VEGFR-32-Ig反义多肽的原核表达及生物活性鉴定

目的 将VEGFR-32-Ig的反义基因在体外进行原核表达，并将产物进行生物活性鉴定．方法 构建VEGFR-32-Ig反义基因的原核表达载体，经过原核表达、亲和层析及蛋白酶切后获得将VEGFR-32-Ig的反义多肽，用MTT法进行活性鉴定．结果 获得VEGFR-32-Ig的反义多肽，MTT法证明VEGFR-32-Ig的反义多肽具有较强生物学活性．结论 成功获得VEGFR-32-Ig的反义多肽，为研究和利用反义多肽提供了实验理论依据．     

双基因共表达在血管再狭窄研究中的应用

目的 观察携带反义凝血酶受体(ATR)和p21的双基因载体共表达后对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用，为再狭窄基因治疗寻求新途径。方法 以携带ATR或/和p21的单、双基因载体重组腺病毒伴随病毒(rAAV)感染培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC)，用半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达，MTT法测定病毒感染后不同时间点的细胞存活率。将携带AP双基因的rAAV导入WKY大鼠拉伤侧的颈总动脉，免疫组织化学法分别检测凝血酶受体(TR)和p21两基因在动脉壁中的表达。结果 RT-PCR结果显示，TR单基因的mRNA表达降低，p2l单基因表达升高，AP双基因得到了共表达；MTT法测定的生长曲线显示，双基因对hASMC增殖的抑制作用大于两个单基因；免疫组织化学证实，AP双基因导入后，TR基因的表达受到完全抑制，p2l基因的表达明显增加，血管新生内膜与平滑肌细胞的增殖受到了抑制。结论 ATR和p21双基因共表达在体外可明显抑制ASMC的增殖，在体内可明显抑制血管内膜新生和中膜的增生。     

脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸降低乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶活性

目的：已经发现随着细胞内胆固醇酯的积聚，脂肪分化相关蛋白的表达明显增加。本文进一步探讨脂肪分化相关蛋白干预细胞内胆固醇代谢的作用位点。 方法： Ox-LDL组为80 mg/L 氧化低密度脂蛋白与C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育，Ox-LDL+antisense组另加1 mmol/L脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸，在不同的时点取样，共观察4 d。使用荧光分光光度计观察细胞内胆固醇酯的改变；使用脂肪分化相关蛋白抗体间标法结合流式细胞术，观察脂肪分化相关蛋白表达量的变化；使用Ox-r［CL-3H］LDL和液体闪烁计数器观察细胞对氧化低密度脂蛋白摄入量的变化，并同时测定乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性。 结果： 72 h后，Ox-LDL+antisense组细胞内胆固醇酯（19.9±1.9）mg/g protein显著低于Ox-LDL组（46.6±3.4）mg/g protein。4 d观察期间，脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量两组细胞都增加，从12 h时点开始，Ox-LDL组大于Ox-LDL+antisense组，在4 d时点，Ox-LDL组明显高于Ox-LDL+antisense组。两组细胞摄入Ox-r［CL-3H］LDL的量逐渐增加，但是，Ox-LDL+antisense组摄入量从1 d后明显低于Ox-LDL组，在2 d和4 d时点，两组差别仍有显著性。乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性从6 h到2 d表现为增加，在2 d时点，两组比较差别显著，Ox-LDL+antisense组的活性明显低于Ox-LDL组。但从2 d到4 d，乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性稳定。ACAT的活性与脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量相关分析表明，Ox-LDL组R2＝0.6176 （P＜0.05），Ox-LDL+antisense组R2＝0.8212（P＜0.05）。 结论： 抑制脂肪分化相关蛋白表达能引起细胞摄入外源性脂蛋白减少和乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性降低，提示脂肪分化相关蛋白与脂滴的代谢功能密切相关，且乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶有可能是其潜在的位点。     

大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应

IL 6受体 (IL 6R) β链是分子量为 130kD的膜结合糖蛋白 (gp130 ) ,它是介导IL 6生物效应的信号转导子。我们的实验已经证实了重组人IL 6 (rhIL 6 )可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2 ,rhIL 6与R2细胞表达的hIL 6R结合并与大鼠 gp130缔合而转导IL 6的信号 ,产生其生物效应。本文在体外液体培养中试验观察到 ,大鼠 gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后 ,对rhIL 6生物效应产生明显的影响。我们的研究结果表明 ,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL 6对R2细胞的增殖抑制效应 ,在最适的终浓度 ,其阻断率可达 (45± 7) %。     

人类端粒酶逆转录酶基因反义核苷酸对白血病细胞端粒酶活性的影响

为了探讨人类端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）对原代培养的急性髓性白血病（AML）和慢性髓性白血病（CML）细胞端粒酶活性的影响。采用间接免疫荧光标记方法，通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT蛋白表达含量的变化。采用端粒酶聚合酶链反应-酶子弟免疫测定（PCR-ELISA0法检测白血病细胞端粒酶活性的改变。结果显示：hTERT ASODN作用于AML和CML细胞24，48和72小时后，hTERT蛋白表达水平不断降低；同时，AML和CML细胞端粒酶活性均逐渐受到抑制。结论：hTERT基因ASODN可以通过特异性地抑制AML和CML细胞hTERT蛋白的表达，抑制AML和CML细胞端粒酶的活性。     

