诺如病毒酶联免疫检测试剂盒效果的研究

目的 比较RIDASCREEN Norovirus 3rdGeneration kit(R-biopham AG,darmstadt,Germany)(必发试剂盒)与IDEIA NLV kit(DAKOCytomation.,Ely,UK)(dako试剂盒)两试剂盒检测诺如病毒效果.方法 用此两种试剂盒以及RT-PGR方法 对长春和广州两地的308份腹泻患儿粪便标本各检测一遍.对RT-PCR阳性标本进行基因测序、序列对比以确定型别.结果 以RT-PCR方法 为金标准,必发试剂盒的灵敏度和特异度分别是96.10%和93.51%,阳性预测值和阴性预测值是83.14%和98.63%;dako试剂盒的灵敏度和特异度分别是95.83%和95.76%,阳性预测值和阴性预测值是87.34%和98.69%.结论 必发试剂盒因为具有满意的灵敏度和较好的特异度,应该成为ELLSA检测的首选.     

重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶的纯化及其动力学性质

目的纯化重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶（ＨＩＶ－１ＲＴ），筛选新的ＨＩＶ－１ＲＴ抑制剂。方法在适宜的培养条件下诱导工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９（ＰＫＲＴ２）可高效表达重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）逆转录酶（ＲＴ）。应用ＤＥＡＥ－纤维素和磷酸纤维素离子交换柱层析法从细菌裂解液中分离、纯化重组ＲＴ。结果１升细菌培养液可得到１．１ｍｇ产物。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示所纯化的重组ＲＴ为由两个分子量分别为６６ｋＤ和５１ｋＤ的亚基组成的杂二聚体。酶活性测定结果表明，经纯化的重组ＲＴ具有很高的逆转录酶活性（比活力为１．４×１０４ｕｍｇ）。结论本文通过对ＲＴ反应条件的研究，优化了ＲＴ反应系统，并测定了磷甲酸钠（ＰＦＡ）对重组ＲＴ的抑制效应，结果表明ＰＦＡ对重组ＲＴ的抑制反应动力学机制与天然ＲＴ相同，从而进一步说明用此法纯化的重组ＲＴ可直接用于抗ＨＩＶ药物的筛选与评价。     

Epstein-Barr病毒壳抗原gp125的纯化和应用

目的研制ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒诊断试剂。方法将重组痘苗病毒表达的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）主要多肽ｇｐ１２５纯化，作为诊断抗原建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测了４８份鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清及１０份正常人血清中的ＶＣＡ／ＩｇＡ抗体。结果该方法与免疫荧光（ＩＦ）检测结果一致，但ＥＬＩＳＡ的平均几何滴度（ＧＭＴ）是ＩＦ的１２倍。结论以纯化的ＥＢ病毒壳抗原主要多肽ｇｐ１２５作为诊断抗原建立的检测方法，更适合于ＥＢＶ相关疾病的血清学诊断和血清流行病学调查。     

原位PCR技术检测石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒DNA

应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测了２５例尸检畸形胎儿石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ及原位杂交（ＩＳＨ）进行了比较。ＩＳＰＣＲ、ＰＣＲ及ＩＳＨ检测阳性率分别为４４％，３６％及２０％。与ＩＳＨ相比较，ＩＳＰＣＲ不仅检出阳性率高，而且信号强度增强。研究结果提示，ＩＳ－ＰＣＲ是诊断ＨＣＭＶ感染的快速、敏感、特异的实用方法。     

孕妇巨细胞病毒感染对胎儿影响的前瞻性研究

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对沈阳市４５０名孕妇进行巨细胞病毒（ＣＭＶ）筛查，并前瞻性追查到其婴儿１００名ＣＭＶ感染状况。结果孕妇９７．１１％为既往感染，０．８９％为原发感染，１１．１１％为复发感染，仅２％为易感者。４５０例中感染组孕妇有畸形儿３例，流产３例，其胎儿感染率与致畸率明显高于对照组。１００例母婴检查结果：感染组孕妇所生先天性感染儿比对照组多１．４３倍（ＲＲ＝１．４３），感染组有２名低智儿，对照组无。本组早孕原发感染对胎儿危害最大，其宫内传播率为３３．３％。感染组孕妇９例感染儿中２例巨细胞包涵体病，７例无症状。为了早期诊断达到优生目的，对孕妇进行ＣＭＶ筛查是必要的，但筛查过程中发现有活动感染时处理要慎重，最好追查到羊水阳性时考虑终止妊娠。     

