基因芯片技术在药物研究中的应用

基因芯片技术是近年来利用生物遗传规则，根据体内核酸中碱基配对、转录原理发展起来的一项新的生物检测技术，具有快速、高通量、灵敏度高、精确性高等特点。     

老年大鼠下丘脑—垂体—肾上腺—胸腺轴基因表连谱的研究

目的 阐明衰老时HPAT轴基因表连规律，探索神经内分泌和免疫衰老的分子机制。方法利用基因芯片技术研究老年大鼠与青年大鼠下丘-垂体-肾上腺-胸腺轴差异表达的基因。结果老年大鼠下丘脑多种神经透质或其受髓如GABA—AR、a1ER、GluR、dopamine transporter表达下调；垂体多往促性腺激素包括FSH、LH、GnRH下调；生长激素和生长激素释放因子受体下调；脾淋巴细胞促凋亡基因Caspasel、Caspase3、CPP32β、Dnaseγ、PKC delta、Bnip31、p47上调，抗凋亡基因Cathepsin B、MTA1下调，抗增殖基因Rb、B181表达上调，促增殖基因Jagged1及c-myc、c—fos、v—jun、Rgc32、CyclinB1、CyclinG—associatetl kinase下调。结论 衰老时HPAT轴的衰退以下丘脑-垂体-性腺轴、下丘脑-垂体-生长激素轴、免疫系统受损最为明显，神经透质、生长激素、促性腺激素基因低表达及免疫细胞促凋亡基因高表达而抗凋亡基因低表达，促增殖基因低表达而抗增殖基因高表达是受损的分子机制。     

基因芯片技术及其在眼科领域中的应用

基因芯片技术是研究基因表达和功能的一项革命性的新技术，具有敏感和高通量的特点。目前已广泛应用于生命科学的各个领域，包括正常发育过程的基因调控及人类疾病的分子机制等研究。然而基因芯片技术本身仍处于完善过程中。现将基因芯片技术学作简要介绍，以帮助读者全面了解该技术的现状和存在的问题，以便正确运用该技术，准确评估应用该技术产生的数据和结果。 （中华眼底病杂志，2003，19：201-268）     

基因芯片检测宫颈癌石蜡标本HPV感染的临床意义

目的探讨用基因芯片检测宫颈癌石蜡标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的可行性和临床意义。方法收集2005年5月-2007年2月在解放军总医院住院的宫颈癌患者的石蜡组织标本48例,其中鳞癌37例,腺癌11例。从组织中提取DNA后,应用基因芯片检测23种HPV亚型,即PCR扩增后产物在基因芯片上进行杂交。结果基因芯片检测出44例宫颈癌有高危型HPV感染,感染率为91.7%(44/48),其中宫颈鳞癌的感染率为94.6%(35/37),宫颈腺癌的感染率为81.8%(9/11)。单一感染33例,占75.0%(33/44);混合感染11例,其中双重感染9例,多重感染2例,分别占20.5%(9/44)和4.6%(2/44)。基因芯片检测出的主要致病亚型为HPV16,占90.9%(40/44);HPV18为第二致病亚型,占27.3%(12/44);HPV52、33、59、68等致病亚型较少见。35例宫颈鳞癌HPV感染患者中,HPV16亚型感染率为91.4%(32/35),HPV18亚型感染率为22.9%(8/35);9例宫颈腺癌中,HPV16亚型感染率为88.9%(8/9),HPV18亚型占44.4%(4/9)。结论基因芯片可检测出多种HPV亚型,特异性强,敏感性高,对宫颈癌致病机制的研究及其预防具有重要意义。     

百草枯致小鼠肺泡上皮细胞损伤过程中microRNA表达谱分析

目的 研究百草枯(PQ)致小鼠肺泡上皮细胞损伤过程中microRNA(miRNA)表达谱的变化,并预测差异表达的miRNA靶基因和相关的生物学功能.方法 体外培养小鼠肺泡上皮细胞系MLE12细胞,加入不同浓度的PQ,通过CCK-8方法检测细胞活力以及流式细胞术检测细胞凋亡率,最终选择100μ MPQ作为合适的实验浓度....     

