弓形虫抗原组分提取及免疫原性观察

以不同剂量的弓形虫粗制与纯化抗原经皮下注入小白鼠，３５天后检查血清，在高剂量粗制抗原组显示有免疫学改变。以０．２ｍｌ弓形虫感染小鼠后新鲜腹水感染试验鼠，亦显示试组具保护力，可延长小鼠的存活时间。但总的看来，保护力不强，尤其是低剂量粗制抗原及纯化抗原均无保护力。     

人PIWIL3特异性抗体的制备和PIWIL3蛋白在肿瘤组织中的分布

目的:制备人Argonaute家族中PIWIL3蛋白的特异性抗体,并检测其在人多种肿瘤组织中的表达和分布.方法:根据序列同源性和多肽免疫性,利用内部多肽选择数据库选择最佳的多肽免疫原合成多肽,再与KLH结合用于免疫;免疫所得的抗血清经多肽包被的凝胶进行亲和层析纯化,酶联免疫吸附分析技术(ELISA)检测纯化后抗体与多肽的结合能力,Western blot检测抗体对相应蛋白的结合能力.人肿瘤组织芯片检测该蛋白在多种肿瘤组织的表达和定位.结果:成功制备特异性人PIWIL3蛋白多克隆抗体.ELISA和Westernblot检测均表明该抗体具有很好的结合能力.肿瘤组织芯片检测到PIWIL3蛋白在人星形细胞神经胶质瘤和脑脊膜瘤胞质中表达.结论:应用内部多肽选择数据库可以得到最佳的多肽免疫原,以区分亚家族中其他有高度序列同源性的蛋白,成功制备出纯度和结合能力均较好的特异性人PIWIL3抗体,对研究人类特定肿瘤的发病具有潜在的应用价值.     

苏丹红Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备苏丹红Ⅰ单克隆抗体。方法:人工合成苏丹红Ⅰ结构类似物,分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,作为免疫原和包被原,利用杂交瘤技术,制备分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞株,并用常规方法进行鉴定。结果:获得一株分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体细胞株Sum ab-1,其染色体数为86-90,腹水效价为:0.8×104。结论:通过合成结构类似物的方法,成功制备单克隆抗体,能够明显抑制苏丹红Ⅰ。     

HIV-1 Env免疫原设计的研究进展

Env膜蛋白作为HIV-1病毒颗粒表面的主要抗原物质,是广谱中和抗体识别的靶点。但因Env高突变,高糖基化等因素,至今仍无有效的艾滋病疫苗问世。围绕Env的疫苗研究已经开展了近三十年之久,在表达系统、免疫原、免疫方式以及免疫应答类型等方面都不断有了新的突破。基于HIV-1 Env设计的免疫原在动物模型中逐渐展现出前景,为HIV疫苗的研究带来了曙光。本文主要围绕Env免疫原设计策略进展进行阐述,为后续的HIV-1 Env免疫原设计提供指导和思路。     

Construction and evaluation of anti-gastrin immunogen based on P64K protein

AIM: To construct two kinds of anti-gastrin immunogen based on P64K protein from Neisseria meningitids and to compare their immunogenic effect. METHODS: G17P64K gene was cloned and ligated into pET28a plasmid, then transformed into BL21(DE3). After inoculation of LB medium and IPTG induction, the recombinant protein was solubly expressed at a high level. The purification of G17P64K fusion protein was similar to that of P64K. An initial step of purification consisting of 30% saturated ammonium sulfate precipitation was done. Additional fine optimizations included phenyl-sepharose, G200 Sephadex gel filtration and Q-sepharose anion exchanger chromatography. Highly purified protein was obtained and sequenced at the N-terminal amino acid residues. Polypeptide was synthesized by Fmoc solid phase chemical method and cross-linked to carrier protein P64K and DT mutant by MBS method and then the rabbit anti-gastrin 17 antibody was prepared by immunizing rabbit with cross-linked and fused protein. The titer and the activity in vitro of antibody were assessed. RESULTS: G17P64K gene and the recombinant bacteria were obtained. After four steps purification, protein sample that has the purity above 90% was achieved. At the 84th day after the first immunization, the titer of antibody against cross-linked protein reached 51 200. Evaluation of the antibody in vitro manifested that it had a high inhibitory activity on the growth of tumor cell SW480. CONCLUSION: The P64K-polypeptide cross-linked im munogen immunized rabbit and achieved a higher titer antibody against gastrin 17 than the G17P64K fusion protein immunogen, which could inhibit the growth of the tumor cell SW480.     

