陡脉冲电场对荷瘤BALB/c小鼠癌细胞杀伤效应的实验研究

观测陡脉冲电场对荷瘤BALB/c小鼠癌细胞的杀伤效应。处理后的癌细胞在光镜下表现为细胞核固缩、核碎裂、核溶解;在电镜下表现为异染色质增加,边集,呈团块样改变,细胞质肿胀,脂滴数量增加,质膜破裂;核固缩,碎裂,线粒体肿胀。实验揭示了陡脉冲电场能有效地杀伤癌细胞,明显抑制了荷瘤小鼠恶性肿瘤的生长、增殖,有着良好的应用前景。     

The effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by lines SGC-7901 human γδT cell

Objective To explore the effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by human γδT cells. Methods Isopentenyl pyrophosphate method was used to amplify human peripheral blood γδT cells in vitro. Fufangkushen at various concentrations was used to induce γδT cells and gastric cancer cell lines SGC-7901 for 24 hours, MTr assays was used to detect inhibitory effect of Fufangkushen on these cell lines, LDH assays was used to measure the cytotoxic activity of γδT cells, and flow cytometry was used to detect apoptosis of γδT cells and SGC-7901 before and after the treatment. Results Ten days after cultivation, proliferation ra-tio of γδT cells increased from 4.21% to 70.35% and CD44 was up to 94.0%. Inhibitory rate of Fufangkush-en on SGC-7901 at various concentrations was significantly higher than that on γδT cells (22.3% vs-22.4%, P<0.05). The negative inhibitory ratio on γδT cells showed a dose-dependent manner with Fufangkushen's concentrations ranging from 1/5 to 1/400. γδT cells cytotoxic activity to SGC-7901 induced by Fufangkushen for 24 h was higher than control group, (83.6% vs 71.2%, P<0.05). Apoptotic rate was significantly lower in γδT cells than in SGC-7901 (4.64% vs49.23%, P<0.05). Conclusion Fufangkushen, within routine concentration ranges, can promote γδT cells' proliferation, inhibit tumor cell growth and enhance γδT cells' cytotoxic activity. This may be beneficial to tumor adoptive immunotherapy and provide evidence for the appli-cation of Fufangkushen in the treatment of tumors.     

NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法:以近交系小鼠C57/6j(H-2^b)为供鼠、BALB/c(H-2^d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD₃₄^＋细胞计数和H-2K^b＋细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果:增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD₃₄^＋细胞恢复快、H-2K^b＋细胞表达水平高。结论:NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。     

抗原致敏DC与CIK共培养体外抗肾癌效应的研究

目的： 探讨肾癌(RCC)抗原致敏树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养后的DC-CIK细胞对RCC的杀伤活性。 方法： 将健康成人外周血单个核细胞（PBMC）来源的DC经RCC(786-0细胞株)抗原致敏后与同源CIK细胞共培养，实验分3组：RCC抗原致敏DC与CIK共培养组（A组），未致敏DC与CIK共培养组（B组），单纯CIK组（C组）。流式细胞仪检测DC及CIK免疫表型。MTT法检测3组效应细胞对786-0细胞杀伤活性。 结果： 效靶比 20∶1 时，A、B、C组对786-0细胞杀伤活性分别为（70.64±8.26）%、（53.40±7.33）%、（46.64±6.01）%，各组比较差异显著（P<0.05）；以前列腺癌PC3细胞作靶细胞对照，A组对786-0及PC3细胞的杀伤活性有显著差异（P<0.05）。 结论： RCC抗原致敏DC与CIK共培养后的DC-CIK细胞可明显提高CIK细胞对RCC的杀伤特异性和杀伤活性。     

