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目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。方法将《伯杰细菌鉴定手册》中载入的49种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育。挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和PCR扩增,获得DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行16S rRNA序列测定。结果 49种分枝杆菌模式株中,采用RP-HPLC分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共7种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用16S rRNA序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共12种因各组内基因序列相似性百分比为100%而难以进行鉴别。通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将49种分枝杆菌模式株中的47种进行明确鉴别。结论分枝菌酸RP-HPLC和16S rRNA序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法。两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种。 相似文献
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