基于双链特异性核酸酶触发滚环扩增的microRNA-21太赫兹超材料传感方法的构建

目的:构建一种太赫兹(THz)超材料传感方法用于microRNA-21(miRNA-21)的信号放大检测。方法:首先构建THz超材料传感方法,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳及zeta电位验证方法的可行性;对传感器检测条件进行优化之后,对不同浓度的miRNA-21以及其他不同的miRNAs进行检测,并与其他microRNA检测方法进行比较;最后,对该传感器的回收率进行了评价。结果:在最优实验条件下,通过双链特异性核酸酶(DSN)循环识别与滚环扩增(RCA)的双重信号放大策略,该THz超材料传感器对靶标miRNA-21的响应范围为10 fmol/L至10 nmol/L,检测限为8.49 fmol/L。并且该传感器具有较好的特异性,具备了从多种miRNAs中识别靶标miRNA-21的能力,并且在商业化人血清样本中的回收率可达94.33%到115.33%。结论:该THz传感器可以实现靶标miRNA-21的高灵敏、高特异性检测,具备了在miRNA相关疾病无标记诊断与早期预警的潜力。     

喉癌中EGFR基因扩增、表达及临床意义

目的研究喉癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因的扩增、表达,探讨其在喉癌发生、发展中的作用及临床意义。方法采用差异PCR(differential PCR)方法检测40例喉鳞状细胞癌及配对癌旁正常组织中EGFR基因的扩增(即基因拷贝数增加);应用RT-PCR方法检测EGFR mRNA水平;应用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析。结果喉癌组织中有13例(占32.5%)EGFR基因拷贝数增加,癌旁对照组中则未检测到(χ2=15.537,P<0.005);喉癌组织中EGFR mRNA平均积分光密度为872.356±62.340,癌旁对照组为346.425±57.380(t=5.959,P<0.001);喉癌组织分化程度越低,病理分期越晚,EGFR基因扩增和mRNA表达水平越高(P<0.05)。结论喉癌中EGFR基因在DNA水平上的扩增是EGFR mRNA过表达的原因之一,EGFR的扩增和过表达在喉癌的发生、进展中发挥一定作用。     

造血干/祖细胞的体外扩增培养研究

利用旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel,RWV)体外培养脐带血干细胞,使其大量扩增,以满足临床应用对造血干/祖细胞的数量与质量要求。从脐带血分离得到的单个核细胞(Mononuclear cells,MNC)在T-flask中培养24h,之后接种到RWV反应器中,培养200h。每24h细胞计数,测量培养基的pH和渗透压变化;在144h和197h测CD34 细胞含量并做CFU-GM半固体培养。有核细胞(Nucleated cells,NC)与CD34 细胞在第197h,分别扩增了435.5±87.6倍和32.7±15.6倍,CFU-GM(Colony-forming unit-granulocyte/macrophage)细胞扩增了21.7±4.9倍。整个培养过程中,RWV反应器中的pH和渗透压都保持在造血细胞最佳的扩增条件内,pH基本保持在7.2~7.4之间,渗透压基本保持在290~310mmol/kg之间。由于旋转壁式生物反应器(RWV)结构上的特殊性,可以保证细胞在悬浮流动的状态下生长,很好地模拟了脐带中的造血微环境,使脐带血造血干细胞在该反应器中短期内得到大量扩增。     

HLA—DR4基因与类风湿关节炎的关联性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DR4基因与类风湿关节炎(RA)的关联性.方法采用特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对山东地区汉族人群132例类风湿关节炎患者及130例正常健康者的HLA-DR4基因进行分析,并测定其基因频率.结果 HLA-DR4基因在132例类风湿关节炎患者中的基因频率(46.2%)显著高于其在130例正常对照组中的基因频率(19.2%,x2=21.624,P＜0.01).结论 HLA-DR4基因与山东地区人群的类风湿关节炎易感性有关联.     

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的 探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法 将端粒重复旬扩增测定法（TRAP）与微孔板杂交相结合建立了非放射性检测方法。对3例正常肝组织和4例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织进行检测。结果 肝癌组织具有比较高的端粒酶活性,而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性,肝癌凋亡组织端粒酶活性显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强,可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。     

