RNA聚合酶Ⅰ抑制剂通过NF-κb调控鼻咽癌细胞系CNE-1的增殖、侵袭与凋亡

 目的 探讨RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭与凋亡的作用机制。方法 免疫组织化学染色检测鼻咽癌与癌旁组织NF-κb的表达。Western blot检测相关效应蛋白在蛋白质水平的表达。CCK-8法检测不同浓度药物处理后CNE-1细胞系的增殖情况。Transwell法比较药物处理后CNE-1细胞系的侵袭能力变化。流式细胞术检测不同浓度药物处理后鼻咽癌细胞系CNE-1细胞周期和凋亡的变化。结果 鼻咽癌组织中磷酸化NF-κb表达较癌旁组织明显增高（P<0.01）。NF-κb总蛋白在蛋白水平无明显变化，但磷酸化水平在药物处理后明显降低（P<0.01）。Bax较对照组明显增高（P<0.01），Bcl-2较对照组明显降低（P<0.01）。药物处理后，发现CNE-1 细胞系的增殖、侵袭能力较对照组明显降低且差异具有统计学意义（均P<0.01）；细胞凋亡较对照组明显增多（P<0.01），药物处理组较对照组细胞周期明显阻滞在G₂期（P<0.01）。结论 RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461能够通过调控 NF-κb磷酸化促进鼻咽癌CNE-1细胞系凋亡及周期阻滞，抑制其增殖与侵袭能力。     

慢性牙周炎与口腔鳞状细胞癌关系的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的发病率和死亡率呈年轻化趋势上升,已成为世界范围内的主要公共卫生问题.近年来,慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)与口腔鳞癌之间的关系越来越受到重视,一些研究发现,以慢性炎症和微生物失调为特征的牙周病是口腔肿瘤...     

Gleditsia sinensis thorns inhibit the production of NO through NF-kappaB suppression in LPS-stimulated macrophages

The thorns of Gleditsia sinensis LAM. (Leguminosae) have been used in traditional medicine for the treatment of inflammatory diseases including swelling, suppuration, carbuncle and skin diseases in China and Korea. In this study, we investigated the mechanism responsible for anti-inflammatory effects of Gleditsia sinensis thorns in RAW 264.7 macrophages. The aqueous extract of Gleditsia sinensis thorns (AEGS) inhibited LPS-induced NO secretion as well as inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression, without affecting cell viability. Furthermore, AEGS suppressed LPS-induced NF-kappaB activation, phosphorylation and degradation of IkappaB-alpha, phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) and c-Jun N-terminal kinase (JNK). These results suggest that AEGS has the inhibitory effects on LPS-induced NO production and iNOS expression in macrophages through blockade in the phosphorylation of MAPKs, following IkappaB-alpha degradation and NF-kappaB activation.     

Shikonin derivatives inhibited LPS-induced NOS in RAW 264.7 cells via downregulation of MAPK/NF-kappaB signaling

AIM OF THE STUDY: Shikonin/alkannin (SA) derivatives, analogs of naphthoquinone pigments, are the major components of root extracts of the Chinese medicinal herb (Lithospermum erythrorhizon; LE) and widely distributed in several folk medicines. In the present study, the effect and the underline molecular mechanism of shikonin derivatives isolated from root extracts of Lithospermum euchroma on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory response were investigated. MATERIALS AND METHODS: Effects of five SA derivatives, including SA, acetylshikonin, beta,beta-dimethylacrylshikonin, 5,8-dihydroxy-1.4-naphthoquinone, and 1,4-naphthoquinone on LPS-induced nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) production in mouse macrophage RAW264.7 cells were examined. RESULTS: Data suggested that SA derivatives inhibited LPS-induced NO and PGE(2) production, and iNOS protein expression. RT-PCR analysis showed that SA derivatives diminished LPS-induced iNOS mRNA expression. Moreover, the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 in LPS-stimulated RAW 264.7 cells was concentration-dependently suppressed by SA derivatives. SA inhibited NF-kappaB activation by prevention of the degradation of inhibitory factor-kappaB and p65 level in nuclear fractions induced by LPS. CONCLUSIONS: Taken together, these results suggest that the anti-inflammatory properties of SA derivatives might result from inhibition of iNOS protein expression through the downregulation of NF-kappaB activation via suppression of phosphorylation of ERK, in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.     