一氧化氮供体和他汀对B组柯萨奇病毒感染的实验研究

目的研究硝酸酯类和他汀类等一氧化氮（NO）供体的抗柯萨奇病毒B组3型（CVB3）的作用及其特点和机制。方法用TCID50和空斑形成实验测定CVB3的毒力；MTT法确定NO供体药物的无毒性浓度；利用细胞病变效应（CPE）抑制实验和空斑形成抑制实验分析NO供体药物对CVB3在HeLa细胞和ECV．304细胞中增殖的抑制作用；并分析硝酸甘油（GRIN）不同给药次数、NO浓度变化以及NO浓度与GTN对CVB3抑制效应间的相关性。结果硝酸酯类药物GTN、硝酸异山梨酯可明显抑制CVB3所致的CPE及空斑形成（P〈0．05），他汀类药辛伐他汀、洛伐他汀均未显示抑制CVB3所致的CPE（P〉0．05）；CVB3接种前预先与GTN作用、CVB3接种同时加入GTN两种条件下CPE抑制率差异无统计学意义（P〉0．05）；CVB3攻击后多次给予GTN的组间CPE抑制率差异无统计学意义（P〉0．05），但在CVB3攻击前不同时间点给予GTN的组间CPE抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）；NO浓度与不同时间点给予GrIN的CPE抑制结果呈正相关（r=0．97，P〈0．01）。结论NO供体类药物硝酸酯类具有明确的抗CVB3感染作用，其抗CVB3增殖的作用与NO浓度呈正相关；他汀类药物在本实验条件下未观察到抗CVB3增殖作用，原因可能是细胞类型与他汀不匹配。     

MHCⅡ类反式激活因子与病毒感染的关系

MHCⅡ类反式激活因子（ClassⅡ transactivator，CⅡTA）通过调控细胞是否表达MHCⅡ类分子及其水平而决定宿主是否对外来病毒感染产生免疫应答及其程度，从而影响病毒感染的发生、发展与转归。本文介绍了CⅡTA的结构与功能、IFNγ诱导MHCⅡ类基因表达的机制及CⅡTA分子与病毒间的相互作用。     

微生物学

0500672 HIV复制型痘苗病毒载体疫苗免疫原性分析，0500673 苦参素对HBsAg转基因小鼠血清Th1和Th2细胞因子水平的影响，0500674 肝癌高发区广西隆安县乙型肝炎病毒株全基因序列分析，0500675 我国广东、福建地区2000-2001年手足口病肠道病毒71型分离株的种系进化分析，0500676 贵州侗族、苗族和汉族人群乙型肝炎病毒基因型分布。     

一些病毒感染对宿主肥胖的影响

近年来,人类社会中肥胖者在不断增多。导致肥胖的病因很多,感染因素是一个易被忽视的病因,其中一些病毒感染对宿主肥胖具有明显的影响。本文就一些病毒对宿主肥胖的影响作一个概述。     

成年大鼠胰岛的体外基因转染

目的 探讨携带外源基因的慢病毒在体外有效感染胰岛及外源基因在胰岛中的表达，为通过移植前向胰岛细胞转入特定的免疫调节分子基因诱导胰岛移植物耐受奠定基础。方法 将目的基因CTLA4Ig导入慢病毒载体pWPTS，构建成pWPTS-CTLA4Ig载体。用磷酸钙沉淀法将pWPTS-EGFP、pWPTS-CTLA4Ig分别和其辅助载体pMD2．G、pCMVΔ8．92共转染293T细胞，收获病毒上清液，测定病毒滴度后感染新分离的胰岛。通过Western Blot测定胰岛培养上清液中CTLA4Ig蛋白的表达。结果 ①成功构建了携带CTLA4Ig基因的慢病毒载体pWPTS-CTLA4Ig；②包装产生的慢病毒Lenti-EGFP、Lenti-CTLA4Ig在体外可以感染胰岛，其中在Lenti-EGFP慢病毒感染的胰岛观察到了绿色荧光，及在Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛培养上清液中检测到了CTLA4Ig蛋白的表达。结论 慢病毒在体外可以有效感染大鼠胰岛，且携带的外源基因可以在胰岛细胞中稳定表达，其中Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛为进行胰岛移植并诱导体内特异的胰岛移植物耐受奠定了基础。