。结果试验组和对照组患者的PFS分别为6.3个月(95%CI:6.0~6.6)和4.4个月(95%CI:4.2~4.6),差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者的不良反应主要为皮疹和腹泻。试验组患者在CIK输注过程中有2例出现胸闷,5例出现乏力,6例出现发热。结论厄洛替尼联合CIK治疗晚期肺腺癌是一种安全有效的方法。     

大鼠自然杀伤细胞凝集素样受体Ly49s3

自然杀伤（NK）细胞是体内重要的免疫细胞，而其表面的活化性受体在其发挥相应生物学功能中扮演了关键的角色。其中Ly49s3是广泛表达在多种品系大鼠NK细胞上的杀伤凝集素样受体（KLR）家族的成员，由大鼠4号染色体NKC编码，可通过识别相应的MHC Ⅰ类分子，向NK细胞传导活化性信号，激活NK细胞发挥相应的生物学功能。     

The effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by lines SGC-7901 human γδT cell

Objective To explore the effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by human γδT cells. Methods Isopentenyl pyrophosphate method was used to amplify human peripheral blood γδT cells in vitro. Fufangkushen at various concentrations was used to induce γδT cells and gastric cancer cell lines SGC-7901 for 24 hours, MTr assays was used to detect inhibitory effect of Fufangkushen on these cell lines, LDH assays was used to measure the cytotoxic activity of γδT cells, and flow cytometry was used to detect apoptosis of γδT cells and SGC-7901 before and after the treatment. Results Ten days after cultivation, proliferation ra-tio of γδT cells increased from 4.21% to 70.35% and CD44 was up to 94.0%. Inhibitory rate of Fufangkush-en on SGC-7901 at various concentrations was significantly higher than that on γδT cells (22.3% vs-22.4%, P<0.05). The negative inhibitory ratio on γδT cells showed a dose-dependent manner with Fufangkushen's concentrations ranging from 1/5 to 1/400. γδT cells cytotoxic activity to SGC-7901 induced by Fufangkushen for 24 h was higher than control group, (83.6% vs 71.2%, P<0.05). Apoptotic rate was significantly lower in γδT cells than in SGC-7901 (4.64% vs49.23%, P<0.05). Conclusion Fufangkushen, within routine concentration ranges, can promote γδT cells' proliferation, inhibit tumor cell growth and enhance γδT cells' cytotoxic activity. This may be beneficial to tumor adoptive immunotherapy and provide evidence for the appli-cation of Fufangkushen in the treatment of tumors.     

调节性T细胞对DC-CIK细胞增殖和抗肿瘤活性的影响

目的研究调节性T细胞对外周血来源的DC-CIK细胞增殖及杀伤活性的影响。方法无菌分离外周血单个核细胞,体外诱导分化为DC-CIK细胞。实验分2组:DC-CIK组为常规单个核细胞诱导分化的DC-CIK;DCCIK-Tregdel组为培养前利用免疫磁珠分选去除CD4+CD25+T细胞的外周血单个核细胞诱导分化的DC-CIK。细胞扩增倍数法检测2组细胞的增殖能力;MTT法检测肿瘤细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测免疫表型;ELISA法检测细胞因子分泌水平。结果培养14 d的DC-CIK-Tregdel组细胞的扩增倍数高于DC-CIK组,并且CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞高于DC-CIK组(P<0.05);在5∶1、10∶1、20∶1效靶比范围内,培养14 d的DCCIK-Tregdel组细胞对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤率明显高于DC-CIK组(P<0.05),并且这种杀伤作用随着效靶比的增高而增强;DC-CIK-Tregdel组培养上清液TGF-β水平低于DC-CIK组,而IFN-γ分泌水平明显高于DC-CIK组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+T细胞对DC-CIK抗肿瘤效应细胞具有免疫抑制作用,去除CD4+CD25+T细胞能增加DC-CIK细胞增殖能力和抗肿瘤活性,为DC-CIK-Tregdel细胞有效治疗肿瘤提供了实验依据。     

宫颈癌患者T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞水平和病情的相关性

目的探讨宫颈癌患者T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞(NK细胞)水平和病情的相关性。方法选取226例宫颈癌患者,根据宫颈癌临床分期分为Ⅰ期组(52例)、Ⅱ期组(63例)、Ⅲ期组(57例)及Ⅳ期组(54例)四组。另选同期健康体检者60例女性作为对照组,使用流式细胞仪检测并比较上述各组T淋巴细胞亚群(CD_3~+、CD_3~+CD_4~+、CD_3~+CD_8~+、CD_3~+CD_4~+/CD_3~+CD_8~+)及NK细胞(CD_(16)~+CD_~(56)~+)水平。结果Ⅱ期组、Ⅲ期组及Ⅳ期组CD_3~+水平明显低于对照组和Ⅰ期组(P0.05),且随着分期的增加,CD_3~+水平逐渐降低(P0.05);Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组及Ⅳ期组CD_3~+CD_4~+、CD_3~+CD_4~+/CD_3~+CD_8~+水平明显低于对照组(P0.05),且随着分期的增加,CD_3~+CD_4~+、CD_3~+CD_4~+/CD_3~+CD_8~+水平逐渐降低(P0.05);Ⅱ期组、Ⅲ期组及Ⅳ期组CD_3~+CD_8~+水平明显高于对照组与Ⅰ期组(P0.05),且随着分期的增加,CD_3~+CD_8~+水平逐渐升高(P0.05)。Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组及Ⅳ期组CD_(16)~+CD_~(56)~+数量明显低于对照组(P0.05),且随着分期的增加,CD_(16)~+CD_~(56)~+数量逐渐降低(P0.05)。宫颈癌患者临床分期与CD_3~+、CD_3~+CD_4~+、CD_3~+CD_4~+/CD_3~+CD_8~+及CD_(16)~+CD_~(56)~+水平成负相关(P0.01),与CD_3~+CD_8~+成正相关(P0.01)。结论 T淋巴细胞亚群与NK细胞水平可反映宫颈癌患者的细胞免疫功能,宫颈癌临床分期越晚,细胞免疫功能越低。