螺旋体传染病

梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立和初步临床应用；钩端螺旋体病患的临床观察及护理；梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd在Hela细胞中的表达及鉴定；重组钩端螺旋体外膜蛋白酶联免疫吸附（ELISA）检测方法的建立；问号钩端螺旋体鞭毛相关基因flhA、flhB2和fliR的克隆及原核表达系统的构建；浙江省首次在蜱中检测到莱姆病螺旋体DNA片段。[编按]     

运用低密度表达谱芯片检测原发胶质母细胞瘤中相关基因表达

我们应用选取目前胶质瘤相关基因调节通路中的95个基因制成的低密度表达谱芯片（MFC）通过高通量实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术对胶质母细胞瘤中的基因表达进行分析，以期进一步阐明胶质母细胞瘤的发病机制，并希望能找到一种更简单、有效的能高通量检测肿瘤组织基因表达的方法。     

实时超声引导下胸腔积液穿刺在临床治疗中的应用

胸腔积液在临床上非常多见,实时B超引导下胸腔积液穿刺在临床治疗中应用广泛,且成功率高。我院自1997年至今利用超声对251例患者进行B超定位穿刺治疗,现仅总结部分病例报告如下     

用逆转录—聚合酶链反应法对类胰岛素生长因子cDNA的扩增

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法是将PCR方法与逆转录法结合应用,可快速高效地扩增某一基因的全cDNA。类胰岛素生长因子-I(IGF-I)在人染色体中只有一个基因,全长超过45kb,并有内含子,其cDNA却只有几百个bp,为了表达得到IGF-I,本文利用RT-PCR方法,从胎肝提出的混合mRNA中,筛选并扩增了IGF-I的cDNA。经过分子克隆与测序,证明不需制备胎肝cDNA库,即可快速获得IGF-I的cDNA。     

组织工程化表皮膜片构建及其在供皮区的应用研究

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于供皮区创面治疗。方法利用患者少量自体或同种异体正常皮肤分离、培养、扩增的表皮细胞,接种于壳聚糖明胶膜构建成表皮细胞膜片;将膜片移植于治疗组供皮区创面、适度加压,同时设立对照组:空白材料对照以及传统油纱布对照覆盖创面。于术后5～10d、30d、90d行大体观察、组织学检查、广谱角蛋白、外皮蛋白、层粘连蛋白、免疫组织化学检测以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值测定(偏光显微镜、RTPCR)。结果利用自体及异体表皮细胞和壳聚糖明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床供皮区创面治疗15例,经过3个月随访,疗效肯定。移植膜片创面愈合时间(8.1±1.3)d,空白材料对照区为(16.2±3.8)d,空白油纱布对照区为(23.0±5.8)d。移植膜片存活良好,结构较完整、术后30d及90d观察:12例无明显增生,3例有轻度增生(20.0%),而空白油纱布对照区11例遗留增生性瘢痕(74.4%,χ2=8.127,P<0.01)。结论表皮细胞-壳聚糖明胶膜片能促进供皮区创面早期愈合并减少后期瘢痕增生,具有良好治疗效果。     

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

目的:探讨胰腺癌与癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的改变及其蛋白表达的特点,以及其与胰腺癌发生发展的关系。方法:分别采用免疫组化SP法及甲基化特异PCR(MSP)检测46例人胰腺癌和癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平,并结合临床资料进行分析。结果:胰腺癌中p16蛋白表达率为41.3%(19/46),而癌旁组织表达率为95.7%(44/46),两者有差异显著性(P<0.01)。p16蛋白阳性的19例胰腺癌标本中均未检出基因甲基化;p16蛋白缺失的27例标本中有18例检出基因甲基化,甲基化率为39.1%。p16基因甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.05)。p16基因表达及其启动子区甲基化的发生率与胰腺癌的大小,患者性别﹑年龄的差异无显著意义(P>0.05),但与组织分化程度﹑淋巴结转移﹑PTNM分期有显著意义(P<0.05)。结论:p16基因启动子的异常甲基化可影响p16蛋白的表达,它们与胰腺癌的发生发展有关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。     

