A型流感病毒HA（H1N1）基因真核表达载体的构建及序列分析

【目的】构建A型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)基因真核表达载体，研究其作为DNA疫苗的免疫效果。【方法】从流感病人体内分离流感病毒(A／Guangdong／376／2001／HlNl)，提取RNA，用特异引物进行RT-PCR，扩增HA基因，先将其克隆到pMDl8-T Vector，进行序列测定和分析；然后将HA基因亚克隆到真核表达载体(pCI-neo)，进行鉴定。【结果】获得一个核苷酸长度为l698bp的基因，编码565个氨基酸；同源性比较结果表明：和A／Hong Kong／113l／98((GenBank／NCBI：AF386775)有98％同源，序列分析表明有10个氨基酸出现变异；酶切和序列测定表明肌基因正确插入pCI-neo载体(HA-pCIN)。【结论】 HA基因真核表达载体的成功构建，可以进一步研究其免疫功能。     

日本血吸虫亲免素基因的扩增及序列分析

[目的]研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测.[方法]用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中扩增,以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(open readingframe,ORF);用生物信息学技术确认其是否为亲免素编码基因并进行结构功能的初步分析和预测.[结果]用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中获得了亲免素基因5'端和3'端所缺序列,得到的亲免素基因cDNA的总序列长为1 438 bp,其ORF长1 296 bp,编码431个氨基酸.利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫亲免素基因的完整cDNA序列.并用RT-PCR从日本血吸虫尾蚴mRNA扩增出亲免素基因的ORF.[结论]成功获得了日本血吸虫亲免素编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下了基础.     

弓形虫真核表达质粒pcDNA3/GRA1的构建及序列测定

目的 :构建弓形虫致密颗粒抗原 1 (GRA1 )真核表达质粒 ,为进一步开展DNA疫苗的保护性研究打下基础。方法 :采用PCR扩增出编码GRA1目的基因 ,用EcoRⅠ /XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切 ,将GRA1定向克隆到pcDNA3EcoRⅠ /XhoⅠ位点 ;对重组质粒进行PCR ,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果 :特异扩增出预计的GRA1片段 ,大小为 5 73bp ;扩增产物双酶切后成功连接到pcDNA3中 ,经PCR ,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有GRA1读框。结论 :成功构建弓形虫GRA1真核表达质粒。     

Fast-FLAIR序列在椎管内病变中的应用及价值

目的:探讨磁共振快速液体衰减翻转恢复脉冲序列(Fast-FLAIR)在椎管内疾病的诊断和鉴别诊断中的价值.方法:用2.0T超导磁共振仪对23例疑有椎管内病变的患者进行T1WI、T2WI和Fast-FLAIR扫描,5例患者进行了Gd-DTPA增强扫描.结果:脊髓肿瘤6例(髓内肿瘤1例,髓外硬膜下肿瘤5例),脊髓血管畸形2例,椎管内囊肿2例,脊髓局灶性水肿2例,白血病1例,脊髓炎症3例,脊髓空洞7例.Fast-FLAIR序列可以清晰的显示髓外病变范围,优于T2WI;显示髓内病变范围不如T2WI;对于椎管内病变的定性诊断有一定的优势,尤其是鉴别T2WI均为高信号的病变(脊髓炎症、空洞、水肿、肿瘤).结论:对于椎管内疾病诊断和鉴别诊断,Fast-FLAIR序列是一种非常有用的序列,特别是对T2WI为高信号的病变的定性诊断,应在MR检查时选择应用.     

