氟伐他汀对大鼠肺间质纤维化及通气功能的影响

背景肺间质纤维化病理上可见以成纤维细胞(fibroblast,Fb)为主的大量间质细胞的增生及胶原分泌的增多,氟伐他汀对Fb等多种细胞具有增殖抑制作用.目的观察氟伐他汀对体外培养的大鼠肺Fb增殖的抑制作用和对博来霉素诱发的大鼠肺纤维化及肺通气功能的影响.单位解放军第四军医大学西京医院呼吸内科;解放军第四军医大学基础部病理学教研室;解放军第四军医大学西京医院骨科研究所.设计随机对照实验研究.材料本实验于200101/12在解放军第四军医大学西京医院呼吸内科实验室完成.实验选用健康雄性一级SD大鼠31只.干预取1只大鼠,摘取其肺组织,体外培养大鼠肺Fb,加入氟伐他汀,MTT法观察对培养细胞生长曲线的影响及不同浓度(0,1×10-7,1×10-6,1×10-5,1×10-4,1×10-3,1×10-2 mol/L,氟伐他汀0 mol/L为空白对照组)的氟伐他汀对培养细胞的抑制作用;计数法观察氟伐他汀对大鼠肺Fb分裂指数的影响;羟脯氨酸比色法检测氟伐他汀对培养的大鼠肺Fb胶原分泌的影响.随机将另30只大鼠分为正常对照组、博来霉素组及氟伐他汀组.氟伐他汀组根据治疗开始时间为模型制备后第1,15天和给药剂量为20,10 mg/kg(高、低剂量)分为4个治疗组第1天高、低剂量组,第15天高、低剂量组.28 d后处死动物,肺组织作HE、Masson和苦味酸天狼猩红染色,图像分析半定量测定并比较肺泡间隔Fb数量、肺泡间隔厚度、间质面积,肺组织匀浆测定组织胶原含量.主要观察指标氟伐他汀对体外培养的大鼠肺Fb生长曲线、分裂指数及培养上清液胶原含量的影响;氟伐他汀对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡间隔Fb数量、肺泡间隔厚度、间质面积、肺组织胶原含量的影响.结果氟伐他汀对体外培养的大鼠肺Fb具有明显抑制作用(t=4.20～17.52,P<0.01),并随着药物剂量的增大其抑制作用逐渐增强,呈剂量依赖效应,1×10-4mol/L的氟伐他汀已可使培养细胞的增殖受到完全抑制,自第2天起各时间点A490值与第1天比较,差异无显著性意义(P>0.05);细胞分裂指数、培养细胞的胶原分泌在氟伐他汀的作用下也有明显降低(t=8.037,P<0.01;t=3.99～10.84,P<0.05或P<0.01).博来霉素组在肺泡间隔Fb数量、肺泡间隔厚度、肺间质面积及肺组织胶原含量均高于对照组(t=4.62～11.93,P<0.01),氟伐他汀组各组以上各观察指标均不同程度低于博来霉素组(t=2.69～7.65,P<0.05～0.01);博来霉素组基质胶原及Ⅰ,Ⅲ型胶原分布较对照组明显增多,氟伐他汀治疗组各组均有不同程度的减少.结论氟伐他汀对体外培养的大鼠肺Fb的增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖效应;氟伐他汀对博来霉素诱发的大鼠肺纤维化具有显著的治疗作用,并且早期治疗较晚期效果更为明显.     

血管内皮细胞相关生长因子在高血压不同阶段心肌细胞和血管内皮细胞中的分布特征

目的:观察血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维生长因子在高血压不同阶段心肌细胞和血管内皮细胞的分布变化。方法:实验于2001-10/2002-06在承德医学院附属医院中心实验室完成。选用遗传性盐敏感型高血压大鼠(DahlS)和遗传性盐抵抗型高血压大鼠(DahlR),在5周龄投与8%食盐饲料,分别在10,11,12周时取材,制作心肌组织切片。应用免疫组织化学方法观察血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子在心肌组织中的表达变化情况,计算单位面积心肌组织血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子的阳性细胞数和血管内皮细胞的阳性表达。结果:血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子免疫细胞在DahlS和DahlR组大鼠的心肌细胞及血管内皮细胞中均有表达,DahlS组血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子阳性细胞数均较同时期DahlR组增多(P<0.01)。DahlS组自10周起至12周心肌细胞血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子阳性细胞数逐渐增多(P<0.01)。DahlR组在高血压不同时期血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子无显著性变化(P>0.05)。心肌组织的血管内皮细胞的表达强度,DahlS组血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子均由(+)到(),且均可见组织内毛细血管增多。DahlR组无变化。结论:血管内皮细胞生长因子和     