用pIII及pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫原性的研究

目的:探索用pIII和pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫源性以及用噬菌体展示颗粒为免疫原制备抗体的可能性.方法:从人心肌组织中获得cTnI基因,突变后克隆入pMDT-18载体及pFD5 pIII型噬菌体展示载体.合成两条互补寡聚核苷酸单链,退火后变成编码cTnI 95～108位氨基酸的双链,与 PC89 pVIII型噬菌体展示载体连接.含有cTnI及其抗原表位基因的重组质粒转化辅助噬菌体敏感的XL1-Blue细胞,用VCSM13超感染获得展示有cTnI及其抗原表位的噬菌体颗粒,测定其表达量.并以此为免疫源免疫新西兰白兔获得抗体,用ELISA方法测定抗体滴度.结果:cTnI及其抗原表位在噬菌体颗粒表面得到成功展示,展示量分别为5 ng/ml和96 ng/ml.免疫后得到的抗体滴度为1∶300和1∶1?800.结论:制备具有一定空间结构的大分子蛋白的抗体时,可用pIII噬菌体展示系统,制备小分子肽线性表位的抗体时,pVIII展示系统具有独特的优势.     

4种免疫原对棘球绦虫继发性感染的预防效果

由于猪带绦虫和细粒棘球绦虫间存在大量的共同抗原〔1～ 3〕,为寻找可能的免疫原制备细粒棘球绦虫疫苗 ,我们将 4种猪带绦虫和细粒棘球绦虫抗原进行了初步免疫预防的动物实验 ,现将结果报告如下1　材料与方法1 1　免疫原制备　Ｅ ｇＣＦ免疫原 :细粒棘球蚴囊液采绵羊肝脏 ,离心     

弓形虫循环抗原诊断试剂的研究

目的　比较弓形虫不同免疫原所制备抗体检测CAg的效果 ,优选高效价的抗体诊断试剂。 方法　制备弓形虫的细胞质抗原 (C)、代谢抗原 (S)。用抗原C、C +S、S及活虫各免疫 2只家兔 ,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体 (多抗 )并制备酶标记抗体 ;用上述 4种多抗与多抗 -HRP组合成 16种双抗体夹心型ELISA ,检测人血清CAg和C、S抗原 ,评价试剂的敏感性 ;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验 ,评价试剂的特异性。结果　各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性样本 7例 ,阴性样本 8例 ,均未出现假阴性和假阳性反应 ,其OD均值的P/N比值依次为C +C组 33 5、S +S组 2 7 8、CS +CS组 2 1 2、P +P组 13 2 ;C和S抗原的最低检出量均为 0 5 μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。 结论　 (1) 4种抗体用于检测人血清CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明 ,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性 ,其中以抗C抗体试剂最为满意。 (2 ) 16种组合形式的夹心ELISA ,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义 ,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分。     

浅析基层医院临床免疫学检验结果影响因素及控制方法

<正>临床免疫学检验是免疫检测技术在临床中的应用,主要包括抗原抗体结合反应,免疫原和抗血清的制备以及在此基础上发展起来的酶联免疫、化学发光免疫、放射免疫等免疫检测技术,完善的检验质量管理体系是免疫学检验结果的准确性和可靠性的保证。随着科技日新月异的发展和临床医学的实践深入,人们对检验结果可靠性的要求在不断提高,临床免疫学检验质量管理观念,质量管理理论及质量管理方法都发生了重大变革。本文旨在对临床免疫学     

赖型017株钩体疏水外膜蛋白及其免疫特征的研究

采用低浓度非离子型去污剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４（ＴＸ－１１４）抽提和分离问号状钩端螺旋体（钩体）黄疸出血群赖型０１７株（０１７），选择性地将钩体外膜蛋白分离为ＴＸ－１１４疏水相和亲水相两个部分。疏水相外膜蛋白含５条主要蛋白区带，其分子量分别为６６ｋｄ、３９ｋｄ、３５ｋｄ、２７ｋｄ和１６ｋｄ，其中仅３９ｋｄ外膜蛋白区带可特异地分别被抗全０１７血清、抗０１７外膜血清和抗０１７保护性单克隆抗体Ｅ４Ｂ７Ｇ５所识别。本研究结果表明经ＴＸ－１１４抽提分离的３９ｋｄ疏水外膜蛋白为０１７钩体稳定的免疫原，在研究钩体保护性抗原和构建基因工程疫苗中有十分重要的研究价值。