细胞因子组合对小鼠骨髓单核细胞的体外扩增作用

目的　了解细胞因子组合对小鼠骨髓单个核细胞的体外扩增作用。方法　采用SCF、IL 3、IL 6、GM CSF、G CSF和EPO等 6种细胞因子组合在体外扩增培养小鼠骨髓单个核细胞 5d后 ,收集培养细胞作体外半固体培养计数各不同阶段祖细胞数 ,并计数细胞总数 ,与未经扩增培养的细胞作比较以判断其扩增情况。结果　有核细胞总数扩增不显著 ,为 (1 .3 60± 0 .1 2 6)倍 ,但造血祖细胞却获得了明显扩增 ,其中CFU E达培养扩增前的 (7.0 4± 1 .2 6)倍 ,BFU E为 (4 .74± 1 .0 4)倍 ,CFU GM和CFU Cs则分别为 (1 .78± 0 .47)和 (1 .74± 0 .48)倍。由此可见 ,在此培养体系中以红系祖细胞的扩增最为显著。结论　小鼠骨髓单个核细胞在单纯细胞因子存在的扩增体系中具有一定的扩增其细胞总数和集落形成祖细胞数的能力 ,为进一步作体内实验判断其造血重建的功能奠定了理论基础。     

MIP-1β,TGF-β抗体对人基质细胞支持的脐血CD34~+细胞扩增的作用

目的　研究MIP 1 β ,TGF β抗体对人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞扩增的作用。方法　免疫磁珠法分选脐血中CD34 + 细胞 ,接种到预先照射的基质层上。分为 4组 :MIP 1 β( 30 0ng/ml)组 ,TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)组 ,MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)组和对照组 (不加细胞因子 )。第 5天半换液并加入MIP 1 β ,TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)和MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)。第 1 0天结束培养。第 5、1 0天收获细胞分别做细胞计数 ,集落培养法检测造血祖细胞数量 ,流式细胞术检测CD34 + 细胞数。结果　MIP 1 β组第 5、1 0天有核细胞数 ,造血祖细胞数 ,CD34 + 细胞数与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。TGF β抗体组 ( 2 0 μg/ml)及MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)组第 5天有核细胞数与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,第 1 0天有核细胞数与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。第 5、1 0天造血祖细胞数 ,CD34 + 细胞数与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　与对照组相比 ,MIP 1 β对人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞无明显的体外扩增作用。在TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)或MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)作用下 ,人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞可在 1 0d内扩增 1～ 3倍。MI     

一组癌基因扩增与胃癌生物学行为的相关分析

目的 :探讨癌基因HER2、mdm 2和C myc扩增与胃癌恶性程度、转移及预后的关系。 方法 :用差异竞争性多聚酶链反应检测胃癌原发灶、癌旁、转移淋巴结及远处脏器转移癌中HER2、mdm 2和C myc的基因变异。结果 :HER2扩增频率在近端胃癌组中明显高于远端胃癌组 (分别是 11/ 13和 5 / 19,P <0 .0 0 5 ) ,侵及浆膜组明显高于未侵及浆膜组 (12 / 18和 4/ 14,P <0 .0 5 )。mdm 2的扩增频率在转移淋巴结中高于胃原发癌 (12 / 2 1和 12 / 32 ,P>0 .0 5 ) ,在 3例淋巴结微转移灶中发现mdm 2扩增。C myc在胃癌原发灶及转移淋巴结中的扩增频率分别是6 / 32和 5 / 2 1,2例远处脏器转移癌中有扩增。结论 :HER2、mdm 2和C myc基因扩增与胃癌的快速生长有关 ,三者联合检测可能为判断胃癌恶性程度、转移及预后提供有价值的信息。     

随机扩增多态性DNA鉴定酵母菌的初步探讨

目的 :应用随机扩增多态性 DNA( RAPD)技术对临床上常见的酵母菌进行分析 ,以选择合适的引物和实验条件对酵母菌进行鉴定。方法 :选用四条长度为 10个碱基的随机引物分别对酵母菌、丝状真菌及细菌进行扩增 ,并对扩增结果进行相似性分析。结果 :所选三条引物可在种的水平上将所试菌株有效地区分开来 ,但同一引物对不同菌种的扩增结果存在明显的差异。在扩增同种内不同菌株时 ,各菌株间也存在着一定的差异。采用不同引物进行扩增时种内变异的程度有所不同。除个别菌株外 ,扩增所得指纹图型的种类差异远远小于不同的菌种间的差异 ,因而可将不同种的酵母菌有效地区分开来。结论 :RAPD技术可用于酵母菌的种间鉴定。其中引物及实验条件的选择尤为重要 ,同时 ,将多条引物扩增结果共同用于结果分析将有助于提高鉴定的可靠性     

金黄色葡萄球菌院内感染的基因型研究

目的:对第一军医大学珠江医院、广州军区总院和广州市第一人民医院1998年度的金黄色葡萄球菌院内感染株的DNA进行PCR反应研究。方法:利用随机引物PCR技术,建立了金黄色葡萄球菌的基因分型方法。结果:所有72株金黄色葡萄球菌院内感染株共分26个基因型,珠江医院30株分为11个基因型;广州市第一人民医院17株分为7个基因型,其中有上型分别同珠江医院和广州军区总院相同。结论:不同医院的菌株基因型有差别。