正常人成纤维细胞体外培养过程中β-半乳糖苷酶的变化

背景二倍体成纤维细胞常用于研究细胞水平的衰老,β-半乳糖苷酶是鉴别衰老细胞的标志酶,本实验拟观察正常人成纤维细胞在体外培养过程中β-半乳糖苷酶的变化情况.目的建立一个稳定的二倍体成纤维细胞体外培养体系,了解正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的变化规律.设计自身对照实验.单位潍坊医学院整形外科研究所、潍坊医学院附属医院普外科.材料实验于2000-09/2002-09在潍坊医学院整形外科研究所完成.实验样本来源于在潍坊医学院附属医院普外科行包皮环切术的6～8岁正常男性儿童(n=20)切除的健康包皮组织.方法①成纤维细胞培养取包皮组织,分离真皮和表皮,真皮部分用含100 mL/L胎牛血清DMEM培养液终止胰蛋白酶作用,再用200 U/mLⅠ型胶原酶37℃条件下消化30 min,收集细胞悬液,接种于培养皿中,细胞培养达80%汇合时进行传代培养.②细胞鉴定用相差显微镜观察细胞形态变化及生长增殖情况、透射电镜及抗vimentin免疫细胞化学染色.③细胞生物学行为的观察对比取生长状态良好的细胞,按群体倍增水平分为两组,第一组代表年轻细胞,采用10代龄;第二组代表老化细胞,采用65代龄.进行消化传代,分别按2×104,4×104分别接种于24孔培养板内.每隔24 h消化计数,每次每组计数3孔,计算均值.共记数8 d,以培养时间为横轴,细胞数为纵轴,绘制生长曲线并计算细胞的群体倍增时间.④β-半乳糖苷酶组化检测及阳性细胞的半定量分析成纤维细胞每5 n代龄(共13代)作细胞爬片,漂洗,加入SA-β-gal染色液,37℃孵育48 h.在显微镜下观察计数,蓝染细胞为阳性细胞,每次随机挑选视野计数500个细胞,得到阳性细胞百分率.主要观察指标①正常人成纤维细胞生物学行为的改变.②正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的表达.结果①正常人成纤维细胞生物学行为的改变细胞生长曲线显示,老化细胞生长速度较年轻细胞明显减慢.年轻细胞最大增殖数约为47.3×105,对数生长期在3.0～6.0 d,细胞倍增时间为2.18 d.老化细胞最大增殖数各为8.5×104,对数生长期分别在4.0～7.5 d,细胞群体倍增时间依次为3.86d.②正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的表达与年轻细胞组(阳性细胞率=4%)相比,衰老细胞组中阳性细胞率(60%)大为增强.直线相关分析结果显示,β-半乳糖苷酶染色的阳性率和细胞代龄之间呈显著正相关(r=0.92,P＜0.01).结论在正常人成纤维细胞从年轻向老化发展的过程中,细胞群体倍增时间呈增高的趋势;与年轻细胞相比较(占4%),β-半乳糖苷酶的表达在老化细胞中显著增强(占60%),且这种增强与细胞衰老表型的出现和细胞增殖能力的丧失相平行,可反应细胞的老化程度.本实验为建立成纤维细胞衰老模型提供了实验依据,同时也为老年学及肿瘤生物学甚至组织工程学发展提供科学依据.     

碱性成纤维细胞生长因子对培养的半月板纤维软骨细胞的促进增殖作用

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)对培养兔纤维软骨细胞增殖的影响，探讨其作用机制。方法：培养1月龄新西兰兔半月板纤维软骨细胞，以1，10，100μg／L的bFGF作用细胞，以四氮甲基唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况，并在10μg／L bFGF作用下，采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。结果：在1～100μg／L范围内bFGF对培养纤维软骨细胞的增殖均有促进作用，10μg／L bFGF即可有显著效果。实验组细胞周期较对照组明显缩短，DNA合成前期(G1期)，DNA合成期(S期)和分裂前期及分裂期(G2M)的时间分别为14．58，12．30，11．43h，对照组分别为22．77.17．90，20．62h。结论：bFGF对培养的半月板纤维软骨细胞增殖有促进作用，能缩短纤维软骨细胞DNA合成G1期及G2M期，从而缩短细胞周期、促进细胞分裂增殖。     

体外冲击波与成骨活性因子

体外冲击波疗法（extraeorporeal shock wave therapy．ESWT）目前已被广泛的用于骨缺损、骨不连、骨折延迟愈合、肩关节周围炎、高尔夫球肘、网球肘、弹响髋、跳跃膝、跟痛症及跖筋膜炎等的无创、非手术治疗。     

碱性成纤维细胞生长因子在人体脂肪移植中的应用

目的:碱性成纤维细胞生长因子可促进再血管化过程,有利于脂肪细胞的成活。观察碱性成纤维细胞生长因子在自体脂肪移植治疗面部凹陷畸形中的作用效果。方法:选择2001-11/2006-03于南昌大学第二附属医院整形美容科采用自体脂肪移植治疗面部凹陷畸形的患者60例,共73个部位,所有患者均排除器质性病变且知情同意。按随机数字表法分为2组,每组30例。取出的脂肪经过清洗、过滤备用。①碱性成纤维细胞生长因子组在要移植的脂肪中加入10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子和庆大霉素液,每100mL脂肪颗粒中加入庆大霉素8万单位及碱性成纤维细胞生长因子2万单位。②对照组只加入庆大霉素液不加碱性成纤维细胞生长因子。术后半年随访,观察一次注射后的治疗效果。评估标准:凹陷充填后丰满平坦,双侧对称满意者为优;凹陷充填后较丰满平坦,双侧基本对称较满意者为良。结果:①术后半年随访,本组60例患者均使凹陷部位得到不同改善,无一例发生感染、液化及干酪样坏死等并发症。②术后半年碱性成纤维细胞生长因子组优良率为87%,对照组优良率为57%,两组相比差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:碱性成纤维细胞生长因子可以促进人体移植脂肪的存活,改善面部凹陷畸形脂肪移植的术后效果。     

