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991.
目的研究RhoB对胃癌细胞SGC7901增殖调控作用。方法用PCR扩增出RhoB的全长cDNA,构建RhoB可诱导表达载体pGene/V5-His-RhoB;脂质体介导法将调控载体pSwitch及诱导表达载体pGene/V5-His-RhoB先后转入人胃癌细胞SGC7901中,筛选出稳定抗性克隆;Western blot检测米非斯酮诱导后转染细胞中RhoB蛋白的表达。用MTT assay检测RhoB转染细胞株的生长速度、双苯并咪唑染料(Hoechst 33258)活细胞吸收分析法、流式细胞仪(FCM)检测RhoB对胃癌细胞凋亡指数作用。结果成功构建RhoB可诱导真核表达载体pGene/V5-His-RhoB,并经酶切和测序鉴定;转染后经潮霉素B和Zeocin筛选出稳定抗性克隆SGC7901/RhoB;米非斯酮诱导出RhoB蛋白表达,在诱导24小时后蛋白表达最高;细胞增殖试验结果显示,RhoB表达上调后胃癌细胞增殖受到抑制;细胞凋亡检测提示高表达RhoB可明显诱导胃癌细胞凋亡。结论RhoB对胃癌细胞增殖具有负性调控作用,可诱导胃癌细胞出现凋亡。 相似文献
992.
卵巢上皮性癌BRCA1和p53基因表达的临床意义及相互关系研究 总被引:1,自引:2,他引:1
目的:探讨BRCA1、p53基因蛋白在卵巢上皮性癌中的表达情况及相互关系。方法:应用S-P免疫组织化学法检测50例卵巢上皮性癌组织中BRCA1和p53蛋白的表达。采用Kaplan—Meier法分析两种蛋白表达情况与患者预后的关系。结果:1)BRCA1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率仅为30%,明显低于正常卵巢组织(100%)和良性肿瘤组织(90%)(P<0.01);BRCA1在低分化癌、有淋巴结转移的卵巢癌组织中表达减少甚至缺失。2)p53蛋白在卵巢癌组织中的表达率为64%,而在正常卵巢及良性肿瘤组织中无表达;其表达仅与病理学分级有关。3)两种基因蛋白表达比较呈显著负相关(P<0.01)。4)患者生存随访表明,有BRCA1表达的患者平均生存期长于无表达者;而p53对生存时间无影响。结论:BRCA1基因在转录后水平的下调对卵巢上皮性癌的发生发展有重要的作用.同时BRCA1基因与p53基因协同促进肿瘤的演进恶化。 相似文献
993.
目的研究p33ING1b在非小细胞肺癌(non_small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与p21WAF1蛋白表达的关系;探讨p33ING1b在NSCLC发生、发展中的可能作用机制。方法用免疫组化S_P法检测p33ING1b在61例NSCLC和13例正常肺组织中的表达,以及p21WAF1在61例NSCLC组织中的表达。结果p33ING1b在NSCLC组织中阳性率低于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.01)。p33ING1b低表达与肺癌的分化、分期及淋巴结转移均有关。p33ING1b与p21WAF1表达呈正相关(P<0.01)。结论p33ING1b在NSCLC中低表达,它的低表达对判断NSCLC恶性程度、浸润甚至转移有重要价值;p33ING1b的低表达使p21WAF1下调在NSCLC发生、发展中可能起重要作用。 相似文献
994.
目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(c125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2,温度诱导表达.表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生。经Western印迹(WesternBlot)证明为rhlL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。 相似文献
995.
人血管内皮细胞生长因子基因克隆、表达与纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究人血管内皮细胞生长因子121(hVEGF121)基因在pET-24a(+)中的表达,获得高效表达、具有生物学活性的rhVEGF121。方法提取人原髓白血病细胞(HL60)总RNA,RT-PCR扩增hVEGF121基因,经DNA序列分析后,克隆于高效原核表达载体pET-24a(+),并转化到大肠杆菌B121(DE3)中,经IPTG诱导表达,超滤复性,DEAESephamseFastFlow阴离子交换和SephacryS-100分子筛色谱纯化后,以HUVEC测定其生物学活性。结果SDS-PAGE结果显示,目的蛋白质以包涵体形式存在,表达量达菌体总蛋白质的20%,纯化后rhVEGF121纯度达95%以上,生物学活性检测证实,具有刺激HUVEC增殖的功能。结论在原核系统中实现了hVEGF121的高效表达。 相似文献
996.