大气细菌粒子浓度的时间分布特征及最佳采样时间的研究

用ＭＦ－４５型和ＨＴＫ－２０１型空气微生物采样器分别在北京、天津和沈阳三地观测了不同季节和一天中大气细菌粒子的浓度及其变化。结果表明：京、津二地春季大气细菌粒子浓度高，分别为２０５３个／ｍ３和２５５６个／ｍ３；夏季低，分别为９９５个／ｍ３和１０６４个／ｍ３。沈阳秋季大气细菌粒子浓度高，为１０１０８个／ｍ３；冬季低，为１２９４个／ｍ３。一天中，大气细菌粒子浓度呈双峰型变化，６：００～７：００和１８：００时大气细菌粒子浓度高，１１：００～１３：００和１：００～２：００时大气细菌粒子浓度低。根据大气细菌粒子浓度的季节变化和一天中大气细菌粒子浓度的时间分布特征，经过京、津、沈三地一天中分别１２次、８次、６次和４次不同采样时间组合的大气细菌粒子浓度的数理统计分析，大气细菌粒子浓度的监测拟集中在一年冬、春、夏、秋四季的中间月份，即１月、４月、７月、１０月进行；一天中采样８次的时间序列可为７：００、１０：００、１３：００、１６：００、１９：００、２２：００、１：００、４：００一天采样４次的时间序列可为５：００、１１：００、１７：００、２３：００。白天采样４次的时间序列可为春、秋季６：００、９：００、１２：００、１５：００?     

乙型肝炎病毒基因型分型方法的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）感染呈世界性分布。我国为HBV感染高发区，一般人群HBsAg阳性率9．7％。过去对HBV的血清型研究较多，曾认为血清型是基因型表达的表现型。事实上，d或y是由HBsAg的第122密码为赖氨酸或精氨酸所决定；W或r是由第160密码为赖氨酸或精氨酸决定，因而s基因核苷酸序列365和479任一A／G的点突变，均可以引起血清型的改变，     

唇腭裂的牙槽突裂植骨修复术

牙槽突植骨术是唇腭裂序列治疗的一个组成部分,对于恢复上颌牙弓的完整性,保证上颌牙齿的正常萌出,促进上颌骨的垂直向生长及颌骨的稳定性,矫正患侧鼻底塌陷畸形及修复唇侧口鼻腔瘘均有重大意义。总结了保证手术成功的关键,并认为植骨术前后应接受正畸治疗。8～11岁 X 线片示尖牙根形成2/3为最佳手术时间。     

生物信息学在病毒学研究中的应用

本文介绍生物信息学的基本概念、中心任务和研究目标，阐述了近几年来生物信息学在病毒学研究中发挥的主要作用，并对其今后的研究前景作了展望，同时提出了一些亟待解决的问题。     

肿瘤坏死因子新型免疫抑制剂的构建、表达和鉴定

目的 用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme，HEL)T辅助细胞表位序列替换hTNF-α3^ 末端序列，构建和表达hTNF-α新型免疫抑制剂。方法 将重组的hTNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定。结果 DNA测序分析表明，重组的hTNF-α HEL3^ 末端序列与设计序列完全相同。将其插入pBV220表达载体中，重组菌经42℃诱导4h做SDS-PAGE分析，结果 显示该免疫抑制剂获得了表达，Mt为17000，其表达量为菌体总蛋白量的30％。Western blot结果证实，该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应。对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化，获得的重组蛋白的纯度可达95％以上。对该蛋白的体外杀伤活性检测表明，该蛋白已完全丧失了TNF-α的体外杀伤活性。结论 上述实验结果证明，TNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功，该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性，为其下一步治疗作用的研究奠定了基础。     

TTV部分基因的克隆及序列测定

为了弄清萍乡地区ＴＴ病毒 (ＴＴＶ)感染情况 ,分析本地区ＴＴＶ株基因结构特点 ,我们对江西省萍乡地区 8例ＴＴ病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定。1　材料和方法1 1　材料　血清标本采用本地区流行病学调查和本院的临床阳性标本。Ｔ载体、ＸＬ1 Ｂｌｕｅ菌为美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品。Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰｓ及Ｔ4ＤＮＡ连接酶购自华美公司。ＰＣＲ试剂由中国军事医学科学院提供。1 2　引物合成　根据Ｏｋａｍｏｔｏ等报道的ＴＴＶ基因序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件在ＴＴＶＯＲＦ保守区设计两对套式引物 ,引物序列如下 :外…