病毒性肝炎核酸疫苗研究的现状与问题

核酸疫苗又称ＤＮＡ疫苗 ,是指将含有编码某种目的抗原蛋白基因序列的真核细胞表达质粒作为疫苗 ,直接接种机体 ,在体内合成抗原蛋白 ,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答 ,达到免疫的目的。乙肝ＤＮＡ疫苗的抗原基因片段 ,主要是编码表面抗原的Ｓ区 ,也可包括ｐｒｅＳ1 、ｐｒｅＳ2 区。此外 ,Ｇｅｉｓｓｌｅｒ等〔1〕将包含ｐｒｅＳ1 、ｐｒｅＳ2 的Ｓ区基因以及ＨＢｃＡｇ编码基因的重组质粒接种小鼠 ,诱导产生了高滴度抗 -ＨＢｓ及抗 -ＨＢｃ。93 %的小鼠产生了强烈的对病毒蛋白的ＣＤ4+ Ｔ细胞介导的体液免疫的ＣＤ8+ Ｔ细胞介导的Ｃ…     

肱骨干骨折四种手术方法疗效分析

目的探讨肱骨干骨折治疗的理想方法。方法对115例肱骨干骨折患者分别采用四种手术方法，即闭合复位组合式外固定术、闭合复位于氏单边外固定架术、切开复住加压钢板内周定术、交锁髓钉内固定术，观察其术后并发症和疗效。结果组合式外固定架优良率100％，于氏单边外固定架优良率93％。钢板内固定优良率77％，交锁钉优良率96％。骨愈合率分别为100％、93％、84％、91％。住院时间、手术时间、术中出血、术中并发症、术后愈合时间、术后不愈合率等各方面比较，组合式外固定架优于其他3种方法。结论肱骨干骨折组合式外固定架术是理想的治疗方法。     

锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位和锁骨远端骨折的临床研究

目的 评估锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位与锁骨远端骨折的临床疗效。方法 采用锁骨钩钢板治疗Ⅲ度肩锁关节脱位9例，锁骨外端骨折16例。结果 术后X线复查骨折或关节脱位复位率100％。疗效优18例，占72％；良7例，占28％。无其他并发症，骨折全部愈合，肩锁关节无再脱位。结论 锁骨钩钢板治疗肩关节脱位和锁骨远端骨折具有固定确实，符合生物力学要求，不损伤关节面，可以早期功能锻炼等优点，值得推广。术中仍需注意修复喙锁韧带。     

丙型肝炎病毒核酸检测的国家标准物质的研制

目的研制国内用于丙型肝炎病毒核酸(HCVRNA)扩增检测的血清标准物质。方法用HCVRNA阴性血浆将阳性血浆稀释至含量约300000拷贝数/ml,然后进行真空冷冻干燥。检测方法采用实时荧光定量聚合酶链反应方法和罗氏公司的PCR内标定量方法。制备标准品含量通过与国际标准(世界卫生组织属下的国家生物标准研究所标准物质编号:96/790)比对获得。结果该标准物质定值为:(1·29±0·24)×105IU/ml。其稳定性实验表明室温20~25℃(相对湿度20%~50%)14d、37℃(相对湿度60%~80%)7d均稳定。长期监测结果表明:2~8℃6个月及-20℃保存两年的含量均无明显变化。均一性检测结果:瓶间不精密度为3·53%。结论该制备物可以作为用于核酸扩增检测的丙型肝炎病毒核酸国家标准物质。     

贫血患者网织红细胞及其荧光强度检测的临床意义

目的探讨流式细胞术加核酸荧光染色技术在网织红细胞(Ret)及其荧光强度分析中的临床应用价值。方法用SysmexXT-2000i全自动血液分析仪分析不同类型贫血患者的网织红细胞(Ret)和荧光强度的变化。结果285例贫血患者与102例正常人群比较,其Ret绝对值及其Ret百分比有不同程度的升高、轻度降低或显著降低;荧光强度的变化差异较大,表现为低荧光强度网织红细胞比率(LFR)降低,幼稚网织红细胞比率(IRF)、中荧光强度网织红细胞比率(MFR)和高荧光强度网织红细胞比率(HFR)升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论全自动血液分析仪对网织红细胞的自动化分析测量细胞多,避免了主观因素导致的误差,操作简便、快速、灵敏、重复性好、误差小、结果准确,方法易于标准化。网织红细胞及其荧光强度分析可作为某些贫血鉴别诊断的初筛指标及骨髓造血系统抑制和恢复较敏感的指标,对判断和监测骨髓的损伤程度和预后具有重要的临床意义。