实时双平面超声心动图初步临床应用研究

目的　探讨实时双平面超声心动图的临床应用价值。方法　对 83例受检者进行实时双平面超声 (BP)检查 ,其中男 46例 ,女 3 7例 ,平均年龄 2 0 92± 19 16岁。正常人 10例 ,先天性心脏病 44例 ,心瓣膜病 2 6例 ,其他心脏病变3例。结果　实时双平面超声有助于理解心脏立体解剖 ;能通过有限的声窗获得更多的切面 ,并可显示常规经胸超声不易得到的切面 ;多切面显示心脏瓣膜及其病变 ,有利于获得瓣膜狭窄或关闭不全的最佳观察平面 ;多切面显示房、室间隔缺损 ,便于寻找缺损的最佳显示切面以及与毗邻结构的关系。房、室间隔缺损BP、2DE测值与手术测值均有良好相关性 ;室间隔缺损BP测值与手术测值无显著性差异 ;BP、2DE均有低估房间隔缺损大小的倾向。实时双平面超声能同时显示复杂先心病的多种解剖畸形 ,有利于确定房室连接 ;辨认主、肺动脉。结论　实时双平面超声有其独特的优势 ,可为心血管疾病的准确诊断提供更多的信息。     

Cloning and Subcloning of cDNA Coding for Group Ⅱ Allergen of Dermatophagoides Farinae

Objective: To clone, sequence and subclone the cDNA coding for group Ⅱ allergen of Dermatophagoidesfarinae(Der f2). Methods: The cDNA gene fragment of Der f2 was amplified by RT-PCR. After being purified, the gene fragment was cloned into a vector pMD-18T. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 was transformed into E. coli JM109. Positive clones were screened and identified by PCR and digested with restriction endonuclease, and the sequence of inserted Der f2 cDNA was also analyzed. Then Der f2 was subcloned into the vector of pET-32a( ). Results: The Der f2 cDNA was specifically amplified from RNA by RTPCR. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 and pET-32a( ),Der f2 was constructed and digested by SacⅠ and NotⅠ, and the size of gene fragment was 455bp and in accordance with the expected one. Conclusion: The pET-32a( )-Der f2 subclone was constructed successfully.     

瘢痕成纤维细胞中TGF-β受体与整合素相互作用的实验研究

目的:了解TGF-β受体和整合素在瘢痕增生和挛缩过程中的作用.方法:通过荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定经TGF-β受体、整合素和粘着斑激酶(FAK)抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞TGF-β受体以及整合素表达量的变化.结果:经不同抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞其TGF-β RI和整合素β 1的基因拷贝数均较阴性对照组有不同程度的下降(P＜0.05).结论:TGF-β受体和整合素介导的信号传导途径间可能存在着正反馈的效应,共同促进瘢痕的增生和挛缩.FAK是两条信号传导途径的交汇点和作用的中心环节.     

淋病的诊治及对抗生素的敏感性分析

进入20世纪80年代，我国早在60年代初就已消灭的性病开始蔓延，发病人数以淋病居多，以往青霉素是治疗淋病的有效药物，但近年青霉素耐药菌株的出现和流行给淋病的防治带来了困难。临床上由于延误治疗诊断也使病情加重。淋病诊断必须结合病史、临床症状以及实验室检查进行综合分析才能做出正确诊断，一些男性淋病患者仅有少量病原体，尤其是耐药多种抗生索的淋病双球菌，主要潜在后尿道皱襞及前列腺内等，这些病人以前尿道分泌物检查、培养等不易查出阳性结果，就是前列腺按摩液作淋球菌培养也难成功。而前列腺按摩液淋菌PCR扩增技术，通过体外扩增检测，靶基因成百倍地物异性扩增人们所需要的某段DNA片断，1小时即可将所需的DNA序列放大月百万倍，使患者得到正确诊断。