目的构建以人HBsAg单链抗体(HBScFv)为导向作用、α干扰素为治疗作用的融合蛋白酵母表达载体pPICZ-αB/ScFv-IFN-α。方法通过重叠PCR构建目的蛋白质基因,再亚克隆到酵母表达载体pPICZαB中,DNA测序后,转化巴氏毕赤酵母宿主菌GS115 ,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定重组酵母,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS PAGE分析鉴定表达产物。结果DNA测序结果显示构建的目的基因片段(HBScFv IFN-α)的序列与原设计序列相符合;菌落PCR结果显示目的基因已整合到酵母菌中;诱导表达后,SDS PAGE结果显示在相对分子质量约4 4 0 0 0处可见目的蛋白质表达带。结论成功构建了抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体 相似文献
997.
门冬氨酸左氧氟沙星与其他左氧氟沙星盐的药动学比较 总被引:2,自引:0,他引:2
目的对门冬氨酸左氧氟沙星与其他左氧氟沙星盐在大鼠体内进行了药动学比较。方法以替硝唑为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,采用高效液相的方法进行了测定。结果线性范围0.5~25μg/m l,日内、间精密度RSD均<6%,平均回收率大于89%。大鼠腹腔注射门冬氨酸左氧氟沙星、盐酸左氧氟沙星、乳酸左氧氟沙星和左氧氟沙星,测定不同时间的药物浓度,所得的主要药物动力学参数:门冬氨酸左氧氟沙星t1/2K a=7.461m in、t1/2α=16.499m in、t1/2β(m in)=218.989m in、tm ax=22.600m in、AUC=1202.262(μg.m in)/m l;盐酸左氧氟沙星t1/2K a=0.064m in、t1/2K e=24.155m in、tm ax=3.433m in、Cm ax=10.946μg/m l、AUC=420.925(μg.m in)/m l;乳酸左氧氟沙星t1/2K a=0.409m in、t1/2K e=13.576m in、tm ax=2.131m in、Cm ax=13.042μg/m l、AUC=282.797(μg.m in)/m l;左氧氟沙星t1/2K a=0.977m in、t1/2K e=8.519m in、tm ax=3.448m in、Cm ax=13.624μg/m l、AUC=221.667(μg.m in)/m l。结论门冬氨酸左氧氟沙星在大鼠体内的生物利用度比左氧氟沙星及其盐有所提高。 相似文献
998.
目的建立金黄色葡萄球菌耐药转运蛋白NorA免疫检测方法。方法利用琼脂稀释法测定诺氟沙星(NFLX)对临床分离的6株金葡菌和标准菌株ATCC25923的MIC。对norA基因进行克隆、表达,提取表达产物包涵体,并进行了纯化。将纯化的表达蛋白作为免疫原免疫家兔,获取NorA蛋白的抗体血清。利用制得的抗体通过Western blotting检测临床分离的6株金葡菌的NorA蛋白表达水平。结果氟喹诺酮类药物耐药水平较高的临床分离金葡菌菌株的NorA蛋白表达水平一般较高,敏感菌株的耐药水平较低且接近。结论免疫检测方法可用于检测金葡萄菌耐药转运蛋白NorA的表达水平。 相似文献
999.
天然内生抗菌多肽elafin真核表达载体的构建及在真核细胞的表达 总被引:3,自引:1,他引:3
采用RT-PCR法提取天然内生抗菌多肽elafin的基因,通过测序确认后亚克隆构建真核表达载体pEGFP-N1-elafin,再转染至肺上皮细胞A549,荧光显微镜观察pEGFP-N1-elafin在细胞中表达及定位,采用Northern杂交、ELISA检测法分别从转录及蛋白质水平分析表达情况,最后通过酶切电泳鉴定证实真核表达载体pEGFP-N1-elafin构建成功,其转染细胞中有elafin的基因表达,且细胞上清液中elafin含量证实其主要是分泌性表达。Elafin基因cDNA真核表达载体的成功构建以及主要呈分泌性表达的特点显示了极具意义的潜在应用价值。 相似文献
1000.
目的:探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)表达的变化以及地塞米松对其影响.方法:复制大鼠哮喘模型,随机分成3组:正常对照组、哮喘对照组和地塞米松(DEX)干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量和肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察气道阻力、BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化.结果:哮喘对照组大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平及气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P<0.01);DEX干预组上述指标较哮喘对照组显著降低(P<0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻.肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.77、0.63、0.65,P<0.01).结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.DEX对哮喘的治疗作用至少部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关. 相似文献