食管癌细胞株TE-1 microRNA表达谱研究

目的 研究食管癌细胞株TE-1的微小核糖核酸(miRNAs)表达谱,为食管癌的早期诊断提供参考依据。方法 常规方法培养食管癌细胞TE-1和正常细胞HET-1A,提取其总RNA,经Cy3荧光标记后进行片段化、芯片杂交,应用扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用软件对扫描图像进行数字化处理和分析,筛选出差异表达miRNA;挑选芯片检测中上调和下调最明显的miRNA各5条,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测予以验证。结果 筛选出差异表达的miRNA 676条,其中113条差异均有统计学意义(均P<0.05),包括76条上调表达和37条下调表达;挑选差异显著且信号强度较高的10条miRNA进行荧光定量RT-PCR检测,其结果与芯片检测一致。结论 采用基因芯片方法筛选到食管癌细胞株TE-1与正常细胞株HET-1A差异表达的miRNAs,为进一步寻找新的食管癌分子标志物奠定基础。     

基因芯片分析Wnt刺激后小鼠多潜能分化干细胞C3H10T1/2的差异基因表达

目的 探讨Wnt信号传导系统对诱导干细胞向神经系统分化的基因表达的影响.方法 采用最新的含有22000多个已知基因及EST克隆的小鼠基因芯片U74Av2,检测了Wnt刺激后的小鼠多潜能分化干细胞C3H10T1/2中目标基因表达的变化,并进行实时定量PCR,验证了基因芯片结果.结果 Wnt刺激后小鼠多潜能分化干细胞C3H10T1/2中Wnt信号传导系统各主要组成基因表达有不同程度增加;对干细胞向神经系统发育有潜在调节作用的基因表达也有增加或减少.结论 表达谱芯片分析成功筛选出wnt刺激引起表达改变且可能与神经发生有关的基因.     

Ⅲ型胶原α链基因mRNA的表达与舌苔形成的关系研究

目的研究Ⅲ型胶原α链基因表达水平与舌苔形成之间的关系。方法应用基因芯片技术和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测Ⅲ型胶原α链在不同舌苔中的表达水平。结果基因芯片显示,常见舌苔中Ⅲ型胶原α链表达水平差异有统计学意义;实时荧光定量PCR证实从高到低依次为：黄厚苔〉白薄苔〉白厚苔〉无苔〉黄薄苔〉胎儿白薄苔。结论常见舌苔中,Ⅲ型胶原α链表达水平有差异,提示Ⅲ型胶原α链基因表达水平的调控在舌苔形成过程中可能有一定的意义。     

参苓白术散对急性鼻窦炎模型大鼠黏膜影响的相关生物分子机制研究

目的:基因芯片技术分析参苓白术散对急性鼻窦炎模型大鼠黏膜相关生物分子的影响,探讨治疗急性鼻窦炎的生物学分子机制。方法:SD大鼠随机分为空白组(不做任何处理)、对照组(构建急性鼻窦炎大鼠模型)、实验组(对照组基础上灌服参苓白术散1周,并分为低剂量、中剂量、高剂量组3个亚组)。处死大鼠,取鼻黏膜组织,基因芯片、酶链免疫、免疫组化技术检测各组大鼠差异表达基因谱及部分细胞因子的变化。结果:空白组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组中符合标准差异表达基因共有754个基因、269条通路改变;与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组表达上调基因分别为161、187、188个,下调基因分别为64、66、88个。低剂量组、中剂量组、高剂量组差异基因分别涉及84、102、105条通路改变,主要为p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,各通路存在相同和不同表达基因,在同一通路中,表达的基因条数也不同。低剂量组、中剂量组、高剂量组p-p38、p38、p-MAPK、MAPK、IL-9、IL-10、TNF-α比较,有一定差异。结论:参苓白术散通过系统调控p38MAPK信号传导通路抑制炎症,可有效治疗急性鼻窦炎;不同剂量的参苓白术散治疗鼻窦炎具有相似的实验效果,提示该机制具有较强较广的调控作用,为鼻窦炎治疗提供了新思路。     

口腔扁平苔藓基因表达谱中差异表达基因初步探讨

目的筛选口腔扁平苔藓组织中的差异表达基因,并对其进行功能分类。方法用4 000种人类基因多聚酶链反应产物制成BiostarH- 40s型表达谱芯片,分离纯化正常口腔黏膜组织和口腔扁平苔藓病变组织mRNA,制备表达谱探针,用ScanArray 4000 荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,分析正常口腔黏膜组织和口腔扁平苔藓组织之间差异表达的基因。结果1）在4 000条基因中,有213条基因表达差异,其中122条基因表达上调,91条基因表达下调。2）在表达上调基因中,功能分类主要包括免疫相关基因、代谢相关基因、癌基因、细胞因子、细胞信号和传递蛋白。3）在表达下调基因中,功能分类主要包括DNA结合、转录和转录因子、细胞信号和传递蛋白、免疫相关基因、细胞因子、代谢相关基因。结论口腔扁平苔藓的发生、发展过程中存在着多条不同功能基因表达调控的改变。