Wnt／β-catenin信号通路参与高渗条件下气道上皮细胞黏液高分泌

目的研究高渗刺激对人气道上皮细胞（16HBE）黏蛋白（MUC）5AC分泌的影响,以及Wnt／β-catenin信号通路可能的介导作用。方法使用浓氯化钠配置高渗培养液,用高渗培养液刺激16HBE细胞,细胞分为常规培养（阴性对照组）以及高渗培养液刺激3、6、9、12h组。ELISA法检测MUC5AC分泌量,Westernblotting法检测人气道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表达情况。将Wnt4小片段siRNA转染16HBE细胞,再给予高渗培养液刺激。采用ELISA法检测培养上清的MUC5AC分泌量,采用Westernblotting法检测细胞内经典Wnt／β-catenin通路相关信号分子的表达量,细胞免疫荧光法检测核因子（NF）-κBp65核转位情况。结果高渗培养的16HBE细胞上清及胞质中检测到的MUC5AC分泌量显著高于阴性对照组,且MUC5AC分泌量在一定范围内呈时间依赖性（均P〈0．05）。高渗刺激组Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表达量较阴性对照组无明显变化（均P〉0．05）,而Wnt4表达量显著升高（P〈0．05）。高渗刺激组细胞内β-catenin和CyelinD1的相对表达量显著高于阴性对照组,细胞免疫荧光法提示NF-κBp65核转位（均P〈0．05）;而经转染Wnt4siRNA后,高渗培养组上清及胞质内MUC5AC分泌量显著低于未转染的高渗培养组（P〈0．05）,细胞内β-catenin、CyclinD1水平及NF-κBp65的核转位现象也受到显著抑制（均P〈0．05）。结论高渗盐水可诱导16HBE细胞MUC5AC高分泌,Wnt／β-catenin信号通路在该效应中有重要的参与作用。     

电针对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝TLR4、NF-κB表达的影响

目的探讨电针对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织toll样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB）表达的影响及意义。方法48
只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、早期干预组、晚期干预组,每组各12只;模型组、早期干预组、晚期干预组均给予高脂饲
料喂养5周建立非酒精性脂肪性肝病模型,在5周末处死每组大鼠各1只,以验证造模成功。早期干预组和晚期干预组均电针
“足三里”、“丰隆”、“三阴交”,1次/d,20 min/次,连续治疗21 d。针刺后检测各组大鼠血清ALT、AST、TC、TG的变化情况,采用
荧光定量PCR和Werstern blot检测大鼠肝脏TLR4和NF-κB的mRNA表达情况。结果模型组大鼠的ALT、AST、TC、TG及肝
脏TLR4、NF-κB的表达均高于其余3 组,差异有统计学意义（P<0.05）;针刺后各干预组的ALT、AST、TC、TG及肝脏TLR4、
NF-κB的表达均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论电针“足三里”、“丰隆”、“三阴交”可以调节血脂及肝功,对非酒
精性脂肪肝有一定良性调节作用,其作用机制可能与电针可以调节脂代谢,同时可以下调肝脏组织TLR4、NF-κB的表达,减轻
炎症对非酒精性脂肪性肝病的影响有关。
     

