PCR检测淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒的核酸分析

目的了解凯里地区泌尿生殖系统的感染者及其淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(Uu)、人类乳头瘤病毒(HPV)的感染和流行情况.方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,对2572例来我院门诊、住院病人怀疑泌尿生殖系统感染取分泌物为样品检测.对几种病原体的单独和混合感染作统计分析.结果NG、CT、Uu和HPV阳性率分别为18.6%(224/1207)、23.8%(195/819)、15.1%(66/436)和7.3%,男性混合感染14.8%,女性8.9%.结果本地区几种病原体的发病率及其流行情况对今后防治病原体的传播有重要意义.     

间歇性气囊挤压大鼠腿部对挤压部位和远端骨骼肌一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:为了进一步了解间歇性气囊挤压法(Intermittent pneumatic compression, IPC)挤压大鼠腿部与一氧化氮(NO)的关系.方法:检测了大鼠骨骼肌中3种一氧化氮合酶(NOS)同工酶:神经型NOS(nNOS);诱导型NOS(iNOS)和内皮细胞型NOS(eNOS)mRNA在IPC作用后的表达变化.25只SD大鼠被随机分为3个模拟实验组和4个IPC实验组.每只鼠取右侧胫前肌(AT)和提睾肌(CM)作为正常对照.IPC组挤压0.5,1,和5h,及挤压5h加等待4h,模拟实验组除不挤压外,其他操作均与实验组相同,然后分离左侧AT和CM作为处理后样品.所有样品应用RT-PCR进行NOS mRNA测定.以样品中看家基因2,3-二羟基丙醛-3-磷酸脱氢酶(GAPHD)cDNA为内参,与NOS cDNA 共同扩增.PCR产物电泳条带密度用NIH图像分析软件定量,并以与正常对照的对比值作为变化比率.结果:在IPC作用0.5、1和5h后,eNOS mRNA显著上升,在AT中分别达到正常对照的1.2,1.8和2.6倍;在CM中分别达到1.2,1.8和2.7倍,而其他NOS,除5hIPC组的nNOS外,总体表现下调.在IPC作用1h加等待4h组中,eNOS mRNA回复至正常对照水平.结论:该结果证实了IPC产生的机械压力至少部分增加了血管壁的剪切压,使内皮细胞增加了NO产物的释放量,导致了挤压部位及远端肌肉的血管扩张和改善了微循环.     

陕西株庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV )RNA NS3区 cDNA(4248nt～4465nt)的扩增、克隆和序列分析

目的　了解陕西株庚型肝炎病毒 (HGV,RNA/ GBV-C)的核苷酸序列特点 .方法　从陕西省西安市两位非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎患者的血清中 ,应用反转录及套式 PCR技术 ,从血清中提取 RNA,经特异性的反转录引物 P4反转录成c DNA,以此为模板分别用 P3,P4及 P1 ,P2 两对引物进行PCR扩增 ,扩增到 2 18bp的 HGV RNA NS3区部分基因 ,将其克隆入 Pin Point TMXal- T载体 ,挑选阳性克隆并进行了序列分析 .结果　 SG2 与 HGV的核苷酸同源性分别为 85 .6 4%与84.48% ;与 GBV- C的核苷酸同源性为 86 .2 1%与 84.48% ,其二者之间同源性为 97.13% ;二者与 HGV的氨基酸同源性分别为 98.2 8%和 93.10 % ,与 GBV- C的氨基酸同源性也为98.2 8% ,93.10 % ,二者之间的氨基酸同源性达 94.83% .结论　庚型肝炎病毒 NS3区核苷酸同源性较高 ,同义突变率也较高 ,可能是一个对其生存环境较为适应的病毒 .     

E.coli产Ampli Taq DNA聚合酶的分离纯化

将含有Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶基因的Ｅ．ｃｏｌｉ经发酵,细胞培养液经破壁裂解,粗蛋白抽提Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ－ｓ－１００,ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ５０柱层析等纯化步骤,可获得电泳纯的重组Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶,用于科研和检测工作。     

聚合酶链反应检测细菌16S rRNA基因

根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性,设计合成所有细菌、革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌１３株,三对引物分别扩增的阳性率为１００％,倍比稀释法能检出细菌的最低浓度为４ＣＦＵ·ｍｌ－１,同时检测临床样本４０份,阳性率为６７５％（２７／４０）,同期细菌培养阳性率为４５％（１８／４０）,二者比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结果提示聚合酶链反应检测细菌１６ＳｒＲＮＡ基因具有高度的特异性和敏感性。     

急性非淋巴细胞白血病中MGMT与p53基因突变的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因ｐ５３、ＭＧＭＴ在急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中的改变。方法 用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对３１例ＡＮＬＬ患者、２２例正常人ｐ５３基因第５、６、７、８外显子和ＭＧＭＴ基因第１、４外显子进行突变分析。结果 ３１例ＡＮＬＬ中５例存在ｐ５３基因突变、４例存在ＭＧＭＴ基因突变,其中２例ｐ５３与ＭＧＭＴ同时发生突变。结论 ｐ５３基因突变在白血病发生中起一定     

结核分枝杆菌实验室诊断3种方法的初步评价

目的　探讨传统检验方法和聚合酶链反应 (PCR)技术在诊断结核病中的价值。方法　采用抗酸染色 ,细菌培养和PCR技术 ,用 3种方法同时测定 62份临床标本。结果　抗酸染色镜检法阳性率为 2 9.0 % ,细菌培养阳性率为 2 7.4% ,PCR法阳性率为 5 1.6%。结论　传统检验方法阳性率低 ,但特异性好 ,PCR法阳性率高 ,存在一定假阳性与假阴性结果 ,只有传统方法和PCR法同时检测 ,才能提高准确率     

病毒性脑炎的研究进展

病毒性脑炎是儿童常见的中枢神经系统感染性疾病，全世纪报道的病毒性脑炎正呈现新的流行趋势。新发现的尼帕病毒具有特征性的组织学改变，其明显的坏死性血管炎及脑细胞损伤是其严重临床表现及不良预后的病理基础。聚合酶链反应已开始用于病毒性脑炎的病原学诊断，尤其对疱疹病毒和肠道病毒有较高的诊断价值。磁共振成像对于病毒性脑炎的改变具有较高的分辨力，可显示脑水肿及脑皮质、灰白南联结部位或基底节的炎症，但对儿童及新生儿其诊断价值不高。在治疗上，除采用无环鸟苷对疱疹病毒脑炎治疗效果较明确外，其余病毒性脑炎的治疗均有待进一步探索。国外已开始研究病毒的基因治疗，以恢复被病毒破坏的脑细胞功能，这一方法为病毒性脑炎的治疗开辟了新领域。     

羊水标本母体细胞污染的检测

目的 建立一种简便有效地鉴别羊水标本母体细胞污染的方法。方法 采用PCR术扩增羊水标本DNA中YNZ^22和ApoB两个VNTR位点，根据胎儿及其双亲扩增片断长度多态性判断是否存在母体污染。结果 检测35例标本，34例提供信息，其中4例检测到母体细胞污染。结论 检测羊水标本母体细胞污染对提高产前诊断的准确性具有一定的意义。