骨髓增生异常综合征患者血管新生相关因子血清水平研究

为了研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者血清血管内皮生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的水平,应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测43例MDS患者的血清。结果表明,MDS患者VEGF、bFGF血清水平均明显高于正常对照,RAEB、RAEBT组均明显高于RA、RAS组,RAEBT组与急性髓细胞白血病（AML）组VEGF、bFGF水平无显著差别。VEGF、bFGF水平与患者的外周血细胞受累、骨髓原始细胞比例有关,VEGF与bFGF正相关（r=0.539,P〈0.01）。结论：MDS患者VEGF、bFGF增多,其水平与MDS类型及预后有关。     

乳腺癌相关成纤维细胞miRNA表达的检测和分析

目的研究人乳腺癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF)miRNA表达的差异及其对CAF的生物学功能的影响。方法运用1型胶原酶消化法分别处理临床乳腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织标本,原代分离培养CAF和NF细胞;利用免疫荧光法和Western blot法分析CAF和NF细胞成纤维细胞分泌蛋白(FSP)的表达情况,对所分离培养的细胞进行纯度和特性鉴定;利用TranswellTM实验比较CAF与NF细胞的侵袭能力;利用miRNA芯片和芯片结果显著性差异(SAM)分析法分析CAF与NF细胞miRNA表达的差异;对差异miR-205和miR-221,在原代培养的CAF和NF进行实时定量PCR(qRT-PCR)验证;利用多种生物信息学软件预测差异miRNA的靶基因;利用DAVID软件对靶基因进行信号通路富集度分析。利用ELISA检测TGF-β和IL-6信号通路的核心蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2和MMP-9的表达差异。结果成功分离得到原代培养的CAF与NF细胞,纯度大于95%;与NF细胞相比,CAF细胞的侵袭能力明显增强;miRNA芯片分析结果显示,CAF有10个变化倍数1.5的异常表达miRNA(P0.05),其中3个上调表达(miR-221-5p、miR-31-3p、miR-221-3p),7个下调表达(miR-205、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-101、miR-342-3p、let-7g)。信号通路富集度分析发现,miRNA靶基因与细胞分化、细胞黏附、细胞迁移、细胞增殖、细胞分泌和细胞间相互作用等密切相关,其中,异常表达的miR-200b/c和miR-141等miRNA通过抑制其靶基因,影响TGF-β信号通路、IL-6信号通路,进而影响CAF的侵袭和转移。结论人乳腺癌微环境CAF的miRNA表达谱发生显著变化,CAF细胞中异常表达miRNA可能参与了NF向CAF的转化,并与CAF细胞的增殖、黏附、侵袭、转移有密切关系。     

高迁移率族蛋白-1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控作用

目的 探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFbs）的调控作用.方法 增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养HSFbs.通过细胞增殖、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、迁移和胶原网收缩实验检测不同浓度（0～200 ng/mL） HMGB1对HSFbs的影响.结果 1.56、3.13、6.25、12.50、25.00 ng/mL HMGB1呈剂量依赖方式刺激HSFbs的增殖,HMGB1对HSFbs Toll样受体4（TLR4）、α-滑肌肌动蛋白（α-SMA）、非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NMMⅡ）mRNA的表达有促进作用而对基质金属蛋白酶1-α （MMP1-α）无,HMGB1对HSFbs迁移及收缩有促进作用但可被TLR4阻断剂抑制.结论 HMGB1可能通过TLR4调控HSFbs而在增生性瘢痕的形成过程中起作用.     

促红细胞生成素抑制TGF-β诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖

目的 探讨促红细胞生成素在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖中的作用.方法 培养大鼠CFs.实验分为对照组(control)、TGF-β刺激组(TGF-β终浓度为5μg/L)和重组人促红细胞生成素(rhEPO,5 000 U/L)干预组:1h后加入TGF-β.24 h后计数细胞并采用MTT法观察细胞增殖;免疫细胞化学及Western blot法检测α-SMA表达,观察细胞转化;羟脯氨酸定量检测细胞胶原含量;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及MMP-2、MMP-9表达.结果 与对照组比较,TGF-β使细胞明显增殖(P＜0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成(P＜0.05)、α-SMA表达(P＜0.05)、细胞MMP-2、MMP-9表达增多(P＜0.05).使用重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预后,CFs增殖、α-SMA表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成较TGF-β组均显著降低(P＜0.05),MMP-2、MMP-9表达进一步增多(P＜0.05).结论 生理剂量EPO可抑制TGF-β诱导的大鼠CFs增殖、转化及胶原的合成,促进胶原降解.