人肿瘤细胞TH2类细胞因子的逆转与NK抗性变化的研究

目的研究促使人肿瘤细胞中ＴＨ２类细胞因子表达向ＴＨ０型的逆转及逆转后的肿瘤细胞对ＮＫ抗性的变化。方法首先用ＭＴＴ方法对悬浮培养的肿瘤细胞株ＤＢ大淋巴细胞瘤、Ｋａｒｐａｓ淋巴瘤、Ｍｉｃｈａｅｌ淋巴瘤、Ｒａｊｉ、ＨＬ６０和Ｋ５６２进行了ＮＫ杀伤敏感性的筛选。选择ＮＫ不敏感的Ｋａｒｐａｓ淋巴瘤和ＨＬ６０，用ｒｈＩＦＮγ、ｒｈＩＬ－１２和抗ＩＬ－１０ＭｃＡｂ经不同组合对其进行由ＴＨ２类细胞因子表达向ＴＨ１类细胞因子表达的促逆转研究，并观察促逆转后的肿瘤细胞对ＮＫ抗性的变化。结果ＲＴ－ＰＣＲ结果表明，经上述不同细胞因子组合诱导后，Ｋａｒｐａｓ淋巴瘤细胞均从表达ＴＨ２类细胞因子为主向ＴＨ０型逆转，并且各组逆转后的肿瘤细胞对ＮＫ的抗性均有不同程度的减弱。结论ＴＨ１类细胞因子（如ＩＦＮγ）、ＴＨ２类细胞因子拮抗剂（如ＩＬ－１０单抗）和ＩＬ－１２不同程度地促进肿瘤细胞表达的细胞因子由ＴＨ２型向ＴＨ０／ＴＨ１型逆转。促逆转后可以改善肿瘤细胞对机体杀伤作用的敏感性，提高抗肿瘤免疫能力     

CIK细胞临床应用技术规范探讨

 细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokin induced killer cells，CIK细胞）因具有体外增殖倍数高、抗瘤谱广、杀瘤活性强、副作用极小等特点而受到关注。研究表明，CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用是LAK细胞的100倍[1]。CIK细胞过继性免疫治疗是肿瘤治疗中的一项新技术，目前已逐步在临床上应用，因此，制订科学、严格的技术规范对该技术的正确使用及推广意义重大。但迄今国内还没有关于CIK细胞培养和临床应用的统一技术规范。无锡旺庄医院生物治疗中心参考国家食品药品监督管理局1999年制订的《新生物制品审批办法》和美国FDA 1998年制订的《人体细胞治疗和基因治疗指导原则》，结合数年的CIK细胞临床应用经验，制订出我们的CIK细胞临床应用技术规范，现介绍如下，供同行切磋和讨论，以期促成全国性统一技术规范的早日制定。     

慢性乙型肝炎患者外周血T细胞KIR表达研究

目的：检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法：采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞和CD8^high T细胞表面KIR分子表达，并与正常外周血比较。结果：慢性乙型肝炎患者外周血中CD8^high T细胞KIR表达明显高于对照组CD8^high T细胞。正常外周血CD4^＋T细胞几乎不表达KIR，慢性乙型肝炎患者外周血中CD4^＋T细胞表达KIR。结论：慢性乙型肝炎患者T细胞表面KIR表达明显增加。     

氧化苦参碱对LAK细胞活性的影响

ＬＡＫ细胞具有很强的广谱杀瘤作用，而氧化苦参碱具有较强的免疫抑制作用。本文研究了氧化苦参碱对ＬＡＫ细胞活力的影响，结果表明：氧化苦参碱可抑制ＩＬ－２对小鼠脾细胞的促增殖作用，并且对ＩＬ－２活化ＬＡＫ细胞杀伤Ｐ８１５的能力也有抑制作用。当ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）与２００μｇ／ｍｌ的氧化苦参碱共同孵育４ｄ后，可使ＬＡＫ细胞杀瘤能力（在效靶比为１００：１时）的８２．５％被抑制。同时氧化苦参碱本身对Ｐ８     

79例广东汉族人群HLA-Cw及其KIR分析

目的：了解HLA—Cw与相应刺激性KIR（杀伤细胞免疫球蛋白样受体）和抑制性KIR在广东汉族人群中的分布。方法：对79例广东汉族骨髓移植供者，以DNA技术检测HLA-Cw和KIR表型。根据对KIR识别的特异性，将HLA-Cw分为HLA-Cw^lys.HLA-Cw^asn，分析个体HLA-Cw与相应刺激性或抑制性KIR的识别情况。结果：本组人群中，HLA-Cw^lys、HLA-Cw^asn的频率分别为26．6％、97．5％。表达KIR2DL1而无栩应配体者62．0％，表达2DS1而无相应配体者15．1％。27．8％表达HLA-Cw^asn而不表达相应KIR。25．3％、55．6％有抑制性HLA-Cw^lys或HLA-Cw^asn配体受体对，1．3％和14．0％的个体单独表达刺激性HLA-Cw^lys扣或HLA-Cw^asn配体受体对。15．1％的个体表达KIR2DS1而不表达HLA-Cw^lys。结论：在广东汉族人群中，存在KIR表型与自身HIA表型分离现象。抑制性HIA-Cw-KIR配对表达高于刺激性配对，约1／5单独表达刺激性HLA-Cw—KIR配对。