右旋美托咪啶对围术期炎症介质及外周血单核细胞NF-κB的影响

目的探讨右旋美托咪啶的抗炎作用及其对外周血单核细胞NF-κB活性的影响。方法选择20~70岁ASAⅠ~Ⅱ行择期腰椎手术病人60例,随机分为右旋美托咪啶对照组（Ⅰ组）、0.5 μg组（Ⅱ组）、1.0 μg组（Ⅲ组）。选择气管内插管全身麻醉,分别于麻醉诱导后手术开始前（T1）、手术结束前半小时（T2）、术后24 h（T3）抽取静脉血,用ELISA法测定血浆中的IL-6、TNF-α的浓度,用流式细胞仪测量外周血单核细胞NF-κB活性的表达。结果三组患者术中芬太尼用量Ⅰ组（0.90±0.72）mg,Ⅱ组（0.71±0.58）mg,Ⅲ组（0.65±0.05）mg,瑞芬太尼用量Ⅰ组（1.35±0.80）mg,Ⅱ组（1.15±0.74） mg,Ⅲ组（1.02±0.70） mg和术后镇痛芬太尼使用剂量Ⅰ组（0.98±0.37）mg,Ⅱ组（0.84±0.19）mg,Ⅲ组（0.55±0.16）mg的差异具有统计学意义（P〈0.05）,三组患者血浆IL-6、TNF-α以及外周血单核细胞NF-κB的活性组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在行腰椎手术的麻醉中使用右旋美托咪啶可以减少阿片类药物用量。右旋美托咪啶定可以作为腰椎手术的麻醉的辅助药。右旋美托咪啶对IL-6、TNF-α以及外周血单核细胞NF-κB的表达没有明显影响。     

益气解毒方阻断气虚染毒大鼠鼻咽上皮细胞癌变的研究

目的探讨益气解毒方调节NF-κB途径阻断气虚染毒大鼠鼻咽癌变的影响。方法大鼠腹腔注射二亚硝基哌嗪（DNP）和佛波醇酯（TPA）,同时进行力竭游泳,诱导大鼠诱发鼻咽癌变模型,予以益气解毒方干预,定期分批处死大鼠,取鼻咽组织做病理检测,免疫组织化学SABC法检测蛋白表达。结果在诱发鼻咽癌变进程的单纯性增生阶段,与模型组比较,益气解毒方组和维甲酸组大鼠鼻咽上皮细胞的NF-κB p65和IκBα蛋白表达活性均无统计学意义,但在异型增生阶段,益气解毒方组对鼻咽上皮细胞的NF-κB p65蛋白表达活性显著低于模型组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,而IκBα蛋白表达活性显著高于模型组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论益气解毒方能够有效阻断气虚染毒大鼠鼻咽上皮细胞癌变进程,其作用与其有效调节NF-κB途径关键基因NF-κBp65和IκBα的蛋白表达密切相关。     

黄芩素对阿霉素致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用机制研究

目的：观察黄芩素对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用及其NF-κB及JNK信号通路的关系。方法：采用乳鼠心肌细胞培养法,实验分为空白对照组、阿霉素处理组、阿霉素合并黄芩素高中低剂量组。MTT法检测心肌细胞存活率,Westernblot法检测NF-κBp65和JNK磷酸化水平。结果：高剂量组黄芩素能够显著对抗阿霉素所致心肌细胞损伤（P〈0．05）,并显著抑制炎症通路NF-κB和细胞凋亡通路JNK的磷酸化水平。结论：黄芩素能抑制NF-κB和JNK的磷酸化水平,以对抗阿霉素所引起的心肌细胞损伤。     

稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究

目的：建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与 GV248-GFP-Puro 慢病毒载体连接产生重组体( GV248-GFP-Puro-shSIGIRR)。将测序验证正确的重组体与包装质粒(pMDL、pRev、pVSVG)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒并感染HKC细胞。实时荧光定量PCR( qRT-PCR)和Western blot法分析检测HKC细胞中SIGIRR干涉效率。应用白细胞介素-1β( IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC细胞及对照细胞, Western blot法检测其下游核转录因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常 T细胞表达和分泌的活化调节蛋白( RANTES) mRNA水平。结果成功构建重组慢病毒载体GV248-GFP-Puro-shSIGIRR。 qRT-PCR 和 Western blot 法均证实在HKC细胞中成功敲低SIGIRR的表达。此外, IL-1β刺激后,与对照细胞相比,敲低SIGIRR的HKC细胞( HKC/shSIGIRR)的p65磷酸化水平上调, MCP-1和 RANTES mR-NA表达水平升高。结论 HKC的炎症反应中,SIGIRR蛋白对Toll样受体/白介素1受体(TLR/IL-1R)通路起“刹车”作用。该研究为狼疮性肾炎的治疗提供了新的潜在的靶点。