人精子体外氧化损伤对线粒体tRNA~(LeuUUR)基因的影响

目的:探讨活性氧(ROS)对人类精子线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。方法:采用Percoll梯度离心法筛选具有正常生理功能的精子,作为正常精子模型,并分为损伤组20例和对照组20例,分别加入次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系或不予处理,37℃有氧环境中孵育60min。分别提取精子DNA,以Fpg酶切损伤碱基并采用接头介导PCR(LM-PCR)检测线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。采用Rhodamine(Rh123)荧光探针标记精子,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位,观察精子的功能。结果:与对照组相比,损伤组精子孵育后线粒体膜电位明显降低[(116.27±11.72)%vs(64.00±4.88)%,P<0.05]。Fpg酶切和LM-PCR显示精子线粒体tRNALeuUUR基因损伤。结论:ROS可能通过对精子线粒体tRNALeuUUR基因氧化损伤而影响精子功能(线粒体膜电位明显降低),从而引起不育。     

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的临床应用

目的：研究结核分支杆菌耐利福平（RFP）分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR—SSCP）方法对355株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株109株，耐RFP或含耐RFP株246株）rpoB基因进行检测，并对其中17株耐药株用双氧末端终止法进行测序分析。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照，109株药物敏感株的rpoB基因均无突变，特异性100％；246株耐药株中，225株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性91．5％。17株耐药株（其中SSCP异常11株，正常6株）PCR扩增产物经测序证实，11株在531位密码子TCG-TTG，4株在526位密码子CAC-TAC，1株在516位密码子GAC—GTC，1株未改变。结论：rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制；其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸，应用PCR—SSCP技术可快速检测结核分支杆菌对RFP的耐药性。     

麻风病

20060098 建立巢式PCR和异源双链法检测石蜡标本麻风菌DDS耐药株；20060099 新发和复发麻风患中麻风菌的氨苯砜、利福平耐药基因的检测；20060100 甘肃省麻风病人血缘性与非血缘性亲属家庭发病的对比研究；……[编按]     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

.学者论坛·在动物实验中解决临床难题···························，·······································································……顾玉东(3)基因〕:程     

实时超声引导下显微手术切除脑深部病灶

目的探讨术中超声引导在脑深部病灶显微手术中的应用价值。方法自2004年开始我们在脑深部病灶显微手术中采用实时超声引导病灶定位,指引手术中皮层入路及路径的选择,并使用术中超声影像动态了解病变位置的变化情况、手术切除的范围,利用实时影像辅助判断病变切除程度。结果28例脑深部病灶,病灶直径为1.0～5.9cm,病理诊断包括蛛网膜囊肿5例,海绵状血管瘤2例,动静脉畸形2例,肿瘤7例,脑内血肿12例。所有病例均显微镜下全切,术后28例患者均恢复良好,神经功能保存良好,无新的神经功能损害,无手术并发症。结论术中超声引导是一种简便有效的脑深部病灶定位方法,操作简便,定位准确,能够实时指引手术路径和动态了解手术切除病灶的范围,与显微神经外科配合能够有效地避免额外的手术损伤,提高手术精度。     

慢性乙型肝炎患者基因型以及其病毒载量前C区突变的研究

乙型肝炎病毒是引起慢性病毒性肝炎的重要病原之一，并可导致肝硬化和肝癌发生，严重危害人类健康。根据HBV基因组DNA序列差异〉8％为判断标准，HBV被分为A-G八个基因型，而且其分布有地域性差异。基因型是影响病毒复制，抗病毒治疗疗效以及病毒变异的重要因素，基因型且与疾病的预后、治疗药物的选择等均有一定关系。作通过实时荧光定量PCT、多引物对巢式PCR技术和DNA序列分析，分别测定142例慢性乙肝患血清中HBV DNA的病毒载量、乙肝病毒的基因型以及其前C区（G1896A）突变，旨在探讨浙江部分地区的HBV基因型的分布情况以及各基因型之间的病毒及前C区的突变的差异。为以后选择抗病毒药物治疗打下理论基础；现报告如下。     

间期细胞原位PCR检测B细胞系恶性淋巴瘤

目的：应用原位PCR技术检测B细胞系恶性淋巴瘤。方法：采用免疫球蛋白重链（IgH)基因第三互补决定区（CDR－Ⅲ）的引物，dig-11-dUTP标记物，应用直接原位PCR技术检测Ⅲ-Ⅳ级恶性淋巴瘤的间期淋巴细胞，结果：在初诊的15例恶性淋巴瘤患中，12例检测到IgH基因重排；4例临床表现呈现淋巴瘤性白血病患，治疗后骨髓完全缓解，2例间期细胞原位PCR仍显示有IgH基因重排，6个月复发，结论：间期细胞原位PCR技术能敏感、准确地检测Ⅲ级以上的恶性淋巴瘤，并帮助预测复发，为一有效的基因诊断方法。     

应用荧光定量PCR技术检测淋球菌等性传播疾病病原微生物

在性传播疾病中 ,淋球菌 (ＮＧ) ,沙眼衣原体 (ＣＴ) ,解脲支原体 (ＵＵ)的感染较为常见。我们采用的ＰＣＲ方法结合了荧光探针的体外扩增和检测技术[1,2 ] ,不仅把假阳性率降低到最低限度 ,同时还保留了常规ＰＣＲ的高灵敏性和特异性。通过对人生殖道分泌物样本中以上 3种病原体ＤＮＡ的测定 ,检测了112 2例临床送检可疑标本 ,为上述 3种病原体感染的早期诊断以及性病高危人群的初筛等 ,提供了核酸水平上的参考依据。现报告如下。1　材料和方法1 1　材料1.1 1　标本来源及取材方法　　标本均由本院门诊妇科、皮肤性病科以及泌尿科等科室从…     

石家庄地区汉族人群DIS80(pMCT118)位点VNTR基因频率分布调查

本文采用ＰＣＲ技术对石家庄地区２１６名无关个体ＤＩＳ８０（ｐＭＣＴ１１８）位点扩增片段长度多态性的等位基因频率进行调查。ＰＣＲ扩增产物采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分型及溴化乙锭染色，共检出７０种基因型，２５个等位基因，其中以１８、２４、３０三个等位基因频率最高。将本文结果与日本人群在ＤＩＳ８０（ｐＭＣＴ１１８）位点多态性结果进行比较，石家庄地区汉族人群ＤＩＳ８０（ｐＭＣＴ１１８）位点基因频率分布符合ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律，该位点非父排除率为０．７１，个体识别率为０．９，杂合度为０．８５。     

套式PCR检测细菌16SrRNA基因

目的　应用套式PCR建立快速检查方法来检测血液中是否含有细菌。方法　采用细菌 1 6SrRNA基因通用引物 ,通过套式PCR方法对细菌进行扩增 ,并对其灵敏度、特异性作一评价。结果　临床常见细菌扩增反应为阳性 ,其他病原微生物及人类基因组DNA为阴性。结论　本法具有敏感、快速、特异、准确的优点 ,是一种可靠的实验手段