人乳头瘤病毒重组质粒的构建及蛋白表达

目的 构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型L1片段(HPVl8LI)活性蛋白。为进一步研制人乳头瘤病毒18型(HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒(pBR322-HPV18)为模板，利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段。将HPV18L1DNA与质粒(pUC19)重组构建重组质粒(pUC19-HPV18L1)。用酶切电泳验证重组结果的正确性；并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用质粒(pQE32)做表达载体构建重组质粒(pQE32-HPV18L1)，并用酶切电泳验证。将重组质粒pQE32-HPV18L1转入工程菌(M15)。用酶切电泳验证重组工程菌(pQE32-HPV18L1／M15)正确性。利用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HPV18L1目的蛋白。采用不同浓度异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间来优化HPV18L1目的蛋白表达条件。利用Western印迹检测蛋白质(Western blot)鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果PCR扩增DNA片段约为1．7Kb。与预期结果相同。克隆重组质粒pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同。而且测序验证插入片段全序列无改变。表达重组质粒pQE32-HPVl8L1酶切图谱亦与预期相同。蛋白表达条件优化结果为1mmol／LIPTG诱导4h后，获得HPV18L1最佳蛋白表达量：SDS-PAGE显示，约63KD处可见目的蛋白带，与预期结果一致。Westem blot鉴定，在约63KD处可见目的条带，与预期结果一致。结论 成功构建表达重组质粒pQE32-HPV18L1并能表达HPV18L1目的蛋白。     

鞘氨醇对人结肠癌细胞的抑制作用

目的 研究鞘氨醇对人结肠癌细胞的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)、细胞核分裂指数和3H-TdR掺入试验方法，所设剂量鞘氨醇分别为0，0．82，1．63，3．125，6．25，12．5μmol／L，以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照。结果 鞘氨醇对HT-29细胞的生长有明显抑制作用。在MTT试验中，不同浓度鞘氨醇对HT-29细胞的7d抑制率分别为18％，45％，72％，87％和89％；在核分裂指数试验中，随着鞘氨醇剂量的增高，其核分裂指数明显降低；在^3H-TdR掺入试验中。可见随着鞘氨醇剂量的增高，^3H-TdR掺入到HT-29细胞中明显的减少，与阴性对照组相比有显著性差异。结论 鞘氨醇对HT-29细胞的生长增殖有明显抑制作用，这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一。     

乌贼墨对小鼠脾细胞和巨噬细胞NO生成及 IFN-γ分泌水平的影响

目的：探讨乌贼墨对脾细胞和巨噬细胞NO生成及IFN-γ分泌的影响。方法：用Griess法和ELISA法分别检测了经乌贼墨灌胃处理后小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞培养上清中NO和IFN-γ的水平的变化。结果：乌贼墨灌胃处理小鼠后的第4、6天脾细胞及腹腔巨噬细胞(Mφ)可产生较高水平的NO；脾细胞可产生较高水平的IFN-γ，并且小鼠脾细胞NO的产生水平与IFN-γ产生水平呈正相关(r=0．98)；用LPS和L-NMMA(NO抑制剂)分别同乌贼墨灌胃第6d小鼠的脾细胞一起培养，结果显示LPS可协同IFN-γ促NO水平升高。L-NMMA可抑制小鼠脾细胞的NO生成。结论：乌贼墨可促进巨噬细胞NO生成；脾细胞NO的产生与IFN-γ分泌水平呈正相关。     

高效液相色谱法检测人肝微粒体CYP3A活性

目的：测定普罗帕酮和N 去丙基普罗帕酮的比值以表达人肝微粒体中CYP3A的活性。方法：以1 mg·mL 1微粒体蛋白浓度37℃孵育普罗帕酮1 h，以HPLC测定普罗帕酮和N 去丙基普罗帕酮的含量。结果： 普罗帕酮和N 去丙基普罗帕酮的线性方程分别为Y＝0.452 0X＋0.003 029(r＝0.999 7)；Y＝1.137 3X＋0.012 740(r＝0.998 5)。结论：N 去丙基普罗帕酮与普罗帕酮的最大比值为1.54，CYP3A具有饱和性。     

