紫外线照射消除PCR技术外源性DNA污染

聚合酶链反应（PCR）最大优点是高度灵敏性，但也极易网微量污染而产生假阳性，因此，避免和消除污染已引起人们的重视(1)。我们采用紫外线照射法与传统的消毒方法进行比较，证实紫外线照射法可有效避免外源性DNA污染引起的假阳性，并指出传统的消毒方法，不能有效避免污染的发生。1材料和方法1.1污染标本的制作模板DNA阳性对照及1：32滴度HBSAg阳性血清进行不同浓度的稀释，取3PI加入PCR测定管，自然晾干。1．2仪器和试剂480型DNA扩增仪（由美国PE公司生产），乙肝病毒PCR试剂盒（由西安拜奥医用生物工程公司提供），“84”消毒…     

缺失型DMD／BMD患者PCR快速检测的可行性与意义

应用对应于Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因缺失热区的二对ＰＣＲ引物和一对内对照无关引物，在同一反应体系中扩增，检测６６例ＤＭＤ／ＢＭＤ患者。发现其中２５例存在１７号或４９号外显子缺失，与同时采用ｃＤＮＡ探针杂交检测出的３５例基因缺失相比．检出率达７１．４％。说明该扩增系统能够作为快速筛查缺失型ＤＭＤ／ＢＭＤ患者的有效手段。这对指导合理选用探针，尤其在产前诊断方面，具有重要意义。     

用PCR—RFLP和16SrDNA指纹图法分析幽门螺杆菌基因型

本文建立了PCR－RFLP和16srDNA指纹图法．对19株幽门螺杆菌（HP）进行基因型分析：HP尿素酶C基因的PCR扩增产物．分别用HindⅢ、HaeⅢ、AluⅠ酶切，结果显示：每个酶均将19株HP分为3种RFLP图谱．综合HindⅢ，HaeⅢ和AluⅠ酶切结果，19株HP分为10个酶切带型；PCR扩增HP标准株16SrRNA基因，地高辛标记制备550bp探针，19株HPDNA分别经HaeⅢ和EcoRⅠ酶切、电泳后，通过Southern杂交获16SrDNA指纹图，结果显示：HaeⅢ酶切分为14个杂交带型，EcoRⅠ酶切19株HP杂交带型均不同。本实验表明：上述两种方法重复性好，分群力高，可准确有效地对HP作出鉴定并将其分型。19株HP株间存在基因型差异。     

PCR定性检测转基因大豆的探讨

目的应用定性PCR方法检测大豆中转基因成分。方法以大豆凝集素（lection）基因为内源参照基因，设计合适引物，对转基因植物中常用的CaMV 35S启动子进行PCR扩增。结果在转基因大豆中扩增出195bp的CaMV 35S启动子片断。结论定性PCR技术是进行转基因食品检测的有效手段。     

4666例妇女PCR检测HPV感染结果分析

目的:了解宫颈炎、宫颈及外阴赘生物、外阴疣等患者HPV感染的状况。方法:提取患者宫颈分泌物及脱落细胞、赘生物脱落细胞,用荧光定量PCR方法对提取物进行HPV6/11、HPV16/18检测。结果:4 666例患者中HPV感染率为25.50%;1 808例宫颈炎患者中HPV16/18型阳性率为13.38%;2 858例宫颈或外阴赘生物、外阴疣患者HPV6/11型阳性率为33.17%;228例同时接受了HPV6/11和HPV16/18型检测的患者中,有28例同时感染低危型及高危型乳头瘤病毒,占受检者的12.28%。结论:HPV在女性生殖道有较高的感染率,不同型别的乳头瘤病毒感染可导致不同的病变,HPV是影响女性生殖健康的重要危险因素;宫颈癌的年轻化与HPV感染低年龄段高感染率有密切关系;加强生殖健康宣传教育,提高性保健综合服务水平任重而道远。     

Kringle 5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建

目的：构建含有目的基因kring5的真核植物细胞穿酸表达载体。方法：应用RT－PCR方法，从正常人肝脏组织中获得kringle5基因，测序后，再通过DNA重组技术，将kringle5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI121和pCAMBIA3301上。结果：得到的kringle5基因序列测定结果与文献相符，重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确，含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论：重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制，而且可以在植物细胞中表达。     

Whole CanA Gene Amplification of Helicobacter pylori and Its Fingerprinting by Restriction Fragment Length Polymorphism

To set up a method of amplification for the whole CagA gene of Helicobacter pylori and its fingerprinting by restriction fragment length polymorphism(RFLP),nested PCR was employed in combination with TD-PCR to amplify the gene and EcoRI and Hind Ⅲ were used to generate the RFLP fingerprinting.Target DNA fragments from 13 of 20 samples were successfully amplified and the relevant RFLP fingerprintings were obtained.It is concluded that the method can be used to amplify the whole CagA gene and CagA gene has apparent diversity of RFLP profile.     

PCR微板杂交检测生殖器疱疹病毒感染

以 PCR扩增生殖器疱疹病毒 DNA,然后用特异性 DNA探针微孔板检测疱疹病毒扩增产物 ,同时用普通 PCR检测同样的标本。结果 4 3例病例组中 ,PCR微板杂交 35 (83% )例阳性 ,8例 (17% )阴性 ;普通 PCR37(86 % )例阳性 ,6 (14 % )例阴性 ,二者无显著性差异 ;对照组 PCR微板杂交 19例 2例阳性 ,17例阴性。同时 ,普通 PCR则有 5例阳性 ,14例阴性。PCR微板杂交具有快速、灵敏度高、特异性强、抗污染能力强的优点 ,适用于检测可疑 HSV感染 ,具有临床使用价值     

PCR法检测淋球菌中引物的选择

近年来,国内已有多篇关于用ＰＣＲ法检测淋球菌的报道[1～4]。多数作者认为ＰＣＲ法具有灵敏、特异和快速的优点,比传统的涂片法和培养法检测淋球菌的阳性率高,建议推广应用。也有作者认为ＰＣＲ法可受多种因素影响,由于敏感性极高,易出现假阳性,不能作为确诊淋病的依据。我们认为各种客观影响因素是可以克服的,关键问题在于ＰＣＲ引物的优劣。一些作者均未对所用引物作详细介绍和讨论。本文就ＰＣＲ引物的选择作一介绍。材料和方法一、受试细菌　受测试的淋球菌共51株,其中包括2株标准参考株(76061782,Ｆ29),28株冻干储存株,21株临床分离株…     

SARS病毒基因检测结果与患者病情、病程和体液免疫的关系研究

目的:研究严重急性呼吸综合征患者的病情、病程和特异性抗体产生对SARS病毒基因阳性检出率的影响.方法:采用巢式反转录PCR检测健康人,发烧非SARS患者,不同时期和不同病情SARS患者以及存不存在特异性抗体的SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA.结果:巢式RT-PCR检测SARS患者痰标本中的SARS病毒RNA的敏感度为60.0 %.6 d～10 d组阳性检出率最高,为100 %,高于11 d～25 d组,而11 d～25 d组的阳性检出率又高于＞25 d组(P＜0.01);病情轻组比病情重组的阳性检出率高(P＜0.05);抗体阴性组比抗体阳性组检出率高(P＜0.05).结论:SARS病毒基因检测阳性率在轻病情组比重病情组高,住院时间短组比住院时间长组高,血清特异性抗体阴性组比阳性组高.