人源性及牛源性乳铁蛋白抑制丙型肝炎病毒复制作用的对比研究

目的：探讨人乳铁蛋白(HLF)及牛乳铁蛋白(BLF)在体外HepG2细胞中对丙型肝炎病毒(HCV)感染增殖的抑制作用，为乳铁蛋白用于临床治疗HCV感染提供理论和实验依据。方法：以HepG2细胞作为HCV复制体系，以RT nPCR方法，测定培养细胞提取物中病毒正、负链，并用活性细胞定量鉴定法(MTT)对两种乳铁蛋白的细胞毒性作用及药物剂量进行研究。结果：细胞毒实验显示，实验中两种乳铁蛋白的浓度小于1.5 mg·mL 1时对HepG2细胞生存率无显著影响。HCV阳性血清接种HepG2细胞后，HCV正、负链可于第8，10，12天被检测到。当两种乳铁蛋白(浓度分别为1.5，1.0，0.5，0.1 mg·mL 1)先与HCV阳性血清作用后再接种细胞时，不同时期提取物中均未测定到HCV正、负链。而当乳铁蛋白(浓度同上)先与细胞作用后洗去再与HCV阳性血清作用时，不同时期细胞提取物中可测定到HCV正、负链。结论：乳铁蛋白能在非细胞毒性剂量时能防止HCV感染HepG2细胞；乳铁蛋白可能主要是通过与病毒颗粒本身相互作用发挥上述功能；两种来源的乳铁蛋白在体外抑制HCV复制的作用差异无显著性。     

重组人IL-6对近曲肾小管上皮细胞增殖及生物学表型的影响

【目的】观察重组人白细胞介素6（rIL-6）在体外对人近曲肾小管上皮细胞株（HK-2）增殖及生物学表型的影响。探讨rIL-6对HK-2细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。【方法】用MTT比色法检测rIL-6对细胞增殖的影响；用流式细胞术检测rIL-6对细胞周期及α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）阳性细胞百分率的影响；倒置显微镜观察rIL-6对HK-2细胞形态改变的影响。【结果】MTT比色法示，rIL-6在10～50ng／mL作用浓度范围内促进HK-2细胞增殖，呈剂量、时间依赖效应；rIL-6作用浓度为100～200ng／mL时抑制细胞增殖，随作用浓度增加抑制作用加强（F=201．582，P〈0．001），（F=43．943，P〈0．001）。rIL-6影响HK-2细胞的DNA合成。HK-2细胞有基础量的α—SMA表达，25ng／mL rIL-6与HK-2孵育1～48h后，α—SMA阳性细胞百分率高峰出现在48h（F=442．22，P〈0．001）。rIL-6干预下，HK-2细胞形态由卵园型渐转变为长棱型、长条型。【结论】rIL-6可促进HK-2细胞增殖及生物学表型的转化，但大剂量的rIL-6可抑制HK-2细胞增殖。     

序言

2005年最令世界消化领域医生振奋与鼓舞的事情应算1983年成功从人胃粘膜中培养和分离出幽门螺杆菌的澳大利亚医生Barry Marshall和Robin Warren荣获诺贝尔生理学、医学奖。这不仅仅是他们个人的荣誉，也是对长期从事基础医学及临床研究的科研人员艰辛工作的肯定。     

老年人用药不安全5例分析

老年人多同时患有多种疾病，且患病时临床表现的特点不同于中青年人。老年人的生理变化可影响药物的吸收、分布、代谢和排泄，同时亦影响药物的效应和不良反应，要注意老年人常用药物的不良反应.现将老年人用药不安全5例分析如下.     

对380例非淋菌性泌尿道感染者病原体检测分析

目的检验本地区泌尿道感染中支原体、衣原体的分布情况。方法对380例泌尿道感染者进行了解脲脲原体（Uu）、人型支原体（Mh）及沙眼衣原体（Ct）的检测和培养。结果叶胜334例（87．7％），其中Ct 197例（59％），Uu 137例（41％），Mh62例（18％），Ct、Uu、或Mh混合感染104例（31．2％）。结论 本地区以上3种病原体在非淋菌泌尿道感染中已成为常见病原体。     

衡阳地区支原体临床分离株对抗生素耐药性监测

目的比较四环素类、大环内酯类和喹诺酮类三类抗菌药物对解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的抗菌作用,为临床用药提供参考依据。方法采用直接肉汤药盘法测定了临床标本中195株Uu和118株Mh对三类抗菌药物中的8种抗生素的敏感性。结果195株Uu对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星、司帕沙星的敏感率分别为21.0%、48.2%、39.5%、79.0%、88.7%、74.9%、28.2%和64.6%。118株Mh对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星、司帕沙星的敏感率分别为5.1%、33.9%、26.3%、0.0%、0.0%、89.8%、70.3%和64.4%。960例混合感染的Uu Mh,对交沙霉素最敏感(79.2%)。结论泌尿生殖道支原体的耐药性监测对指导临床治疗具有重要意义。